熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染患者中的診斷分析

劉磊

（遼寧省阜新市第二人民醫(yī)院（阜新市婦產醫(yī)院）檢驗科，遼寧 阜新 123000）

B族鏈球菌位于人體下消化道或者陰道，其成年人攜帶率較高，尤其是孕婦。B族鏈球菌可影響孕婦免疫功能與嬰兒生長發(fā)育，造成早產、流產，甚至導致腦膜炎、敗血癥等，不利于新生兒與孕婦健康[1]。因此，產前對B族鏈球菌感染進行篩查尤為重要。基因測序是診斷孕晚期B族鏈球菌感染的金標準，但其對檢測技術與設備要求較高，目前尚無普及。細菌培養(yǎng)檢測是B族鏈球菌的傳統(tǒng)檢測方式，但其檢測耗時較長，且靈敏度較低，其應用受到一定限制[2]。熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）法準確率較高，且簡便易行[3]。熒光定量PCR法打破了細菌培養(yǎng)檢測的局限，其無需進行培養(yǎng)，具有簡便、快捷的優(yōu)勢，尤其適用于臨床大量樣本的篩查，可利用試劑盒對標本直接進行處理，受到廣大醫(yī)護人員的青睞。目前，臨床關于熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)檢測在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中的應用價值比較研究較少?；诖?，本研究分析熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中的應用，以期為臨床診治提供參考經驗，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2019年1月于本院檢查的80例疑似B族鏈球菌感染孕晚期孕婦，年齡23～46歲，平均（35.24±2.21）歲；體重指數19.2～24.6 kg/m2，平均（22.31±0.63）kg/m2；孕周32～37周，平均（34.53±1.21）周；孕次1～3次，平均（1.02±0.25）次。

1.2 納入及排除標準 納入標準：B族鏈球菌感染患者經基因測序確診；無妊娠期合并甲狀腺疾病或糖尿病；采集標本前2周內未應用抗生素類藥物；臨床資料完整。排除標準：陰道分泌物有衣原體感染、滴蟲性陰道炎、外陰道假絲酵母菌等其他菌群感染；存在染色不良、涂片過厚等涂片不符合要求者；取樣前24 h內接受過洗液或栓劑。

1.3 方法 ①標本采集方式：應用無菌拭子對孕婦陰道分泌物進行采集，先將孕婦外陰過多分泌物擦去，使用無菌窺器使陰道暴露，在插入孕婦陰道后將無菌拭子旋轉1周，對陰道內1/3處的分泌物進行采集。②熒光PCR檢測：在標本中加入1 mL緩沖液并進行震蕩，離心，將下層沉淀取出，加入緩沖液，離心，下層沉淀重懸，加入核酸提取劑，破碎細胞后100℃離心10 min，取上清液，進行PCR擴增反應，應用熒光PCR檢測試劑盒（北京博爾誠有限公司，ABI7500）進行檢測。CT指標＜36、熒光信號曲線呈S形時判為陽性。細菌培養(yǎng)檢測：在培養(yǎng)基上將標本涂勻接種，進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為5%CO2，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時間為24 h，根據培養(yǎng)后菌落的染色、形態(tài)等進行鑒別。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗，繪制ROC曲線得到AUC，檢驗熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染診斷價值：AUC＜0.5無價值，0.5～0.7診斷價值較低，0.7～0.9診斷價值中等，＞0.9診斷價值高，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果 基因測序結果顯示，80例孕婦中，陽性52例，陰性28例；熒光定量PCR法檢出真陽性52例，假陰性0例，假陽性1例，真陰性27例；細菌培養(yǎng)檢測檢出真陽性44例，假陰性8例，假陽性8例，真陰性20例，見表1。

表1 兩種檢測方式診斷結果Table 1 Diagnostic results of two detection methods

2.2 診斷效能 以基因測序作為金標準，熒光定量PCR法對B族鏈球菌感染的診斷靈敏度、準確性、特異度、陰性預測值、陽性預測值均高于細菌培養(yǎng)檢測，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩種檢測方式診斷效能Table 2 Diagnostic efficacy of two detection methods

