微生物檢驗在肺部曲霉菌感染診斷中的應用

石書凡

作者單位：418000 湖南懷化，懷化市第一人民醫(yī)院檢驗科

肺部曲霉菌感染在臨床中比較多見，是一種發(fā)病率較高的感染性疾病，可導致患者肺部啰音增多、持續(xù)高熱、呼吸困難、咯血以及咳嗽。肺部曲霉菌可侵襲肺部血管，破壞肺部組織，引起嚴重的炎癥反應，甚至導致肺組織糜爛壞死，危害患者生命安全［1］。曲霉菌在自然界中廣泛存在，也可分布于空氣中，且生命力較強，對環(huán)境具有良好的適應能力，同時還能耐受高溫，因此人體一旦發(fā)生曲霉菌感染，則容易造成范圍較廣的傳播，且很難徹底清除病原體［2］。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，幫助患者及時控制病情具有重要的臨床意義。現(xiàn)階段臨床對肺部曲霉菌感染患者的診斷通常以微生物檢驗為主要參考，但是采用不同的微生物檢驗方法，其陽性檢出率也會有所不同，從而導致臨床治療效果出現(xiàn)較大差異［3］。本研究以77例肺部曲霉菌感染患者作為研究對象，對所有患者進行血漿1，3-β-D-葡聚糖試驗（1，3-β-D-glucan test，G試驗）、痰培養(yǎng)以及半乳甘露聚糖試驗（galactomannan test，GM試驗），比較不同方法所得檢測結果，旨在尋找最佳的微生物檢驗方法，以供臨床參考，現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象與一般資料 選擇2019年12月—2020年12月本院收治的77例肺部曲霉菌感染患者作為研究對象，其中男性44例，女性33例；年齡35～77歲，平均（55.4±12.2）歲。所有患者經(jīng)病理組織學檢查診斷明確，41例為侵襲型肺部曲霉感染，36例為寄生型肺部曲霉感染。

1.1.1納入標準 ① 通過多次痰培養(yǎng)和影像學檢查，結合患者臨床癥狀以及病理組織學檢查，證實為肺部曲霉菌感染；② 患者基礎資料完整；③ 患者無其他肺部疾病。

1.1.2排除標準 ① 合并其他器質性疾?。虎?有神經(jīng)系統(tǒng)疾病史；③ 存在其他感染性疾病；④ 近6個月內參與過其他研究。

1.1.3倫理學 本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》的相關要求，并通過本院倫理審批（審批號：20210126），所有對患者的檢測均獲得過患者或家屬的知情同意。

1.2研究方法 所有研究對象在入院后均接受微生物檢驗。

1.2.1G試驗 根據(jù)光學纖維支氣管鏡（纖支鏡）操作規(guī)程，由專業(yè)醫(yī)師進行操作，負壓吸出清潔肺泡的生理鹽水以獲得受檢者支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）作為檢驗樣本。采用直接劃線法接種于沙保羅平皿，在34～36 ℃恒溫環(huán)境中放置培養(yǎng)皿，持續(xù)孵育24 h，觀察培養(yǎng)皿中的菌落變化，詳細記錄菌落形態(tài)、顏色。然后在潔凈的玻片上放置疑似曲霉菌標本，使用棉藍染液進行染色處理，置于顯微鏡下仔細觀察，如果菌絲分支間隔45°，則判定為曲霉菌陽性。

1.2.2痰培養(yǎng) 以患者痰液作為檢驗樣本，采用直接劃線法接種于沙保羅平皿，在34～36 ℃恒溫環(huán)境中放置培養(yǎng)皿，持續(xù)孵育24 h，然后細致觀察培養(yǎng)皿中菌落的形態(tài)和顏色變化。若觀察到菌落有以下特征，則初步判定為曲霉菌陽性：① 呈黑色、放射圓柱狀或放射狀；② 呈綠色或黃褐色且表現(xiàn)為圓柱狀或球形；③ 呈青灰色或灰黃色圓柱狀。

1.2.3GM試驗 所有患者空腹8 h后采集5 mL靜脈血，以3 000 r/min（離心半徑為5 cm）離心10 min，留取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定血清中半乳甘露聚糖（galactomannan，GM）抗原，當結果＞10.5 ng/L時，判定為曲霉菌陽性。

1.3觀察指標 參照病理組織學檢查診斷結果，分析并比較G試驗、痰培養(yǎng)、GM試驗等不同微生物檢驗方法的陽性檢出率。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行錄入和處理。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。組間差異以P值進行判定，檢驗水準α設置為0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

3種微生物檢驗方法所得結果中，GM試驗的陽性檢出率最高，達到97.40%（75/77）；其次為G試驗，陽性檢出率為88.31%（68/77）；痰培養(yǎng)的陽性檢出率最低，為75.32%（58/77）。不同微生物檢驗方法結果比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表1。

