甲基烯丙基三硫醚對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠炎癥因子 及腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

吳蘋，劉晉倩，王碩，董晶，范宗強(qiáng)，李震，陳芳

（聊城大學(xué)藥學(xué)院，山東聊城 252059）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種炎癥性腸病，主要在結(jié)腸的遠(yuǎn)端靠近直腸的部位發(fā)病，通過在腸黏膜和粘膜下層形成潰瘍面而產(chǎn)生連續(xù)性炎癥反應(yīng)[1]。這種病的臨床癥狀主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的腹痛、腹瀉和便血。自21世紀(jì)以來，該病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷呈上升趨勢(shì)[2]。潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制目前還不清楚，研究表明其發(fā)病病因與遺傳、環(huán)境、免疫[3,4]以及腸道菌群有關(guān)。目前，該病主要以抗炎和免疫調(diào)節(jié)為主，以生物制劑治療為輔。治療的藥物能有效緩解疾病癥狀，但同時(shí)也伴有許多副作用。因此，從天然資源中開發(fā)創(chuàng)新有效的藥物對(duì)減少副作用和改善治療效果尤為重要。

大蒜是一種藥食同源的植物，可入脾、胃、肺經(jīng)，具有抗菌、消炎等多重功效，在中醫(yī)應(yīng)用上歷史悠久。研究發(fā)現(xiàn)大蒜中的提取物，如大蒜素、大蒜多糖、二烯丙基二硫醚（DADS）、二烯丙基三硫醚（DATS）、甲基烯丙基二硫醚（AMDS）和甲基烯丙基三硫醚（AMTS）等，具有抗炎抗氧化的作用，可被用于預(yù)防或治療炎癥性疾病。例如徐興華等[5]研究表明大蒜素對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠有治療作用，其作用機(jī)制可能是通過抑制TNF-α和MPO的水平，阻斷炎癥的放大效應(yīng)。Wang等[6]研究發(fā)現(xiàn)大蒜多糖可通過增加毛螺菌和乳酸菌的豐度以及降低費(fèi)克藍(lán)姆菌屬和壁厚菌門的豐度來發(fā)揮調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，達(dá)到治療效果。Lee等[7]研究發(fā)現(xiàn)大蒜有機(jī)硫提取物DATS可通過抑制NF-кB/STAT3信號(hào)通路緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎。Zhang等[8]研究表明AMDS通過NF-кB信號(hào)通路抑制腸上皮細(xì)胞中IL-8和IP-10的分泌，對(duì)腸道炎癥具有改善作用。而對(duì)于提取物AMTS的研究，Zhao等[9]研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝毒性具有保護(hù)作用，但是該提取物對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制尚不清楚。因此，本研究以AMTS為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探索其對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的影響及作用機(jī)制，研究其調(diào)節(jié)腸道菌群多樣性和提高腸道免疫系統(tǒng)的關(guān)系，為開發(fā)具有抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

AMTS（CAS號(hào)：34135-85-8）購(gòu)自湖北信康醫(yī)藥化工有限公司；TNF-α試劑盒、IL-1β試劑盒、IL-6試劑盒，武漢云克隆科技股份有限公司；蘇木精伊紅（HE）染色試劑盒，杭州碧云天公司；乙醇（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

SF-400A型電子稱，奧豪斯儀器（上海）有限公司；倒置顯微鏡，日本Olympus公司；8S-1型磁力攪拌器，江蘇省金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠；MY-10手持式勻漿儀，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；HFU 40400BA型超低溫冰箱，美國(guó)Thermo公司；5425R型低溫離心機(jī)，德國(guó)eppendorf公司；Synergy H1酶標(biāo)儀，美國(guó)BIOTEK公司。

ICR小鼠，SPF級(jí)，體重16～20 g，雄性，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(魯)20190003。小鼠在動(dòng)物房正常飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境7 d，自由飲食，19～23 ℃，光暗周期12/12 h。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組、建模及給藥

將50只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按平均體重?zé)o顯著性差異分為5組，每組10只，分別為空白對(duì)照組（Control）、模型組（DSS組）、AMTS低劑量組AMTS（L）25 mg/(kg·d)、AMTS中劑量組AMTS（M）50 mg/(kg·d)和AMTS高劑量組AMTS（H）100 mg/(kg·d)，AMTS劑量的選擇參照Zhao等[9]方法。除空白組外，其余4組連續(xù)自由飲用2%的DSS溶液7 d，建立小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。從第8 d開始，AMTS組分別給予低、中、高三個(gè)劑量灌胃，空白組和DSS組給予等量玉米油，每日一次，連續(xù)灌胃7 d。

