活動性巨細(xì)胞病毒感染DNA載量與2型糖尿病患者T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系

蔡麗娟 任 妹 劉劍榮 潘 幸

江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西萍鄉(xiāng) 337000

巨細(xì)胞病毒屬于皰疹病毒亞科，是引發(fā)人類疾病的常見病原體，可通過密切接觸、輸血、性行為、器官移植及母嬰途徑等方式傳播。而2 型糖尿?。╰ype 2 di abetes mellitus，T2DM）作為一種常見的慢性疾病，多發(fā)病于35～40 歲之后，其患者數(shù)量占糖尿病患者90%以上[1]。有研究指出，T2DM 患者體內(nèi)產(chǎn)生胰島素的能力并未完全喪失，部分患者體內(nèi)胰島素水平過高[2]，但其胰島素作用效果較差，患者表現(xiàn)為胰島素抵抗或胰島素分泌相對不足等情況[3]。目前已有研究指出，巨細(xì)胞病毒感染與1 型糖尿病存在一定相關(guān)性[4]，但巨細(xì)胞病毒感染與T2DM 的相關(guān)性還未得到證實(shí)?；诖耍狙芯刻骄炕顒有跃藜?xì)胞病毒感染DNA 載量與T2DM 患者T 淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年10月至2020年5月萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院收治的80 例T2DM 患者的臨床資料，按照活動性巨細(xì)胞病毒感染情況將其分為觀察組（巨細(xì)胞病毒感染陽性，n=18）和對照組（巨細(xì)胞病毒感染陰性，n=62）。觀察組中，男10 例，女8 例；年齡25～83 歲，平均（53.72±18.54）歲；病程7～24 個(gè)月，平均（15.63±6.24）個(gè)月。對照組中，男35 例，女27 例；年齡26～80歲，平均（45.69±16.33）歲；病程9～24 個(gè)月，平均（14.18±6.77）個(gè)月。兩組的一般資料比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②臨床資料完整；③均進(jìn)行巨細(xì)胞病毒DNA、T 淋巴細(xì)胞亞群、胰島功能相關(guān)檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重器質(zhì)性病變者；②長期服用免疫抑制劑者；③惡性腫瘤者；④免疫功能缺陷者。

1.2 方法

巨細(xì)胞病毒DNA 載量檢測[6]：應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測尿HCMV DNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，PCR 試劑盒為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品，PCR 擴(kuò)增反應(yīng)在ABI VIIA7 PCR 儀上進(jìn)行，當(dāng)其樣本濃度≤500 拷貝數(shù)/ml 時(shí)判定為巨細(xì)胞病毒感染陰性，＞500 拷貝數(shù)/ml 時(shí)判定為巨細(xì)胞病毒感染陽性。

T 淋巴細(xì)胞亞群檢測：抽取患者空腹靜脈血5 ml，使用以1500 r/min，離心半徑15 cm，離心10 min，去除上層清液，采用梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，并制成懸液，使用貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司生產(chǎn)的Gallios流式細(xì)胞儀檢測CD4+T 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞含量，并計(jì)算CD4+/CD8+比值。

胰島功能檢測：抽取患者空腹靜脈血5 ml，使用以1500 r/min 離心10 min，收集血清，離心半徑15 cm，使用默沙克生物酶聯(lián)免疫試劑盒測量空腹C 肽（fasting C-peptide，F(xiàn)CP）、餐后2 小時(shí)C 肽（fasting 2 h Cpeptide，F(xiàn)2CP）水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、胰島功能（FCP、F2CP）水平，分析活動性巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細(xì)胞亞群水平和胰島功能的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson 相關(guān)分析模型分析相關(guān)性，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T 淋巴細(xì)胞亞群的比較

觀察組的CD4+、CD4+/CD8+低于對照組（P＜0.05），CD8+高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組T 淋巴細(xì)胞亞群的比較（±s）

表1 兩組T 淋巴細(xì)胞亞群的比較（±s）

觀察組對照組t 值P 值18 62 35.31±2.63 37.26±3.17 2.379 0.019 29.81±5.42 27.14±3.99 2.296 0.024 1.18±0.32 1.37±0.31 2.273 0.025組別 例數(shù) CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+

2.2 兩組胰島功能的比較

觀察組的FCP、F2CP 水平低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 兩組胰島功能的比較（ng/ml，±s）