2.3 熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)診斷價值 將2.2中兩種診斷方式作為檢驗變量，將陰陽性作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線得到熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的AUC分別為0.982、0.780，均＞0.75，有一定預測價值，且以熒光定量PCR法效能更高，見表3。ROC曲線圖見圖1。

圖1 熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的ROC曲線圖Figure 1 The ROC curve of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture for diagnosis of group B streptococcus infection in the third trimester of pregnancy

表3 熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)檢測診斷價值Table 3 Diagnostic value of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture detection

3 討論

女性陰道中存在多種微生物菌落，其間相互協(xié)調與制約，從而平衡陰道微生態(tài)系統(tǒng)，當菌群失調時可引起陰道感染。其中，B族鏈球菌感染較為常見，可能對孕婦妊娠進展、胚胎發(fā)育等造成較大影響，誘發(fā)產褥感染、新生兒腦膜炎等，嚴重威脅新生兒與孕婦生命健康[4]。因此，在產前開展篩查具有重要意義，臨床應積極探索結果直觀、耗時短、操作簡單的檢測方式，及時檢出B族鏈球菌感染，從而指導臨床治療，有效保證產婦及新生兒安全[5]。

B族鏈球菌感染的傳統(tǒng)檢測方式為細菌培養(yǎng)法，但具有重復性低、干擾多、操作繁瑣、耗時長等缺點。由于細菌培養(yǎng)法需依賴肉眼對菌落狀態(tài)進行觀察，且其菌落污染率較高，部分B族鏈球菌感染無法有效檢出，降低陽性率，對診斷結果造成影響，不利于臨床后續(xù)治療。加之細菌培養(yǎng)法中培養(yǎng)過程比較繁瑣，耗時較長，容易延誤病情[6]。熒光定量PCR法是一種新型檢測方式，打破了傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)法的局限性，無需進行培養(yǎng)，在試劑盒輔助下直接處理標本，具有簡便易行的優(yōu)勢，逐漸受到廣泛應用[7]。同時，熒光定量PCR法可將熒光標記和擴增應用于B族鏈球菌特異性核酸序列，在對B族鏈球菌感染進行診斷時，使微量病原菌被檢出，提升診斷的準確性。相比較于細菌培養(yǎng)法，熒光定量PCR法無需進行接種、培養(yǎng)、鑒別等操作，流程簡化，操作較為簡便，耗時較短，縮短孕婦等待時間，且其檢驗的重復性與工作效率更高[8]。另外，標本的保存環(huán)境基本不影響熒光定量PCR法檢測結果，死亡的B族鏈球菌亦可在該方式下被檢出，以提升檢測準確率，有利于促進孕婦早期用藥干預進程與效果，從而保障孕婦與胎兒的安全與健康。另外，熒光定量PCR法在早產、胎膜早破等緊急情況下可對其進行快速檢測，有利于減少新生兒的發(fā)病與死亡。本研究結果發(fā)現，以基因測序作為金標準，熒光定量PCR法對B族鏈球菌感染的診斷靈敏度、準確性、特異度、陰性預測值、陽性預測值均高于細菌培養(yǎng)檢測；繪制ROC曲線得到熒光定量PCR法與細菌培養(yǎng)診斷孕晚期B族鏈球菌感染的AUC分別為0.982、0.780，均＞0.75，有一定預測價值，且以熒光定量PCR法效能更高。結果提示，熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中診斷效能較高，可有效應用于早期預防治療。陳明發(fā)等[9]研究表明，熒光定量PCR法可有效將B族鏈球菌感染病例檢出，與本研究結果相符。向燕群等[10]研究中，試驗組應用熒光PCR檢測B族鏈球菌感染，對照組應用細菌培養(yǎng)法，其結果發(fā)現試驗組診斷準確率為準確率為97.4%，高于對照組的76.9%，說明熒光PCR技術陽性檢出率較高，與本研究結果一致。且其結果中表明實驗組妊娠結局優(yōu)于對照組，說明熒光定量PCR法對預防產婦發(fā)生不良妊娠結局有積極作用。

綜上所述，熒光定量PCR法在孕晚期B族鏈球菌感染診斷中診斷效能較高，可有效應用于臨床早期診斷與預防治療孕晚期B族鏈球菌感染，保證孕婦與胎兒的安全與健康。