1.2.2 標(biāo)本采集

在末次給藥24 h后，對(duì)小鼠進(jìn)行眼球取血，在4 ℃下3000 r/min離心10 min后取上清液，然后將上清液在-80 ℃保存用于生化分析。采血后將小鼠脫頸椎處死，解剖小鼠并收集結(jié)腸組織，測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度后置于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理分析。最后收集小鼠24 h的新鮮糞便。采用拎尾法進(jìn)行糞便的采集，拎起小鼠的尾巴，通過刺激小鼠，排出糞便。用滅菌的鑷子收集每只小鼠的糞便，每收集完一只小鼠的糞便后，用酒精擦拭鑷子進(jìn)行滅菌，繼續(xù)收集另外一只小鼠的糞便。收集好的糞便放入無菌的EP管，并將EP管立即放入冰盒中，最后放入-80 ℃冰箱保存，用于腸道菌群的檢測(cè)。

表1 疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Standard of mice disease activity index (DAI) score

1.2.3 疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）的評(píng)估

參照文獻(xiàn)[10,11]的方法，對(duì)造模后小鼠的體重、糞便黏度和便血等情況進(jìn)行評(píng)分（表1），每天記錄一次疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分，以評(píng)估結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度。評(píng)分的每一項(xiàng)指數(shù)均按0～4分進(jìn)行評(píng)分，0分表示無疾病癥狀，4分表示嚴(yán)重疾病癥狀。具體標(biāo)準(zhǔn)見表1。

1.2.4 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)觀察

采用蘇木精和伊紅（HE）染色法分析結(jié)腸組織病理變化。對(duì)取出的小鼠的結(jié)腸組織用4%多聚甲醛溶液固定，固定24 h后進(jìn)行乙醇脫水，然后再經(jīng)乙醇和二甲苯脫水，用石蠟包埋制成蠟塊。將蠟塊用切片機(jī)制備5 μm切片并用HE法染色，最后在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸組織的病理變化。

1.2.5 炎癥因子測(cè)定

對(duì)小鼠進(jìn)行眼球取血，在4 ℃下3000 r/min離心10 min后取上清液，然后將上清液在-80 ℃保存用于生化分析。對(duì)收集的血清使用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行炎癥因子測(cè)定。根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒說明書操作步驟，檢測(cè)各組小鼠血清中的炎癥細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）水平。

1.2.6 腸道菌群16S rRNA測(cè)序及生物信息學(xué)分析

結(jié)腸炎是由腸道共生菌群或其代謝物侵入腸道屏障，驅(qū)動(dòng)免疫細(xì)胞的激活和分化而引發(fā)的[12]。根據(jù)文獻(xiàn)[13,14]報(bào)道的16S rRNA檢測(cè)分析，將收集的小鼠糞便委托微基生物科技節(jié)（上海）有限公司進(jìn)行測(cè)序分析，以便確定AMTS對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎腸道菌群的影響。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。所有數(shù)據(jù)均采用IBM SPSS 24統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）和Tukey檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖形分析采用Graph Pad Prism 5.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 AMTS對(duì)體重和DAI的影響

潰瘍性結(jié)腸炎小鼠最典型的癥狀就是體重下降，如圖1a所示，模型組在第9 d開始出現(xiàn)體重下降，平均體重為26.63 g。到了第12 d，模型組小鼠平均體重為22.58 g，空白組平均體重為31.05 g，模型組體重與空白組相比下降顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。與模型組相比，AMTS干預(yù)組在第9 d出現(xiàn)體重下降，但下降緩慢。比較第14 d體重時(shí)發(fā)現(xiàn)，模型組較第9 d時(shí)體重下降25.59%，AMTS低劑量組下降4.06%，AMTS中劑量組下降9.88%，AMTS高劑量組5.45%。AMTS低劑量組體重下降最少，模型組體重下降最多。

疾病活動(dòng)指數(shù)對(duì)評(píng)估結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度具有指導(dǎo)意義[10,11]。從圖1b可以看到，造模期間模型組DAI評(píng)分明顯高于空白組。比較最后一天DAI時(shí)發(fā)現(xiàn)，空白組的DAI值為0，模型組DAI值為3.51，AMTS低劑量組為2.60，AMTS中劑量組為2.88，AMTS高劑量組為2.79。這說明經(jīng)AMTS灌胃干預(yù)后，小鼠DAI評(píng)分明顯下降，并且與模型組相比具有顯著性差異（p＜0.01）。

圖1 AMTS對(duì)DSS結(jié)腸炎小鼠的腸炎癥狀的影響Fig.1 Effect of AMTS on the symptoms of DSS induced ulcerative colitis in mice

