預(yù)處理方式對高效液相色譜法測定稻谷中黃曲霉毒素B1的影響

周婷婷，鄒建成，楊 娟，劉 浩

（湖南中儲糧糧油質(zhì)監(jiān)有限公司，湖南 寧鄉(xiāng) 410600）

稻谷，即未去除稻殼的子實，屬禾本科稻，是普通栽培稻亞屬中的普通稻亞種，在我國有著廣泛的種植。稻谷由稻殼和穎果（糙米）兩部分組成，經(jīng)礱谷機脫去稻殼后即可得到糙米，糙米再經(jīng)加工碾去皮層和胚，留下的胚乳，即變成人們經(jīng)常食用的精白米，其加工過程中脫落的糙米外表部分為米糠，主要包括果皮、種皮、胚芽、糊粉層及少部分的胚乳等[1-3]。

黃曲霉素（ aflatoxin，AF）是一類由黃曲霉（A. flavus）、寄生曲霉（A. parasiticus）等霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)類似的有毒代謝物，常見的有B1、B2、G1、G2等4種形式，其中以黃曲霉毒素B1（AFB1）毒性最強，具有強致畸、致癌和致突變等特性，被國際癌癥研究組織（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物[4-5]。稻谷作為我國的主要糧食作物之一，因儲存條件等原因極易引起黃曲霉毒素的超標(biāo)[6-7]。本試驗參考GB 5009.22—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中高效液相色譜/柱后衍生（光化學(xué)衍生法）的基本方法，在黃曲霉毒素B1檢測超標(biāo)的稻谷樣品中隨機選取8份樣品，改用精米機處理的方式（得到精米）與礱谷機處理（得到糙米）進(jìn)行分析對比，以期確定黃曲霉毒素B1的檢測結(jié)果是否受到不同預(yù)處理方式的影響，為稻谷黃曲霉毒素B1的準(zhǔn)確檢測、稻谷防霉及科學(xué)食用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 主要試劑及溶液

甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）：德國默克公司；甲醇—水溶液（70+30）、乙腈—甲醇溶液（50+50）、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于98%）：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。

實驗用水均為去離子水。

1.1.2 主要儀器和設(shè)備

1200液相色譜儀：美國安捷倫公司；HF2500光化學(xué)柱后衍生器：北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；HCM0125B免疫親和柱：北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；JJ200電子天平：常熟市雙杰測試儀器廠；0.22 μm微孔過濾器：美國安捷倫公司；JLG-Ⅱ礱谷機：中儲糧成都糧食儲藏科學(xué)研究所；Ltjm-2009電動定時稻米精米機：上海銀澤儀器設(shè)備有限公司；Advanced超純水機：成都康寧實驗室專用純水設(shè)備廠。

1.1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱（25 cm）；流動相：A為水，B為乙腈—甲醇液（50+50）；等梯度洗脫條件：70% A+30% B；流速1.0 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積20 μL；激發(fā)波長360 nm；發(fā)射波長440 nm。

1.2 試驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確移取100 ng/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作液100、500、1 000、2 000、4 000 μL至10 mL容量瓶中，用初始流動相定容至刻度（含黃曲霉毒素B1濃度為1.0、5.0、10.0、20.0、40.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

1.2.2 試驗步驟

試驗從超標(biāo)黃曲霉毒素的稻谷樣品中隨機選取8個樣品，編號H001，H002，H003，…，H008。取8個稻谷樣品，依據(jù)礱谷機和精米機工作需求分別加入，精米機和礱谷機分別處理樣品5 min，之后過1 mm 篩，混勻備用。稱取上述樣品25 g，加入5 g氯化鈉與125 mL甲醇—水溶液（70+30）混勻，在高速均質(zhì)（＞10 000 r/min）1 min，用快速定性濾紙過濾，收集濾液，取10 mL濾液加入20 mL水稀釋，再用玻璃纖維濾紙過濾，收集濾液作為上清液，取15 mL上樣液過免疫親和柱凈化，取1 mL甲醇過柱，收集洗脫液并定容至1 mL，洗脫液用0.22 μm 微孔過濾器過濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于上機測定。

1.2.3 空白試驗

除不稱取試樣外，其余步驟按照1.2.2進(jìn)行，做空白試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和色譜圖

試驗以糙米為測定樣品，分別選0.99、4.95、9.90、19.80、39.60 ng/mL 5個濃度點制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示，試驗方法線性回歸方程為y= 58 410x- 12 859，R2=0.999 8，滿足國家標(biāo)準(zhǔn)（需達(dá)到0.99以上）所需要求。試驗所得稻谷樣品的黃曲霉毒素B1色譜圖見圖1。

2.2 預(yù)處理方法對黃曲霉毒素B1檢測結(jié)果的影響

通過精米機和礱谷機2種不同的方式對稻谷進(jìn)行預(yù)處理，而后進(jìn)行同樣的檢測步驟，最終測定并比較其中的黃曲霉毒素B1的含量，對比2種不同的預(yù)處理方式對黃曲霉毒素B1的檢測結(jié)果是否有影響，2次試驗結(jié)果取算術(shù)平均值作為結(jié)果。

圖2結(jié)果顯示，通過礱谷機和精米機進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行檢測的稻谷，其黃曲霉毒素的檢測結(jié)果差異非常大。GB 5009.22—2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中規(guī)定稻谷中黃曲霉毒素B1的限量不得超過10 μg/kg，經(jīng)過精米機處理后，8個原本超標(biāo)的樣本結(jié)果有5個降至10 μg/kg 以下。

由圖3可以看出，通過精米機處理后的稻谷，相對礱谷機處理后的稻谷，8個樣品的黃曲霉毒素B1檢測結(jié)果均有不同程度的降低。其中有4個樣品通過精米機處理后的稻谷樣品相對礱谷機處理后的稻谷樣品黃曲霉毒素B1的檢測結(jié)果降低了80%以上，H005和H008樣品降幅更是達(dá)到達(dá)100%，檢測結(jié)果變化最少的是H006號樣品，其黃曲霉毒素B1降低了6.36%。

3 結(jié) 論

通過礱谷機和精米機預(yù)處理后稻谷的黃曲霉毒素B1含量差距非常大，推測隨著加工精度的深入，稻谷表皮脫除得越多，黃曲霉毒素B1含量越少。

在糧食儲存方面，優(yōu)先以稻谷的方式保存，因稻谷具有完整的稻殼，在儲藏過程中穩(wěn)定性較強，對防霉、防蟲以及緩解吸濕等，均有更好的效果，在儲藏保管過程中，谷粒越完整則耐儲存性質(zhì)越好，完整顆粒的稻谷加工成精米的同時也去掉了其表面的許多有害成分[8]，這與本次試驗結(jié)果相符合。而從營養(yǎng)健康角度出發(fā)，選擇精米還是糙米則應(yīng)該統(tǒng)籌考慮營養(yǎng)健康和食品安全這兩者關(guān)系。