促進(jìn)臍血造血干/祖細(xì)胞植入策略的研究進(jìn)展

寧柳心，郝思國(guó)

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院血液科，上海200092

1988 年，一位患范科尼貧血（Fanconi anemia）的5 歲患兒首次應(yīng)用人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）相合的同胞臍血移植獲得成功，患者獲得長(zhǎng)期的無(wú)病生存［1］，由此拉開(kāi)了臍血移植（cord blood transplantation，CBT）臨床應(yīng)用的序幕。此后非血緣的CBT 不僅在非惡性血液病患者中被應(yīng)用，而且在惡性血液病患者中也取得了令人滿意的效果。近數(shù)十年來(lái)，CBT在全球獲得推廣應(yīng)用。

CBT 不僅來(lái)源豐富、采集方便，同時(shí)具有病毒污染概率小、供體無(wú)風(fēng)險(xiǎn)、可快速獲得、能滿足急需移植患者的需求等優(yōu)點(diǎn)。另外，移植后移植物抗宿主?。╣raft versus host disease，GVHD）特別是慢性GVHD（chronic GVHD，cGVHD）的發(fā)生率低且程度輕。然而，雖然CBT 的GVHD 程度較輕，但其誘導(dǎo)的移植物抗白血?。╣raft-versus-leukemia，GVL）效應(yīng)并不減弱。近年的研究［2］顯示，急性白血病患者接受CBT 后復(fù)發(fā)率顯著低于非血緣外周血干細(xì)胞移植（peripheral blood stem cell transplantation，PBSCT）。動(dòng)物模型研究［3］顯示，臍血中的T細(xì)胞較外周血T細(xì)胞具有更強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)。在動(dòng)物模型中，外周血T 細(xì)胞所誘導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)與異種反應(yīng)性（xenoreactivity）相關(guān)，而臍血T 細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)則是由同種異體反應(yīng)性（alloreactivity）所誘導(dǎo)。在臍血T細(xì)胞處理的動(dòng)物模型中，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumorinfiltrating lymphocytes，TILs）主要為CD8+T 細(xì)胞，是抗腫瘤的主要效應(yīng)細(xì)胞，CD8+TILs 分泌的細(xì)胞因子主要為腫瘤壞死因子-α 和穿孔素，CD4+TILs 主要為輔助性T細(xì)胞1；而外周血T 細(xì)胞處理的動(dòng)物模型中，TILs 中CD8+T細(xì)胞的比例明顯降低，CD8+TILs分泌的腫瘤壞死因子-α 和穿孔素顯著減少，CD4+TILs 主要為輔助性T 細(xì)胞2。這些研究結(jié)果提示臍血T 細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)顯著強(qiáng)于外周血T 細(xì)胞。但是，由于單份臍血中造血干/祖細(xì)胞（hematopoietic stem/progenitor cell，HSPC） 數(shù)目較少，單份臍血所含的有核細(xì)胞（total nucleated cell，TNC）數(shù)僅為骨髓移植（bone marrow transplantation，BMT）或PBSCT 的1/20～1/10，導(dǎo)致行CBT 后造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)重建較BMT或PBSCT明顯延遲，發(fā)生植入失敗、感染及移植相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)較大［4］。因此，如何彌補(bǔ)臍血這些不足是提高CBT 治療效果的關(guān)鍵，目前的策略主要有以下4個(gè)方面。