潰瘍性結(jié)腸炎會(huì)導(dǎo)致小鼠腸壁增厚，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短，所以結(jié)腸長(zhǎng)度也是評(píng)價(jià)潰瘍性結(jié)腸炎的一個(gè)間接指標(biāo)[15]。圖1c中結(jié)果表明，空白組結(jié)腸長(zhǎng)度為11.07 cm，模型組長(zhǎng)度明顯收縮，平均長(zhǎng)度為7.17 cm，較正常組相比縮短35.23%，兩組具有顯著性差異（p＜0.01）。AMTS低劑量的結(jié)腸長(zhǎng)度為8.19 cm，與模型組相比具有顯著性差異（p＜0.01）。中劑量組7.89 cm和高劑量組7.8 cm的結(jié)腸長(zhǎng)度較模型組增加，但差異無顯著性。

吳銘等[16]用蕓薹屬紫菜蔬乙醇提取物對(duì)2% DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎結(jié)果表明，與空白組相比，模型小鼠體重顯著下降（p＜0.05），DAI指數(shù)顯著升高（p＜0.05），并且結(jié)腸長(zhǎng)度較正常組結(jié)腸長(zhǎng)度縮短61.70%。本實(shí)驗(yàn)的上述結(jié)果說明DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型是成功的，AMTS能抑制結(jié)腸炎小鼠體重下降，改善腹瀉和便血現(xiàn)象，緩解潰瘍性結(jié)腸炎。

2.2 結(jié)腸組織病理學(xué)分析

圖2 DSS結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織切片HE染色(10×)Fig.2 HE staining of intestinal tissue sections of DSS induced ulcerative colitis in mice (10×)

徐敏等[17]在糞便微生物粗提液對(duì)3% DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的結(jié)果中，對(duì)結(jié)腸組織的HE染色發(fā)現(xiàn)，正常小鼠結(jié)腸組織隱窩腺、基質(zhì)和粘膜等上皮結(jié)構(gòu)保存完整，而DSS組小鼠腸組織出現(xiàn)典型的隱窩上皮損毀，粘膜廣泛損傷和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。在本研究中，如圖2所示，空白組小鼠結(jié)腸組織的黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整清晰，腺體排列整齊，無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組小鼠的結(jié)腸組織存在隱窩變形、杯狀細(xì)胞丟失、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和嚴(yán)重的黏膜損傷。與模型組相比，AMTS劑量組能減輕隱窩上皮變形、杯狀細(xì)胞丟失，小鼠黏膜炎癥程度明顯改善，黏膜病變有所減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)有所減少，這說明AMTS對(duì)DSS所致的結(jié)腸炎有保護(hù)作用。

2.3 AMTS調(diào)節(jié)炎癥因子的分泌

圖3 AMTS對(duì)DSS結(jié)腸炎小鼠炎癥細(xì)胞因子的影響Fig.3 Effect of AMTS on the inflammatory factors of DSS induced ulcerative colitis in mice

促炎細(xì)胞因子的失調(diào)是炎癥性腸病（IBD）的一個(gè)標(biāo)志。越來越多的文獻(xiàn)[18,19]表明促炎細(xì)胞因子在IBD的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用。促炎細(xì)胞因子水平的升高，例如TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6等，是結(jié)腸炎病癥的主要特征。因此下調(diào)促炎因子水平對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎是一種可行的治療策略。

在本實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果如圖3所示，與空白組相比，模型組小鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平明顯增加（p＜0.01），分別較正常組小鼠升高3.39倍、1.52倍和3.38倍。與模型組相比，AMTS低劑量、AMTS中劑量組以及AMTS高劑量組小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯降低（p＜0.05，p＜0.01），其中TNF-α水平分別降低了40.13%、34.87%和53.95%；IL-1β水平分別降低了39.25%、34.62%和39.10%；IL-6水平分別降低了14.48%、18.34%和21.74%；給藥組間差異不明顯。這一結(jié)果與Kanwal等[20]的研究結(jié)果相類似。Kanwal[20]發(fā)現(xiàn)竹蓀多糖（DIP）可下調(diào)結(jié)腸炎小鼠中的促炎細(xì)胞因子，尤其是高劑量（33 mg/kg）的竹蓀多糖，可顯著下調(diào)IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎癥因子水平（p＜0.01）。因此，研究結(jié)果表明，DSS模型組的TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高，而使用AMTS處理則可顯著降低這些炎癥因子的水平。這說明AMTS降低疾病活動(dòng)指數(shù)以及緩解組織病理損傷可能與調(diào)節(jié)炎癥因子水平有關(guān)。

