三陰性乳腺癌相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNAs的研究進(jìn)展

李楊宏，韋柳興，盧冠銘

(1. 右江民族醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院，廣西 百色 533000；2. 右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腺體外科，廣西 百色 533000)

乳腺癌是起源于乳腺組織的惡性腫瘤，是世界各國婦女發(fā)病率逐漸上升的最常見癌癥，嚴(yán)重威脅婦女健康并逐漸成為一個(gè)社會(huì)共同關(guān)注的健康問題[1]。根據(jù)乳腺癌所表達(dá)的受體不同可分為以下4種：Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型、三陰性[2]。三陰性乳腺癌(tripele negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)均表達(dá)陰性的一種乳腺癌亞型，其生物學(xué)行為表現(xiàn)為侵襲性強(qiáng)、易復(fù)發(fā)和內(nèi)臟轉(zhuǎn)移、易產(chǎn)生耐藥性，預(yù)后不良[3-5]。TNBC因其具有特殊的生物學(xué)特征，對(duì)手術(shù)以外的其它治療方案效果均不理想，預(yù)后極差，因此急需尋找新的治療途徑來改善TNBC的預(yù)后。隨著新一代基因測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn)，長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs，LncRNAs)的功能逐漸成為研究者們的關(guān)注重點(diǎn)，對(duì)其分子機(jī)制的探索和可靠生物標(biāo)記物的開發(fā)有望為治療TNBC提供新思路。

1 LncRNAs的特征及功能

LncRNAs是一類新的非編碼RNA，通常定義為長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸的不編碼蛋白質(zhì)的特殊RNA分子[6]，它們由RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄，沒有開放的閱讀框[7]，由于它們?nèi)狈Ψg成蛋白質(zhì)的能力，曾一度被認(rèn)為是“轉(zhuǎn)錄噪音”[8-9]。近年來，通過對(duì)其不斷深入的研究，“轉(zhuǎn)錄噪聲”的觀點(diǎn)不再被認(rèn)可。大量文獻(xiàn)表明[10-13]LncRNAs具有廣泛的生物學(xué)功能，在細(xì)胞周期、凋亡、增殖，腫瘤發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移，以及血管生成等方面起著至關(guān)重要的作用。多項(xiàng)研究指出[14-16]，在不明確的難治性腫瘤中LncRNAs異常表達(dá)，且LncRNAs失調(diào)可通過調(diào)控細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移來促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。此外，LncRNAs還具有高效率、高組織特異性、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，可作為疾病診斷、治療及預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物和潛在治療靶標(biāo)[17-18]。

2 TNBC相關(guān)LncRNAs

基于LncRNAs高組織特異性這一特征，其在乳腺癌中的異常表達(dá)可作為鑒別正常組織、腫瘤組織及腫瘤亞型的一個(gè)臨床生物標(biāo)志物，有助于乳腺癌尤其是TNBC的早期診斷及治療。靶向LncRNAs也能對(duì)抗腫瘤的進(jìn)展，改善臨床前景。查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)多種與TNBC相關(guān)的LncRNAs，根據(jù)其對(duì)TNBC的作用大致可分為兩類：致癌性和抑癌性。經(jīng)過仔細(xì)篩查，選取了以下幾種研究相對(duì)較多或最新發(fā)現(xiàn)的LncRNAs，詳述它們的特征及其與TNBC的關(guān)系及意義。

2.1 抑癌性LncRNAs

2.1.1 LINC00993 LncRNA LINC00993是最近新發(fā)現(xiàn)的一種具有乳腺癌特異性的LncRNA，尤其對(duì)TNBC具有較強(qiáng)的抑癌作用。Guo SP等[19]首次對(duì)LINC00993進(jìn)行了功能性研究，采用qRT-PCR、生物信息學(xué)分析、RNA熒光原位雜交檢測(cè)、集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞學(xué)等方法在不同乳腺癌亞型的臨床樣本中檢測(cè)LINC00993的表達(dá)及對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，結(jié)果表明：LINC00993在體內(nèi)、外均可抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，且在TNBC中的表達(dá)被明顯下調(diào)，較高的表達(dá)擁有更好的預(yù)后。Chen C等[20]通過一系列實(shí)驗(yàn)證實(shí)LINC00993在乳腺癌中具有特異性，并且在乳腺癌組織中的表達(dá)常常失調(diào)。在激素受體表達(dá)型乳腺癌中表達(dá)較高，而在TNBC中則顯著下調(diào)。Chen C等[21]對(duì)48例乳腺癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，也得出了相同結(jié)論。由此可以認(rèn)為，LINC00993具有腫瘤抑制功能，尤其在TNBC中作用明顯。基于此結(jié)論，臨床上可以通過檢測(cè)其表達(dá)量來評(píng)估治療反應(yīng)、預(yù)后及監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)，并有望成為TNBC的潛在治療靶點(diǎn)，但目前研究證據(jù)較少，仍需更多數(shù)據(jù)來證實(shí)此觀點(diǎn)。