1 雙份臍血移植

為了提高臍血的TNC 數(shù)量，20世紀(jì)90年代明尼蘇達(dá)大學(xué)研究小組首先嘗試了雙份臍血移植（double CBT，DCBT） 研究［5］，結(jié)果顯示6 個(gè)月的移植相關(guān)死亡率（transplantation related mortality，TRM）為22%，1 年的無(wú)病生存（disease free survival，DFS）率為57%，證明了DCBT 的可行性和安全性。但所有DCBT 中只有1 份臍血植活，這份植入的臍血稱為優(yōu)勢(shì)植入臍血。同時(shí)該研究結(jié)果提示，接受DCBT 的患者表現(xiàn)出快速造血恢復(fù)。此外，該研究組于2009 年首次發(fā)表了單份臍血移植（single CBT，SCBT）和DCBT 比較的單中心研究［6］結(jié)果：2組患者中性粒細(xì)胞和血小板植入時(shí)間相似，植入率也無(wú)明顯差異；但是DCBT 組急性GVHD（acute GVHD，aGVHD）和cGVHD 的發(fā)生率顯著高于SCBT 組，而5 年白血病復(fù)發(fā)率顯著低于SCBT 組（P=0.04），尤其是急性淋巴細(xì)胞白血病患者；2 組患者無(wú)白血病生存期（leukemia free survival，LFS） 和 總 體 生 存 期（overall survival， OS） 沒(méi) 有 差 異。 歐 洲 臍 血 移 植 協(xié) 作 組（Eurocord）對(duì)SCBT 和DCBT 也進(jìn)行了比較分析，結(jié)果顯示2組移植后非復(fù)發(fā)死亡率及白血病復(fù)發(fā)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是DCBT 組患者的aGVHD 和cGVHD 發(fā)生率顯著高于SCBT 組，而DCBT 組的LFS 顯著優(yōu)于SCBT組［7］。因此，SCBT和DCBT究竟孰優(yōu)孰劣，尚存爭(zhēng)議。

此外，明尼蘇達(dá)大學(xué)Wagner 教授領(lǐng)銜開(kāi)展了首個(gè)國(guó)際多中心SCBT 和DCBT 的隨機(jī)對(duì)照研究［8］。結(jié)果顯示，DCBT 組和SCBT 組患者1 年總體生存率分別為65%和73%（P=0.17），而且2 組移植患者的DFS、中性粒細(xì)胞植入時(shí)間、TRM、移植后疾病復(fù)發(fā)率、免疫重建時(shí)間、Ⅱ～Ⅳ度aGVHD 以及感染發(fā)生率等差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不過(guò)有趣的是，SCBT 組血小板的植入更快，Ⅲ、Ⅳ度aGVHD 以及廣泛型cGVHD 的發(fā)生率更低。為了驗(yàn)證這一發(fā)現(xiàn)，法國(guó)Michel 等［9］也進(jìn)行了一項(xiàng)多中心的隨機(jī)對(duì)照研究，研究包括數(shù)據(jù)完整的患者137 例，其中SCBT 組68 例、DCBT 組69 例。結(jié)果顯示，DCBT 組在中性粒細(xì)胞和血小板植入時(shí)間、OS、DFS 方面顯示出略微優(yōu)勢(shì)，但與SCBT 組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2 組患者的移植后復(fù)發(fā)率無(wú)明顯差異，但DCBT組的復(fù)發(fā)時(shí)間較SCBT組顯著延遲（P=0.04），DCBT組的中位復(fù)發(fā)時(shí)間為282.4 d，而SCBT 組為164.9 d。同時(shí)亞組分析顯示，在應(yīng)用含氟達(dá)拉濱、環(huán)磷酰胺聯(lián)合全身照射預(yù)處理的患者中，DCBT的復(fù)發(fā)率（7.1%）低于SCBT（21.9%，P=0.05）；2 組的GVHD 發(fā)生率無(wú)顯著差異，不過(guò)DCBT 組廣泛型cGVHD的發(fā)生率高于SCBT組。

2 臍血HSPC體外擴(kuò)增

體外擴(kuò)增是解決臍血HSPC數(shù)量不足的重要策略，多年來(lái)血液學(xué)家一直致力于臍血HSPC體外擴(kuò)增的研究。但擴(kuò)增的難題主要在于增加TNC 數(shù)量的同時(shí)，HSPC 也不可避免地發(fā)生了分化，導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物中較為原始的HSPC數(shù)量較少，從而影響擴(kuò)增產(chǎn)物的植入。因此，如何在擴(kuò)增HSPC 數(shù)量的同時(shí)避免HSPC 的過(guò)度分化是提高臍血HSPC 擴(kuò)增質(zhì)量的關(guān)鍵。目前，優(yōu)化臍血HSPC 體外擴(kuò)增的方式主要有以下5個(gè)方面。

