納米材料標(biāo)記分子印跡技術(shù)分析檢測真菌毒素

吳天琪，蘇丹，張亦琴，陳永媛，張穎，劉亭亭，任奕奕，韓雪，郝建雄，胡高爽*

（1.河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊050000；2.中華人民共和國石家莊海關(guān)，河北石家莊050000）

真菌毒素是真菌產(chǎn)生的一類具有高毒性的次級代謝產(chǎn)物，廣泛分布在農(nóng)作物、食品和飼料中，不僅會導(dǎo)致食品霉敗變質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)損失、降低品質(zhì)，還會通過對人和動物機體內(nèi)DNA、RNA、蛋白質(zhì)和各種酶類的合成抑制以及對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞而引起人類和動物的急性或慢性中毒[1-2]。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織估算，全球每年約有25%的農(nóng)產(chǎn)品受到真菌毒素的污染，所造成的經(jīng)濟損失高達(dá)數(shù)千億美元。因此，建立高效快速的真菌毒素檢測方法受到越來越多的關(guān)注。目前針對真菌毒素常用的檢測方法有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）[3]、薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）[4]和高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）[5]等。雖然這些方法具有靈敏度高、分離效能高等優(yōu)點，但由于需要繁瑣的前處理步驟、昂貴的儀器和專業(yè)的操作人員，因而并沒有廣泛應(yīng)用。免疫分析技術(shù)具有檢測速度快、特異性好等優(yōu)點，可以實現(xiàn)大批量樣品的快速檢測，但價格昂貴、試驗結(jié)果易出現(xiàn)假陽性，而且真菌毒素大部分屬于半抗原，因此其作為免疫原獲得抗體比較困難[6]。

分子印跡技術(shù)（molecular imprinting technology，MIT）是基于費希爾模擬的“分子鑰匙和鎖”原理設(shè)計的一種人工合成的分子識別技術(shù)[7]。MIT利用模板分子（待測物）選擇合適的功能單體使之形成可逆的復(fù)合物，加入交聯(lián)劑和引發(fā)劑后在特定的條件下反應(yīng)形成分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs），后通過物理或化學(xué)方式將模板分子洗脫下來，即可得到具有選擇性好、熱穩(wěn)定性高、制備簡單和成本低廉等優(yōu)良性能的仿生抗體。得到的識別位點能夠特異性結(jié)合該模板分子，進而可以實現(xiàn)對后續(xù)的待測物進行高靈敏特異性檢測[8-9]。分子印跡技術(shù)所制備的分子印跡聚合物具有特異識別性、實用性、魯棒性、成本低、靈敏度高、可設(shè)計性強和穩(wěn)定性高等特點，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測領(lǐng)域[10-11]。分子印跡技術(shù)的基本原理如圖 1 所示[8]。

圖1 分子印跡技術(shù)的基本原理Fig.1 Basic principle of molecular imprinting technology

近年來，出現(xiàn)了一些新型的基于功能性納米材料標(biāo)記的分子印跡技術(shù)，突破了傳統(tǒng)分子印跡技術(shù)在靈敏度和穩(wěn)定性上的不足，為真菌毒素高效快速的分析檢測以及樣品前處理提供了新方法，也為食品危害因子的有效控制提供了新思路。本文對基于功能性納米材料的分子印跡技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用進行綜述，包括金納米粒子、碳納米管、金屬-有機骨架、熒光材料（如量子點、碳量子點和上轉(zhuǎn)換納米粒子）和磁性納米材料等，以期為新型功能性納米材料的分子印跡技術(shù)在真菌毒素分析和檢測領(lǐng)域的應(yīng)用提供參考。

1 常用的分子印跡聚合物制備方法

分子印跡聚合物（MIPs）的制備具有操作簡單、直接等特點。目前，MIPs主要有以下幾種制備方法：本體聚合、乳液聚合、懸浮聚合、溶膠-凝膠聚合、表面分子印跡、沉淀聚合等。不同制備方法的優(yōu)缺點對比見表1。

表1 MIPs不同制備方法對比Table 1 Comparisions of different preparation imprinting methods of MIPs

2 功能性納米粒子分子印跡技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

2.1 金納米粒子分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

金、銀等貴金屬納米粒子結(jié)合了納米材料和金屬的特性，具有優(yōu)異的電學(xué)、光學(xué)性質(zhì)以及高度的生物相容性[25]。例如金納米粒子（gold nanoparticles，AuNPs）具有生物相容性良好、比表面積大且化學(xué)物理性質(zhì)穩(wěn)定的優(yōu)點，具有出介導(dǎo)信號放大的作用，將其與MIPs技術(shù)相結(jié)合用于真菌毒素的檢測具有很好的研究意義[26]。