2.1.2 LncRNA 生長(zhǎng)停滯特異性轉(zhuǎn)錄本5(GAS5) GAS5是一種位于染色體1q25上，由12個(gè)外顯子組成的抑癌基因[22]，于1988年首次被Schneider C等[23]在篩選生長(zhǎng)停滯細(xì)胞中的高表達(dá)基因時(shí)發(fā)現(xiàn)。研究表明[24]GAS5的表達(dá)水平可調(diào)控癌細(xì)胞的增殖、侵襲、凋亡、上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和遷徙，雖然確切的分子機(jī)制還不清楚，但已證實(shí)GAS5在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用并且可能有預(yù)后價(jià)值。大量文獻(xiàn)[25-27]表明GAS5在許多癌癥中都表達(dá)下調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)和總體生存期有關(guān)。一項(xiàng)文獻(xiàn)[28]回顧分析了GAS5在白血病、宮頸癌、乳腺癌等腫瘤中的表達(dá)及其與多種miRNA的相互作用。普遍的共識(shí)是，GAS5在腫瘤中起著抑癌作用，并且其上調(diào)可增強(qiáng)腫瘤對(duì)放化療的敏感性。Ji JL等[29]指出GAS5能促進(jìn)TNBC和ER陽性乳腺癌細(xì)胞凋亡。為了明確GAS5在TNBC中的作用，Li JT等[30]通過一系列實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了GAS5在TNBC細(xì)胞中的表達(dá)，腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡；通過小鼠實(shí)驗(yàn)來研究GAS5在體內(nèi)的作用。結(jié)果提示，GAS5在TNBC組織和細(xì)胞系中低表達(dá)。過表達(dá)GAS5可明顯抑制TNBC細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡，從而調(diào)節(jié)TNBC的進(jìn)程，改善預(yù)后。研究提供的證據(jù)表明，上調(diào)的GAS5可抑制TNBC進(jìn)展，并提高TNBC的化學(xué)敏感性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Li SQ等[31]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TNBC組織中GAS5表達(dá)水平低，并且這種低表達(dá)與腫瘤的侵襲性、腫瘤表型、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及總體生存期呈負(fù)性相關(guān)。在TNBC細(xì)胞中使用異位過表達(dá)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)GAS5的上調(diào)可以顯著抑制TNBC細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這些數(shù)據(jù)均提示，GAS5在TNBC中扮演著抑癌的角色，且與預(yù)后有著密切關(guān)系，可能成為未來有希望的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，為我們治療TNBC提供新思路。

2.1.3 長(zhǎng)鏈非編碼RNA DRHC(LncRNA DRHC) LncRNA DRHC是肝癌中的腫瘤抑制因子，但有研究顯示[32]其在乳腺癌中具有相同的效應(yīng)，且與LncRNA HOTAIR表達(dá)具有相關(guān)性。與癌旁組織相比，在TNBC癌組織中LncRNA DRHC表達(dá)下調(diào)而HOTAIR表達(dá)上調(diào)，LncRNA DRHC表達(dá)水平與腫瘤大小相關(guān)，但與腫瘤轉(zhuǎn)移無關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在TNBC體外細(xì)胞系中過表達(dá)LncRNA DRHC導(dǎo)致LncRNA HOTAIR的表達(dá)降低，反之，抑制LncRNA DRHC的表達(dá)將提高LncRNA HOTAIR的表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)TNBC細(xì)胞系的增殖。然而，LncRNA HOTAIR過表達(dá)不影響LncRNA DRHC的表達(dá)水平，但可以減弱LncRNA DRHC對(duì)TNBC細(xì)胞增殖的抑制作用[32]?；诖搜芯拷Y(jié)果，我們可以通過上調(diào)LncRNA DRHC的表達(dá)來抑制LncRNA HOTAIR對(duì)TNBC的致癌作用。這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)為我們治療TNBC提供了另一個(gè)思考方向，但此觀點(diǎn)缺乏足夠的臨床前研究，尚需更多的證據(jù)來驗(yàn)證。