3 討論

曲霉菌是自然界中較常見的真菌，同時也是誘發(fā)呼吸道感染的致病菌，而且還會嚴重侵襲人體肺部和腦部。由于曲霉菌廣泛分布于空氣中，加之其具有頑強的生命力、優(yōu)良的適應性以及耐高溫等特點，極易大范圍傳播，如果不及時加以控制，曲霉菌便會進一步破壞肺部血管，引起嚴重的肺部炎癥，危害患者生命安全。因此，臨床需要及時對肺部曲霉菌感染進行準確診斷，以便采取針對性治療措施，減緩病情的進展速度，達到改善患者預后的目的。

有研究顯示，空氣中的每個曲霉菌菌體內都存在上千個孢子，這些孢子能夠進行無性繁殖，產(chǎn)生無性孢子。當接觸這些微生物后，孢子會進入人體，定植于肺部并不斷生長繁殖，導致組織潰爛壞死，損傷患者肺功能，甚至因為肺功能衰退而危及生命［4］。

肺部曲霉菌感染一般可分為寄生型和侵襲型兩種，寄生型肺部曲霉菌感染主要表現(xiàn)為咯血、咳嗽；侵襲型肺部曲霉菌感染通常表現(xiàn)為呼吸困難、持續(xù)高熱不退［5］。因此，臨床在治療肺部曲霉菌感染患者時需要根據(jù)實際癥狀體征給予相應的干預措施，從而有助于改善預后。目前臨床常用卡泊芬凈和伏立康唑治療侵襲型肺部曲霉菌感染，若用藥后效果欠佳，則考慮手術治療。而對寄生型肺部曲霉菌感染患者則需要針對患者實際咯血情況，直接進行手術或給予聯(lián)合用藥治療，以確?；颊忒熜M意［6］。與其他疾病比較，肺部曲霉菌感染的發(fā)病率雖然不高，但是多數(shù)患者發(fā)病后的臨床癥狀并不十分典型［7］。在肺部腫瘤、支氣管擴張、支氣管哮喘等疾病患者中，肺部感染曲霉菌的風險較高，且臨床治療期間患者需長期使用激素類藥物，可能會加重癥狀，而通過加強CT掃描觀察可發(fā)現(xiàn)肺部陰影模糊，呈片狀，故而早期進行有效診斷，這對于挽救患者生命至關重要［8］。目前對肺部曲霉菌感染的研究報道較少，由于缺乏高效的檢驗技術以及大眾對該疾病認知度較低，使得治療效果并不令人滿意，因此亟需探索一種高效的診斷技術，幫助臨床制定有效的治療方案。

目前，臨床常用微生物檢驗方法診斷肺部曲霉菌感染，本研究對常用方法進行比較分析，結果顯示G試驗的陽性檢出率為88.31%，痰培養(yǎng)的陽性檢出率為75.32%，GM試驗的陽性檢出率為97.40%，不同檢驗方法所得結果比較差異均有統(tǒng)計學意義。

既往臨床常用痰培養(yǎng)方法對肺部曲霉菌感染患者進行診斷，對采集的痰液進行細菌微生物培養(yǎng)，可從中分離獲得病原菌，作為初步診斷依據(jù)［9］。但痰培養(yǎng)的陽性檢出率較低，有待進一步對操作進行優(yōu)化，提高檢出率［10］。G試驗屬于真菌檢測試驗，在現(xiàn)代臨床中得到廣泛的應用，可檢驗真菌的細胞壁成分，進而判定曲霉菌陽性，在早期診斷深部真菌感染中，G試驗備受青睞［11］。GM試驗操作期間主要檢測半乳甘露聚糖，不僅可以良好地反映出患者肺部實際感染狀況，而且還能在臨床治療中多次進行檢驗操作，具有良好的可重復性；GM試驗結果有助于醫(yī)務工作者掌握患者實際病情發(fā)展狀況，從而為后期治療方案的調整提供可靠的參考依據(jù)［12］。李美麗［13］研究中觀察分析了162例肺部曲霉菌患者的微生物檢驗結果，發(fā)現(xiàn)GM試驗對侵襲型肺部曲霉菌感染的檢出率為77.05%，對寄生型肺部曲霉菌感染的檢出率為75.25%；G試驗對侵襲型肺部曲霉菌感染的檢出率為63.93%，對寄生型肺部曲霉菌感染的檢出率為58.42%；痰培養(yǎng)對侵襲型肺部曲霉菌感染的檢出率為31.15%，對寄生型肺部曲霉菌感染的檢出率為44.55%。以上與本研究結果相符，因此認為GM試驗準確度較G試驗、痰培養(yǎng)更高。侯振鋼［14］對照觀察了57例侵襲型肺部曲霉菌感染患者的微生物檢驗結果，顯示GM試驗檢出18例陽性，陽性檢出率為31.58%，與臨床診斷高度一致。為進一步提高陽性檢出率，臨床可以同時進行多種微生物檢測，確?；颊咧委煼桨父涌茖W、合理。

綜上所述，在肺部曲霉菌感染患者中，GM試驗的陽性檢出率較G試驗、痰培養(yǎng)更高，有助于指導臨床及時診斷并給予有效治療，值得推廣借鑒。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突