2.4 AMTS對(duì)結(jié)腸炎小鼠腸道菌群的影響

2.4.1 韋恩圖

圖4 小鼠腸道菌群的韋恩圖Fig.4 Venn diagram of different mice microflora

韋恩圖可用于統(tǒng)計(jì)多個(gè)樣品中共有和獨(dú)有的OTU數(shù)目，可以比較直觀的反映樣品的OTU數(shù)目組成相似性及重疊情況。Kanwal等[20]研究了DIP對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠腸道菌群的影響。其中，韋恩圖顯示空白組糞便的OTU為1418，模型組糞便的OTU數(shù)與空白組相比下降33.29%；DIP低劑量組和高劑量組與空白組相比分別下降14.88%和3.81%。本研究采用韋恩圖分析各組小鼠菌群OTU的數(shù)量及其種類的交叉情況。圖4中，五組小鼠糞便中OUT共有385個(gè)，核心OTU有65個(gè)，占總OTU數(shù)的16.88%。各組特異性O(shè)TU/總OTU分別為空白組20/180，模型組3/185，AMTS低劑量組12/229，AMTS中劑量組21/258，AMTS高劑量組23/237。空白組與模型組在總的OTU數(shù)量上沒有差異，但空白組的特異性O(shè)TU數(shù)量明顯高于模型組。AMTS三個(gè)劑量組的總OTU數(shù)量均高于空白組和模型組，這說明AMTS處理可以增加小鼠腸道菌群的豐富度。

2.4.2 小鼠腸道菌群α多樣性分析

圖5 α多樣性箱線圖Fig.5 Boxplot of alpha diversity

本研究采用α多樣性分析來比較不同分組的小鼠腸道菌群的多樣性和豐富度。α多樣性分析包括chao指數(shù)、ace指數(shù)，shannon指數(shù)以及simpson指數(shù)等。chao指數(shù)和ace指數(shù)反映樣品中群落的豐富度，可直觀地反映群落中物種的數(shù)量。shannon指數(shù)以及simpson指數(shù)反映群落的多樣性，受樣品群落中物種豐富度和物種均勻度的影響。chao指數(shù)、ace指數(shù)、shannon指數(shù)越大，simpson指數(shù)越小，則說明樣品中的物種越豐富。如圖5所示，與空白組相比，模型組的chao指數(shù)、ace指數(shù)、shannon指數(shù)均降低，simpson指數(shù)升高。經(jīng)25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg AMTS處理的小鼠腸道菌群，其chao指數(shù)、ace指數(shù)、shannon指數(shù)均高于模型組，simpson指數(shù)低于模型組，這說明AMTS可以提高小鼠腸道菌群的多樣性和豐富度。

有研究表明[20]用DIP處理結(jié)腸炎小鼠14 d后，DIP組不僅會(huì)增加小鼠腸道菌群的豐富度，而且還增加了多樣性。分析本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，小鼠飲用DSS溶液后降低了腸道菌群的多樣性和豐富度，而AMTS同樣可以改善腸道菌群的豐富度，增加多樣性。

把試卷中三種題型實(shí)際難度做為自變量(第一大題為x1，第二大題為x2，第三大題為x3)，整卷的實(shí)際難度做為因變量y，通過標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)化，然后建立多元回歸分析模型，基于表1數(shù)據(jù)可以得到三個(gè)自變量的回歸系數(shù)(P值)為0.331(P<0.001)、0.239(P<0.001)和0.62(P<0.001).

2.4.3 小鼠腸道菌群β多樣性分析

群落結(jié)構(gòu)組成柱狀圖是根據(jù)分類學(xué)分析結(jié)果，得知一個(gè)或多個(gè)樣品在各分類水平上的分類學(xué)比對(duì)情況。從群落結(jié)構(gòu)組成柱狀圖中可以分析樣品中的微生物種類及各種微生物的相對(duì)豐度。

圖6a是樣品在門水平上的各組腸道菌群的群落結(jié)構(gòu)?？瞻捉M菌群反映正常小鼠腸道菌群的構(gòu)成，可以看出，在門水平上，擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、變形桿菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）和藍(lán)藻門（Cyanobacteria）是主要物種。與空白組相比，模型組在門水平上，F(xiàn)irmicutes、脫 鐵 桿 菌 門（Deferribacteres）、Cyanobacteria的比例顯著升高，Bacteroidetes、Proteobacteria、Actinobacteria明顯減少。有研究報(bào)道Bacteroidetes是促進(jìn)結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展的主要因素之一，Chen等[21]已經(jīng)證實(shí)Bacteroidetes的失調(diào)與IBD有關(guān)。在本研究中可以看到，與空白組相比，Bacteroidetes的相對(duì)豐度在DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎中升高，而AMTS低劑量和高劑量能顯著降低Bacteroidetes的相對(duì)豐度，說明我們的研究結(jié)果和文獻(xiàn)報(bào)道具有一致性。