2.2 致癌性LncRNAs

2.2.1 LINC00511 LINC00511是一種定位于染色體17q24.3上，含有2265個(gè)核苷酸分子的致癌性LncRNA分子，能夠結(jié)合組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2指定p57上的組蛋白，在細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥等方面發(fā)揮調(diào)控作用[33-34]。多項(xiàng)研究[35-38]證實(shí)LINC00511在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤中過表達(dá)，且與預(yù)后不良有關(guān)。Liu L等[39]指出LINC00511在乳腺癌中表達(dá)水平明顯增加，且與術(shù)后、放療后復(fù)發(fā)及預(yù)后不良有關(guān)。下調(diào)LINC00511可以抑制細(xì)胞增殖，提高乳腺癌的體外放射敏感性。但該研究尚未對(duì)乳腺癌各亞型進(jìn)行分析。 Liu RL等[40]檢測(cè)了87例TNBC患者的癌組織及癌旁組織標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，TNBC癌組織中LINC00511的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常乳腺組織，且LINC00511與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有相關(guān)性；通過集落形成實(shí)驗(yàn)、CCK-8分析及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)LINC00-511可促進(jìn)體內(nèi)外腫瘤的增殖和侵襲，LINC00511的下調(diào)抑制了TNBC細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲。綜上所述，LINC00511很有可能成為治療TNBC新的生物靶標(biāo)，這為我們研究TNBC的治療方案提供了一條新的路徑，但目前針對(duì)LINC00511在TNBC中的研究證據(jù)較少，缺乏足夠依據(jù)指導(dǎo)臨床，仍需繼續(xù)進(jìn)行更多實(shí)驗(yàn)來探索LINC00511在TNBC中的作用及機(jī)制。

2.2.2 LINC00096 LINC00096是新篩選出來的、研究相對(duì)較少的一種致癌性RNA分子。Tian YY等[41]通過LncRNA微陣列鑒定了一個(gè)新的LINC00096，隨后的研究發(fā)現(xiàn)LINC00096在TNBC中的表達(dá)顯著上調(diào)，且其高表達(dá)與患者的總體生存期和無病生存期低相關(guān)，Kaplan-Meier分析提示LINC00096高表達(dá)與TNBC患者預(yù)后不良相關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)LINC00096在TNBC組織中的高表達(dá)與腫瘤分期、轉(zhuǎn)移、組織分化程度和Ki-67表達(dá)水平有關(guān)。此外，功能分析顯示，抑制LINC00096可降低TNBC細(xì)胞的增殖、集落形成和侵襲能力。Zhang S等[42]采用薈萃分析得出LINC00096的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性。由此可認(rèn)為L(zhǎng)INC00096可能是TNBC腫瘤發(fā)生過程中的一種致癌LncRNA分子，且與腫瘤分期、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)，有望成為治療TNBC的又一生物靶標(biāo)。然而，目前關(guān)于LINC00096與TNBC相關(guān)性的文獻(xiàn)較少，臨床意義缺乏足夠的證據(jù)來驗(yàn)證，尚需更多的實(shí)驗(yàn)研究來證實(shí)其在TNBC中的作用。