表2 兩組胰島功能的比較（ng/ml，±s）

觀察組對照組t 值P 值18 62 1.21±1.36 2.05±1.76 5.234＜0.001 2.18±1.47 2.76±2.53 2.336 0.022組別 例數(shù) FCP F2CP

2.3 巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細(xì)胞亞群水平和胰島功能的相關(guān)性分析

巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負(fù)相關(guān)，與CD8+水平呈正相關(guān)（P＜0.05）（表3）。

表3 巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細(xì)胞亞群水平和胰島功能的相關(guān)性分析

3 討論

大量研究表明，1 型糖尿病的發(fā)生發(fā)展與巨細(xì)胞病毒感染有極為密切的聯(lián)系，病毒感染可直接或間接攻擊胰島細(xì)胞，導(dǎo)致胰島細(xì)胞分泌胰島素功能下降[7]。但與1 型糖尿病胰島β 細(xì)胞嚴(yán)重受損不同，T2DM 胰島細(xì)胞功能尚存，二者發(fā)病機(jī)制存在一定差異，病毒感染對T2DM 的作用有待考證。

巨細(xì)胞病毒為線性雙鏈DNA 病毒，在人類中普遍易感，能對新生兒及免疫機(jī)能低下個(gè)體造成較為嚴(yán)重的并發(fā)癥，且經(jīng)原發(fā)感染后，病毒會長期潛伏于體內(nèi)[8]。T 淋巴細(xì)胞亞群主要為CD4+和CD8+細(xì)胞，當(dāng)病毒侵犯機(jī)體時(shí)，CD4+、CD8+細(xì)胞相互作用，發(fā)揮特異性免疫，抵抗病毒感染[9]。本次研究中，巨細(xì)胞病毒感染陽性患者CD4+細(xì)胞水平、CD4+/CD8+低于陰性患者，CD8+細(xì)胞水平高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示巨細(xì)胞病毒激活狀態(tài)會加重T2DM 患者機(jī)體免疫功能失衡，這與曹潔等[10]所研究結(jié)論相類似，其原因可能是巨細(xì)胞病毒基因復(fù)制活躍，患者體內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，在病毒抗原識別過程中，CD8+細(xì)胞大量復(fù)制，CD4+細(xì)胞大量消耗，從而引起T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量發(fā)生變化。

巨細(xì)胞病毒感染會導(dǎo)致機(jī)體免疫失衡，免疫細(xì)胞分泌白介素-6、腫瘤壞死因子等因子，誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生胰島素抵抗作用，降低胰島素敏感性[11]。本研究結(jié)果顯示巨細(xì)胞病毒感染陽性患者FCP、F2CP 水平低于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示巨細(xì)胞病毒會影響FCP、F2CP 水平，這與王柳明等[12]所研究結(jié)論相類似，其原因可能是巨細(xì)胞病毒感染胰島β 細(xì)胞，并在胰島β 細(xì)胞中潛伏、復(fù)制和增殖，其合成的蛋白質(zhì)會引起胰島β 細(xì)胞凋亡，同時(shí)巨細(xì)胞病毒感染胰島β 細(xì)胞后通過交叉免疫作用引起特異性T 細(xì)胞產(chǎn)生抗體，這種抗體能夠攻擊胰島β 細(xì)胞，造成胰島β細(xì)胞損傷，并且在巨細(xì)胞病毒感染胰島β 細(xì)胞后，會引起淋巴B 細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞富集，形成炎癥微環(huán)境，釋放出的細(xì)胞因子，會引起胰島β 細(xì)胞功能失調(diào)，從而影響患者胰島功能[13]。

本研究結(jié)果顯示，巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負(fù)相關(guān)，與CD8+水平呈正相關(guān)（P＜0.05），提示T2DM 患者巨細(xì)胞病毒越活躍，患者免疫功能和胰島功能越受影響，與劉春梅等[14]所研究結(jié)論相類似，這說明當(dāng)T2DM 患者感染巨細(xì)胞病毒后，巨細(xì)胞病毒能通過直接損傷胰島β 細(xì)胞和長期病毒感染導(dǎo)致患者自身免疫失衡，并影響其胰島β 細(xì)胞正常功能，造成患者體內(nèi)胰島素分泌含量減少，加重T2DM 患者病情[15-16]。

綜上所述，活動性巨細(xì)胞病毒感染DNA 載量與T2DM 患者CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負(fù)相關(guān)，與CD8+水平呈正相關(guān)，故采取有效措施抑制患者免疫失衡狀態(tài)，對治療巨細(xì)胞病毒感染有利。