2.1 含Notch配體的擴(kuò)增體系

Notch 信號(hào)通路是重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，Notch配體可通過(guò)結(jié)合HSPC 表面的Notch 1～4 調(diào)節(jié)其生長(zhǎng)和增殖過(guò)程［10］。在純化的CD34+細(xì)胞中加入重組的Notch 配體Delta 1，與干細(xì)胞因子、白介素-3、白介素-6、血小板生成素和Fms 樣酪氨酸激酶3 配體（Fms-related tyrosine kinase 3 ligand， FLT-3L）共同培養(yǎng)16 d，CD34+細(xì)胞平均擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)222 倍［11］。應(yīng)用此擴(kuò)增體系進(jìn)行首次臨床試驗(yàn)，對(duì)10 位患者進(jìn)行DCBT，將其中一份臍血的CD34+細(xì)胞分離并進(jìn)行體外擴(kuò)增，另一份臍血未經(jīng)處理；在未經(jīng)處理的臍血輸注4 h 后，輸注擴(kuò)增的CD34+細(xì)胞。結(jié)果顯示，患者的中性粒細(xì)胞和血小板植入的中位時(shí)間分別為16 d和26 d，但3個(gè)月后外周血嵌合度分析結(jié)果表明維持造血功能的細(xì)胞大多來(lái)源于未經(jīng)處理的臍血，提示擴(kuò)增的臍血細(xì)胞可以促進(jìn)臍血的早期植入，但擴(kuò)增的細(xì)胞主要為較晚期的HSPC［11］。

2.2 含銅螯合劑的擴(kuò)增體系

銅離子作為多種細(xì)胞酶的輔助因子，在細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。高親和力銅螯合劑四乙基五胺（TEPA）能夠抑制細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)的早期HSPC 分化，可在不影響HSPC分化能力的前提下增加其自我更新的能力。研究［12］證實(shí)，使用TEPA 處理臍血HSPC 后，可增強(qiáng)其長(zhǎng)期擴(kuò)增潛能。TEPA 通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)銅離子濃度，延遲HSPC 分化，提高擴(kuò)增產(chǎn)物中原始的HSPC 含量和增殖活性從而促進(jìn)臍血植入［13］。一項(xiàng)大規(guī)模多中心的臨床研究［14］采用經(jīng)特殊處理的SCBT 治療惡性血液病患者101 例，移植結(jié)果與同期接受DCBT 的295 例患者進(jìn)行了比較。SCBT 中的部分臍血（20%～50%） 使用含有TEPA、FLT-3L、白介素-6、血小板生成素和干細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系擴(kuò)增培養(yǎng)3 周后進(jìn)行移植，結(jié)果顯示中位TNC 數(shù)和CD34+細(xì)胞分別擴(kuò)增至原先的400 倍和77 倍，CD34+細(xì)胞平均輸注量達(dá)9.7×105/kg。中性粒細(xì)胞植入時(shí)間（21 d vs 28 d，P＜0.000 1）和血小板植入時(shí)間（54 d vs 105 d，P=0.008） 與同期DCBT 組相比顯著縮短，100 d的存活率顯著提高（84.2%vs 74.6%，P=0.035），表明用TEPA 聯(lián)合細(xì)胞因子進(jìn)行擴(kuò)增的臍血可顯著縮短植入時(shí)間、改善患者預(yù)后。

2.3 含煙酰胺的擴(kuò)增體系

煙酰胺（nicotinamide，NAM）是維生素B3 的衍生物、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）的前體和NAD 分解酶的有效抑制劑。臨床前研究［15］已證實(shí)采用NAM 聯(lián)合細(xì)胞因子培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞可使其顯著擴(kuò)增，并可抑制其在體外過(guò)度分化。一項(xiàng)近期的臨床試驗(yàn)研究［16-17］中，36 例患者采用清髓性預(yù)處理（myeloablative conditioning，MAC）方案后行DCBT，同時(shí)輸注一份未經(jīng)處理的臍血和另一份采用NAM 擴(kuò)增21 d 的臍血。結(jié)果顯示，與國(guó)際血液和骨髓移植研究中心統(tǒng)計(jì)的行CBT （80% 為DCBT，20% 為SCBT）且臨床特征相近的患者（n=146）的移植結(jié)果相比，接受經(jīng)NAM 擴(kuò)增處理臍血的患者，中性粒細(xì)胞和血小板植入的中位時(shí)間分別為11.5 d 和34 d，分別縮短了9.5 d（P＜0.001）和12 d（P＜0.001）。該研究證實(shí)了NAM擴(kuò)增體系用于離體擴(kuò)增臍血的可行性、安全性和有效性。另一項(xiàng)研究［18］同樣也表明應(yīng)用NAM 擴(kuò)增體系擴(kuò)增的臍血移植后中性粒細(xì)胞植入更快，感染發(fā)生率更低，100 d內(nèi)住院時(shí)間更短。