2.2.3 LncRNA HOTAIR 同源異型盒(HOX)基因是一類轉(zhuǎn)錄因子，能促進(jìn)胚胎發(fā)育并誘導(dǎo)腫瘤形成[43]。HOX轉(zhuǎn)錄物反義RNA(HOTAIR)是從HOXC基因簇的反義鏈產(chǎn)生并影響HOXD基因簇基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄物。 HOTAIR在從癌癥發(fā)生到轉(zhuǎn)移的各個(gè)階段都發(fā)揮著重要作用。有文獻(xiàn)[44]指出HOTAIR的致癌作用已在體內(nèi)外和人體的研究中得到了證實(shí) 。因此其表達(dá)水平可作為多種人類癌癥(例如乳腺癌)診斷和治療的潛在生物標(biāo)志物[45]。Shi SH等[46]和Arshi A等[47]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組織相比，乳腺癌組織中HOTAIR的表達(dá)顯著增加，且與腫瘤大小及分期呈正相關(guān)。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，HOTAIR的表達(dá)可以作為乳腺癌早期診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物，然而在乳腺癌各個(gè)亞型中，尤其是TNBC，是否可以得出相同的結(jié)論？Liang HG等[48]發(fā)現(xiàn)上調(diào)HOTAIR可以促進(jìn)TNBC癌細(xì)胞的侵襲和遷移。有文獻(xiàn)報(bào)道[49]在TNBC腫瘤組織中高HOTAIR表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并且與雄激素受體有直接的強(qiáng)相關(guān)性。由此可以認(rèn)為HOTAIR在乳腺癌各個(gè)亞型中具有相同作用，我們可以進(jìn)一步研究HOTAIR在乳腺癌各亞型中，尤其在TNBC中的意義及作用機(jī)制，找到治療TNBC的新途徑。

2.2.4 LncRNA H19 H19是母系表達(dá)的印跡基因，可編碼長(zhǎng)的非編碼RNA[50]。 LncRNA H19是H19基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，位于人類染色體11p15.5上，是最早報(bào)道的長(zhǎng)非編碼RNA之一[51]。LncRNA H19是一種潛在的致癌因子，有文獻(xiàn)指出[52]其在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤中過表達(dá)并促進(jìn)疾病的發(fā)生、發(fā)展，在致癌方面具有公認(rèn)的作用。Wang J等[53]研究表明LncRNA H19可以在多個(gè)水平調(diào)節(jié)乳腺癌中的基因表達(dá)，包括表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后，可以作為乳腺癌診斷的潛在生物標(biāo)志物。Wang YK等[54]通過大量實(shí)驗(yàn)證明LncRNA H19在乳腺組織中過表達(dá)，敲低LncRNA H19可誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡并阻止遷移和侵襲，而在TNBC中可以得到相同的結(jié)論。TNBC治療效果差的另一個(gè)方面表現(xiàn)在對(duì)化療藥物耐藥上，而紫杉醇是常用的乳腺癌化療藥。Han JG等[55]研究發(fā)現(xiàn)，在紫杉醇耐藥TNBC細(xì)胞中LncRNA H19的表達(dá)水平顯著高于紫杉醇敏感細(xì)胞，敲低LncRNA H19可恢復(fù)紫杉醇耐藥TNBC的化學(xué)敏感性。因此，LncRNA H19可能是紫杉醇抗性TNBC治療中的有效生物靶標(biāo)，為我們治療TNBC提供一個(gè)新的思考方向，但目前相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道較少，缺乏足夠的依據(jù)來驗(yàn)證此觀點(diǎn)，需要更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來支持上述結(jié)論。

3 總結(jié)與展望

TNBC基于其特殊的生物學(xué)特性，對(duì)手術(shù)以外的各種治療手段均不敏感，預(yù)后不良，因此TNBC的治療方案一直是研究者們的研究重點(diǎn)及難點(diǎn)。新一代基因測(cè)序的出現(xiàn)為TNBC的治療提供了新思路。通過對(duì)LncRNA功能及作用機(jī)制的研究，找到了致癌性和抑癌性兩種RNA分子，通過對(duì)其表達(dá)的調(diào)控及作用機(jī)制的研究，有望找到診斷及治療TNBC有效的生物分子靶點(diǎn)，進(jìn)一步干擾TNBC的進(jìn)程，改善預(yù)后前景。但目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與TNBC相關(guān)的LncRNAs數(shù)量較少，且缺乏足夠的臨床前實(shí)驗(yàn)研究證據(jù)，尚且不能為臨床提供充足的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)，指導(dǎo)臨床。因此，我們?nèi)孕枥^續(xù)努力深入探索，找到更多的對(duì)TNBC更具特異性的RNA分子靶標(biāo)來提高TNBC的診療，延長(zhǎng)TNBC患者的無病生存期和總體生存期。同時(shí)可以深入研究其對(duì)TNBC的作用機(jī)制，從機(jī)制上找到更多可調(diào)控的靶點(diǎn)，提高TNBC的治療效果。