結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、肺泡灌洗液T細(xì)胞亞群檢測在肺結(jié)節(jié)病和肺結(jié)核鑒別診斷作用

鄧 群 劉建鋒 姚佳惠子 黃 健

江西省胸科醫(yī)院結(jié)核科，江西南昌 330006

肺結(jié)核是傳染性疾病，傳播的范圍較大，因此在發(fā)現(xiàn)疾病時需要對患者實(shí)施積極治療，患者發(fā)生肺結(jié)核疾病時，若治療不及時會發(fā)展為肺纖維化，還容易導(dǎo)致肺部形成干酪樣變或者形成空洞，容易對患者的肺部造成不可逆的傷害，若結(jié)核病菌傷害到大血管，還有可能引起患者咳血或者肺部囊腫，對患者的身體傷害非常大，雖然現(xiàn)在的醫(yī)療水平可以治療[1]，但是治愈后對患者的日常生活會造成一定的影響，使患者生活質(zhì)量降低，因此對于肺結(jié)核患者的治療原則為早發(fā)現(xiàn)早治療，預(yù)防對肺部造成損傷。肺結(jié)節(jié)也是常見疾病，容易使患者多系統(tǒng)受累，具有多種臨床表現(xiàn)，由于上述兩種疾病具有相似之處，常常發(fā)生誤診情況，而實(shí)施一項(xiàng)有效的診斷較為重要，因此，本研究對結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)及肺泡灌洗液T 細(xì)胞亞群檢測在肺結(jié)節(jié)病和肺結(jié)核鑒別診斷中的作用進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年3月至2020年3月江西省胸科醫(yī)院結(jié)核科收治的60 例肺部疾病患者作為研究對象，根據(jù)疾病的類型不同，將其分為觀察組（肺結(jié)節(jié)病，30 例）和對照組（肺結(jié)核病，30 例）。觀察組中，男20 例，女10 例；年齡30～70 歲，平均（56.17±1.21）歲；病程3～8 個月，平均（5.33±0.54）個月。對照組中，男21 例，女9 例；年齡29～69 歲，平均（56.19±1.23）歲；病程3～8 個月，平均（5.31±0.51）個月。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，參與研究者知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：對照組患者符合肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；觀察組患者伴有低熱、盜汗、乏力等癥狀，符合肺結(jié)節(jié)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，經(jīng)過影像學(xué)檢查證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心臟肝腎等重要器官功能嚴(yán)重不全者；②精神類疾病或者癡呆者；③全身免疫性疾病者。

1.2 方法

結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)：采用江西省胸科醫(yī)院的結(jié)核感染T 細(xì)胞檢測試劑，使用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)，將診斷結(jié)果詳細(xì)記錄。肺泡灌洗液T 細(xì)胞亞群檢測：采用江西省胸科醫(yī)院的FACSCanto Ⅱ型流式細(xì)胞儀（上海實(shí)維實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司）實(shí)施檢測，新鮮的肺泡灌洗液經(jīng)過尼龍布經(jīng)痰液和雜質(zhì)過濾后，離心洗滌2 次，計(jì)數(shù)并對細(xì)胞數(shù)進(jìn)行調(diào)節(jié)，加入熒光抗體室溫避光孵育20 min，加入2 ml 紅細(xì)胞裂解液，避光10 min，3000 r/min 離心5 min，離心半徑為10 cm，加入離心洗滌劑，使用0.5 ml PBS 重懸細(xì)胞，采用效準(zhǔn)儀器將分辨率調(diào)至最佳工作狀態(tài)，使用軟件分析并且獲取數(shù)據(jù)，調(diào)節(jié)電壓，獲取細(xì)胞總數(shù)10 000 個，根據(jù)同型對照分析細(xì)胞表達(dá)情況（CD8+、CD4+、CD3+），計(jì)算CD4+/CD8+。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

比較兩組的陽性率及CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平。T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性率診斷標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)空白對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)＜6 時，任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，結(jié)果即為陽，如果空白對照孔斑點(diǎn)數(shù)＞6，那么任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)大于空白孔斑點(diǎn)數(shù)的兩倍，結(jié)果也表示陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性率的比較

觀察組患者結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性患者2 例，陽性率為6.67%；對照組患者結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性患者11 例，陽性率為36.67%。觀察組的結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性率低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.4621，P=0.0137）。

2.2 兩組患者CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平的比較

觀察組患者的CD4+/CD8+、CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD4+、CD3+高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組患者CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平的比較

3 討論

相關(guān)研究顯示，結(jié)核分枝桿菌是寄生菌的一種，一般需要在活細(xì)胞內(nèi)才能成活，通過飛沫、塵埃傳播，患者通過呼吸道吸入病菌從而感染發(fā)病，結(jié)核桿菌也稱作為結(jié)核桿菌、結(jié)核菌[4-6]，感染病菌后可導(dǎo)致人體發(fā)生結(jié)核病，一般以肺結(jié)核疾病較為常見，結(jié)核桿菌進(jìn)入人體時不會立刻發(fā)病，當(dāng)人體出現(xiàn)免疫力下降或者吸毒后，病菌容易發(fā)生病變，導(dǎo)致肺結(jié)核形成，結(jié)核分枝桿菌為抗酸性桿菌[7-10]，對于營養(yǎng)環(huán)境要求較為嚴(yán)格，采取培養(yǎng)法進(jìn)行病菌培養(yǎng)，具有繁瑣、時間較長等不足，但是結(jié)果比較準(zhǔn)確，能夠通過肉眼直接觀察到形成的菌落，作為肺結(jié)核診斷、治療的依據(jù)，但是由于培養(yǎng)菌落不具備生長繁殖能力，因此只能實(shí)施藥敏試驗(yàn)、菌型鑒定等[11-13]。在機(jī)體免疫細(xì)胞內(nèi)，T 細(xì)胞具有多種優(yōu)勢，例如功能強(qiáng)、數(shù)量多等，具有抗感染相關(guān)作用，成熟的T 細(xì)胞包括兩個亞群（CD4+以及CD8+），CD4+主要在輔助T 細(xì)胞上表達(dá)，能對抗原信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行識別；CD8+在抑制性T 細(xì)胞上，能對癌細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用，而兩者之間具有一定的協(xié)同作用，能維持機(jī)體免疫平衡[14-16]，反映機(jī)體免疫狀態(tài)情況等。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者的CD4+/CD8+、CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD4+、CD3+高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示患者自身細(xì)胞免疫紊亂和CD4+、CD3+具有相關(guān)性，患者病情越嚴(yán)重，CD8+水平越低。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患者結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性患者2 例，陽性率為6.67%；對照組患者結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)中，結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性患者11 例，陽性率為36.67%。觀察組的結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)陽性率低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與李芹等[17]的研究結(jié)果一致，提示檢測T 淋巴細(xì)胞亞群水平對肺結(jié)節(jié)病的鑒別診斷有重要的臨床價值。

綜上所述，在肺結(jié)節(jié)病和肺結(jié)核診斷過程中，采用結(jié)核分枝桿菌T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、肺泡灌洗液T 細(xì)胞亞群檢測，能對上述疾病有效鑒別，值得在臨床中推廣運(yùn)用。