2.4 含StemRegenin-1的擴(kuò)增體系

StemRegenin-1（SR1）是一種嘌呤衍生物，通過(guò)拮抗HSPC 中高表達(dá)的芳烴受體（aryl hydrocarbonreceptor，AHR）調(diào)控造血干細(xì)胞的自我更新和增殖［19］。明尼蘇達(dá)大學(xué)的研究小組［20］報(bào)道，用含SR1 的擴(kuò)增體系培養(yǎng)HSPC 可使CD34+細(xì)胞擴(kuò)增50 倍，提高小鼠移植模型的植入率。Wagner 等［21］報(bào)道了一項(xiàng)使用SR1 擴(kuò)增臍帶血的臨床研究結(jié)果，17 名患者在MAC 后接受了DCBT，在移植前15 d 從細(xì)胞數(shù)量較少的臍血中分離出CD34+細(xì)胞，用SR1 聯(lián)合FLT-3L、血小板生成素和白介素-6 共同培養(yǎng)，而剩下的CD34-細(xì)胞則重新冷凍保存。移植當(dāng)天，先將另一份未處理的細(xì)胞數(shù)量較多的臍血解凍并輸入患者體內(nèi)，4 h 后將擴(kuò)增后的CD34+細(xì)胞和解凍的CD34-細(xì)胞一起輸注。結(jié)果顯示，擴(kuò)增的臍血TNC 數(shù)量中位數(shù)擴(kuò)增了854 倍，CD34+細(xì)胞擴(kuò)增了330 倍。所有患者均成功植入，擴(kuò)增的臍血在65%（11/17）的患者中成功植入，并且具有持久的植入（中位隨訪時(shí)間272 d），未處理的臍血在剩余6 名患者中成功植入。和歷史對(duì)照相比，中性粒細(xì)胞（中位天數(shù)：15 d vs 24 d）和血小板（中位天數(shù)：49 d vs 89 d，P=0.001）的植入時(shí)間顯著縮短，住院時(shí)間亦顯著縮短，并且在aGVHD、TRM 和OS方面無(wú)顯著差異。這一研究結(jié)果提示擴(kuò)增的臍血同樣可以長(zhǎng)期植入。