圖6b顯示，在屬水平上，除去未確定分類的腸道菌，在空白組中Bacteroidetes、另枝菌屬（Alistipes）、擬 普 雷 沃 菌 屬（Alloprevotella）、乳 酸 桿 菌（Lactobacillus）、臭味菌屬（Odoribacter）、埃希氏菌（Escherichia）、葡萄球菌屬（Staphylococcus）是主要菌屬。與空白組相比，模型組中的Bacteroidetes、Alistipes、Alloprevotella、Odoribacter較空白組有增加趨勢(shì)，而Lactobacillus、Escherichia有減少趨勢(shì)。圖6b可以看到，與模型組相比，AMTS低劑量和高劑量組下調(diào)了Alistipes的豐度，同時(shí)高劑量組還降低了Odoribacter的豐度。陳燕等[22]研究發(fā)現(xiàn)短鏈脂肪酸的濃度與腸道菌群密切相關(guān)，其中乙酸、丙酸與丁酸在腸道中是主要的短鏈脂肪酸。Alistipes及Odoribacter是有害菌，其豐度與乙酸存在顯著負(fù)相關(guān)，會(huì)導(dǎo)致短鏈脂肪酸代謝異常，促進(jìn)炎癥的發(fā)生。本研究中，AMTS降低了有害菌Alistipes及Odoribacter的增殖，與以上結(jié)果一致。

圖6 物種分布柱狀圖Fig.6 Histogram of horizontal species

圖6b還顯示，模型組的Lactobacillus、幽門螺桿菌（Helicobacter）豐度明顯低于空白組。AMTS低劑量和中劑量較模型組Lactobacillus的豐度有增加趨勢(shì)，中劑量組的Helicobacter較模型組也明顯增加。研究證明Lactobacillus是一種益生菌，能通過阻止致病菌的定植與粘附形成抗菌生物屏障，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡[23]。因此用AMTS干預(yù)處理后會(huì)提高結(jié)腸炎小鼠Lactobacillus的豐度。近幾年研究發(fā)現(xiàn)[24]Helicobacter感染與IBD呈負(fù)相關(guān)，Li等[25]在研究中發(fā)現(xiàn)，幽門螺桿菌感染可能通過調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞活化蛋白，促進(jìn)抗炎因子IL-10的產(chǎn)生，從而減輕結(jié)腸炎癥狀。

2.4.4 基于物種信息的Bray-Curtis距離分析

Bray-Curtis距離是反映兩個(gè)群落之間差異性的常用指標(biāo)。本研究基于物種信息的Bray-Curtis距離分析，用來比較各樣品間基于群落組成的層次聚類，樣品之間的距離越遠(yuǎn)說明差異越大。Cui等[26]在研究黃連素通過調(diào)節(jié)結(jié)腸內(nèi)腸道菌群治療潰瘍性結(jié)腸炎中發(fā)現(xiàn)，腸道菌群的系統(tǒng)聚類樹空白組和黃連素組相距較近，和模型組相距較遠(yuǎn)。在本研究中，從圖7a可見，在門水平上，空白組和AMTS中劑量組的Bray-Curtis距離最近，其次是AMTS低劑量和高劑量的距離較近，模型組距離最遠(yuǎn)。在屬水平上（圖7b），AMTS低劑量和高劑量組樣本相距較近，而空白組與模型組、AMTS干預(yù)組相距較遠(yuǎn)。上述結(jié)果提示，在門水平上AMTS組的腸道菌群與空白組具有一定的相似性，而與模型組差異明顯。在屬水平上，模型組和AMTS干預(yù)組樣本間多樣性差異較小，而空白組與模型組、AMTS干預(yù)組樣本間多樣性差異較大。

圖7 物種水平樣品聚類樹與柱狀圖組合分析圖Fig.7 Histogram of horizontal species

3 結(jié)論

本研究初步證實(shí)了AMTS對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的保護(hù)作用與炎癥因子水平和腸道菌群的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。在該研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)了AMTS對(duì)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用，并揭示了AMTS改善腸道損傷、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平以及恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)的可能機(jī)制。研究表明，AMTS作為一種潛在的治療結(jié)腸炎天然產(chǎn)物，可進(jìn)行大量深入的研究，以便為開發(fā)相關(guān)藥物提供理論依據(jù)。