2.5 含間充質(zhì)干細(xì)胞的共培養(yǎng)擴(kuò)增體系

間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是造血微環(huán)境中重要的細(xì)胞成分，可通過(guò)直接接觸或分泌細(xì)胞因子等方式調(diào)控造血細(xì)胞的增殖和分化。通過(guò)MSCs來(lái)模擬體內(nèi)造血環(huán)境，可避免擴(kuò)增培養(yǎng)中HSPC的過(guò)度分化［22］。最近的相關(guān)研究［23-24］發(fā)現(xiàn)臍帶血HSPC 在低氧條件下與MSCs 共培養(yǎng)更能保持其干性。本研究組［25］早在21 世紀(jì)初就曾嘗試應(yīng)用MSCs 擴(kuò)增體系來(lái)擴(kuò)增臍血，含有MSCs 的擴(kuò)增組在各時(shí)間點(diǎn)的TNC 數(shù)均顯著高于對(duì)照組，TNC 中CD34+細(xì)胞、CD133+細(xì)胞、CD34+CD38-細(xì)胞以及CD34+CD133+細(xì)胞的比例也顯著高于對(duì)照組；而且含有MSCs的擴(kuò)增組各時(shí)間點(diǎn)各種祖細(xì)胞集落的種植率顯著高于對(duì)照組，提示該擴(kuò)增體系中較為原始的HSPC含量較高。de Lima 等［26］對(duì)31 例患者進(jìn)行了相關(guān)臨床研究，將一份擴(kuò)增的臍血與另一份未擴(kuò)增的臍血同時(shí)輸注，7位患者M(jìn)SCs來(lái)源于親緣相關(guān)的半相合供體，其余患者接受第三方工業(yè)化生產(chǎn)的MSCs產(chǎn)品。雙份臍血中細(xì)胞數(shù)量較少的一份在移植前2 周解凍，與MSCs 共培養(yǎng)，并加入干細(xì)胞因子、FLT-3L、血小板生成素和粒細(xì)胞集落刺激因子。結(jié)果顯示，CD133+CD33+細(xì)胞和CD34+CD38-細(xì)胞顯著增加；培養(yǎng)2 周后，TNC 和CD34+細(xì)胞分別擴(kuò)增至12.2 倍和30.1 倍。與未擴(kuò)增的臍血相比，擴(kuò)增臍血輸注的TNC和CD34+細(xì)胞中位數(shù)量增加了1倍以上。將未處理的臍血在移植當(dāng)天解凍并輸注，然后輸注擴(kuò)增的臍血。與歷史對(duì)照相比，中性粒細(xì)胞和血小板的中位植入時(shí)間縮短了1 周或1 周以上，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而aGVHD和cGVHD的發(fā)生率無(wú)顯著差異。但移植后6個(gè)月時(shí)檢測(cè)提示僅有13%的患者體內(nèi)存在擴(kuò)增的臍血，而超過(guò)1 年的檢測(cè)提示患者體內(nèi)造血細(xì)胞均來(lái)自未擴(kuò)增的臍血，提示含MSCs 的擴(kuò)增體系中HSPC 仍難以維持長(zhǎng)期造血，只能維持短期造血重建［27］。

3 促進(jìn)臍血HSPC的歸巢

CBT 除了通過(guò)DCBT 以及離體擴(kuò)增來(lái)解決單份臍血HSPC 數(shù)量不足的問(wèn)題外，促進(jìn)臍血HSPC 歸巢也可改善臍血植入［28］。目前該方面的研究主要集中在以下2 個(gè)方向。

3.1 骨髓腔內(nèi)直接注射臍血

目前，CBT 通常通過(guò)靜脈輸注的方式，但在靜脈輸注的過(guò)程中，臍血HSPC易被宿主通過(guò)多種機(jī)制扣留，導(dǎo)致歸巢至骨髓的有效細(xì)胞數(shù)量減少，將臍血直接注射到骨髓腔可以加快HSPC的歸巢［29］。Murata等［30］開(kāi)展了一項(xiàng)骨髓腔內(nèi)直接注射單份臍血的Ⅱ期臨床研究，共納入21 例惡性血液病患者，沒(méi)有觀察到與骨內(nèi)注射有關(guān)的嚴(yán)重不良事件，結(jié)果顯示中性粒細(xì)胞和血小板植入的中位時(shí)間分別為17 d 和32 d，Ⅱ～Ⅳ級(jí)和Ⅲ～Ⅳ級(jí)aGVHD 的發(fā)生率分別為44%和19%，證明了骨髓腔內(nèi)直接輸注臍血的安全性。此外，Okada 等［31］也開(kāi)展了相關(guān)臨床研究，共納入40 例血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者，在局部麻醉后分別將臍血注射到髂骨的4 個(gè)部位（每側(cè)2 個(gè)部位），每個(gè)部位大約注射6 mL臍血，結(jié)果顯示86.8%的患者獲得植入，中性粒細(xì)胞和血小板植入的累積發(fā)生率分別為86.4%和85.5%，植入的中位時(shí)間分別為17.5 d 和44 d，重度aGVHD 的發(fā)生率為47.5%，廣泛型cGVHD 的累積發(fā)生率為3%，這些結(jié)果表明骨髓腔內(nèi)直接注射臍血可改善造血系統(tǒng)重建并降低cGVHD 的發(fā)生率。最近，一項(xiàng)前瞻性臨床研究［32］統(tǒng)計(jì)了23 例接受單份臍血骨髓腔內(nèi)注射的患者，結(jié)果顯示注射后28 d 中性粒細(xì)胞植入的累積發(fā)生率為（77.3±9.0）%，90 d 中性粒細(xì)胞＞0.5×109/L 和血小板＞50×109/L 的累 積發(fā)生率分別為（82±9）%和（70±10）%，所有患者均未出現(xiàn)嚴(yán)重的aGVHD。該研究進(jìn)一步證明了骨髓腔內(nèi)注射臍血移植是可行的，可以促進(jìn)血液系統(tǒng)造血功能的恢復(fù)；同時(shí)證明了將臍血干細(xì)胞直接輸注到缺氧的造血干細(xì)胞壁龕中有助于保留其干性。

3.2 前列腺素E2的應(yīng)用

前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）具有刺激多系祖細(xì)胞增殖和歸巢的潛能。由于PGE2的半衰期短（1～2 min），在體外研究和臨床研究中常使用PGE2 的穩(wěn)定修飾物16，16-二甲基前列腺素E2（16，16-dimethyl-PGE2，dmPGE2）。dmPGE2可在體內(nèi)增加HSPC 數(shù)量而不影響其自我更新和分化潛能［33］。

這是通過(guò)調(diào)控HSPC 增殖和分化相關(guān)的Wnt/β-catenin信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的［34］。Cutler等［35］對(duì)12名接受DCBT的患者進(jìn)行了Ⅰ期臨床試驗(yàn)，旨在評(píng)估使用dmPGE2 離體處理單份臍血的安全性和治療效果。將細(xì)胞數(shù)量較多的一份臍血與10 μmol/L dmPGE2 在37 ℃下一起培養(yǎng)2 h 后輸注給患者，另一份未經(jīng)處理的臍血在4 h 后輸注。結(jié)果顯示中性粒細(xì)胞植入的中位時(shí)間為17.5 d，短于歷史對(duì)照的21 d（P=0.045）。此外，12 名患者中的10 名患者獲得處理臍血的長(zhǎng)期植入，推測(cè)dmPGE2促進(jìn)HSPC 歸巢的作用可能加速其植入，盡管可能也與dmPGE2 處理的臍帶血細(xì)胞數(shù)量較多有關(guān)。

4 第三方HSPC的應(yīng)用

應(yīng)用第三方HSPC 與臍血聯(lián)合移植（haplo-cord transplant）可能會(huì)加快臍血的植入。van Besien 等［36］在一項(xiàng)回顧性研究中比較了97 例接受單倍體干細(xì)胞聯(lián)合SCBT 和193 例接受DCBT 的惡性血液病患者，結(jié)果顯示前一組患者中性粒細(xì)胞和血小板植入更快，Ⅱ～Ⅳ級(jí)aGVHD 和cGVHD 發(fā)生率更低，復(fù)發(fā)率和無(wú)GVHD、無(wú)復(fù)發(fā)生存（GVHD-free relapse-free survival，GRFS）率也更低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，單倍體干細(xì)胞聯(lián)合CBT 對(duì)缺少HLA 匹配供者的患者而言也是一種較容易獲得的移植物來(lái)源。此外，有研究［37］報(bào)道了42 例單倍體干細(xì)胞聯(lián)合CBT 治療高危惡性血液病的患者，結(jié)果顯示中性粒細(xì)胞植入的中位時(shí)間為11 d，血小板植入的中位時(shí)間為19.5 d，1 年非復(fù)發(fā)死亡率為19%，3 年GRFS 率、無(wú)進(jìn)展生存率和總體生存率分別為53%、62%和65%，中位隨訪42 個(gè)月，與van Besien 等［36］的研究結(jié)果一致，表明接受單倍體干細(xì)胞聯(lián)合CBT 的患者在造血系統(tǒng)重建和GVHD的發(fā)生率方面均優(yōu)于DCBT組。

5 小結(jié)和展望

多種改善臍血植入的策略在基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中均取得了可喜的成績(jī)，但這些改進(jìn)措施尚不夠完善，其中許多機(jī)制尚不明確，仍有待于不斷改進(jìn)以及開(kāi)發(fā)更多更新的方法。隨著臍血體外擴(kuò)增、促進(jìn)歸巢等技術(shù)的研究和應(yīng)用，CBT 在惡性及非惡性血液病的治療中將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景。