Zhang 等[27]利用 3（2，2′-聯(lián)吡啶）-釕（II）[tris（2，2′-bipyridine）-ruthenium（II），Ru（bpy）32+]摻加二氧化硅納米粒子（Ru@SiO2NPs）構(gòu)建了一種新型分子印跡電化學(xué)發(fā)光傳感器，并用于牛奶和玉米樣品中伏馬毒素B1（fumonisin B1，F(xiàn)B1）的高靈敏檢測。該研究基于AuNPs優(yōu)異的局域表面等離子體共振效應(yīng)和電化學(xué)效應(yīng)，實現(xiàn)提高分析靈敏度的目的。此傳感器對FB1的檢出限能夠達(dá)到0.35pg/mL，線性范圍為0.001ng/mL～100ng/mL。AKG?NüLLü等[28]以黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）和N-甲基丙烯酰苯丙氨酸為模板分子和功能單體進行預(yù)復(fù)合，然后在表面等離子共振（surface plasmon resonance，SPR）金芯片表面涂覆了含AuNPs的分子印跡聚合物，制備了一種新型的納米印跡傳感器，用以檢測玉米樣品中的AFB1。AFB1印跡納米傳感器顯示出很寬的線性范圍，介于0.000 1 ng/mL和10.0 ng/mL之間，檢測限為1.04 pg/mL。實現(xiàn)了對多種食品樣品中AFB1高靈敏度和高選擇性的檢測。Gu等[29]開發(fā)了一種AuNPs摻雜分子印跡層和共價有機骨架復(fù)合物（COFs-AuNPs）的石英晶體微天平（quartz crystal microbalance，QCM）傳感器，用于花生、開心果、水稻、小麥樣品中AFB1的檢測。COFs-AuNPs復(fù)合物提供了較大的比表面積，具有靈敏度高和選擇性強的特性。該傳感器線性范圍為0.05 ng/mL～75 ng/mL，檢測限為2.8 pg/mL，實際樣品回收率介于87.0%～101.7%之間。Fang等[30]將鄰氨基噻吩電聚合在金納米顆粒復(fù)合介孔碳（AuNPs@CMK-3）修飾的金電極表面，構(gòu)建了一種新型三維分子印跡石英晶體微天平（quartz crystal microba-lance，QCM）傳感器用于谷物樣品痕量桔霉素（citrinin，CIT）檢測。由于AuNPs@CMK-3功能復(fù)合物的3D結(jié)構(gòu)和大的比表面積有利于增加有效印跡位點的數(shù)量并隨后提高傳感器的靈敏度。因此，AuNPs@CMK-3功能復(fù)合物可充當(dāng)信號放大器。該方法檢測限為1.8×10-9mol/L，表現(xiàn)出良好的選擇性識別能力、抗干擾能力、重現(xiàn)性好和穩(wěn)定性高等特點。Jiang等[31]以氨基噻吩功能化的AuNPs為模板分子，電聚合制備了一種用于檢測杏仁、巴西堅果、榛子、開心果、無花果干中AFB1的電化學(xué)分子印跡傳感器，示意圖如圖2所示[31]。該分子印跡傳感器的線性范圍很寬，在3.2×10-15mol/L～3.2×10-6mol/L 之間，定量限為 3×10-15mol/L，表現(xiàn)出靈敏度高重復(fù)性好的特點，有望成為食品中AFB1選擇性電化學(xué)檢測的有效方法。

圖2 基于AuNPs的黃曲霉毒素B1分子印跡傳感器示意圖Fig.2 Schematic diagram of aflatoxin B1 molecularly imprinted sensor based on AuNPs

2.2 碳納米管分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

碳納米管（carbon nanotubes，CNTs）是一種重要的功能性納米材料，具有輕質(zhì)、剛性、比表面積大、高拉伸機械強度、導(dǎo)熱性良好、抗機械損傷和化學(xué)性質(zhì)獨特等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、生物工程、電子和環(huán)境保護等領(lǐng)域[32-33]。CNTs分為單壁碳納米管和多壁碳納米管（multi walled carbon nanotubes，MWCNT），前者僅僅由一層圓柱型石墨烯片構(gòu)成，后者則含有一層以上石墨烯片層。其中多壁碳納米管具有獨特的管狀結(jié)構(gòu)和極高的表面積，并且具有能夠儲存各種元素和化學(xué)物質(zhì)的多孔結(jié)構(gòu)，使其對真菌毒素的吸附具有選擇性，從而在真菌毒素的檢測中具有廣泛的應(yīng)用[34]。Pacheco等[35]通過用MWCNT和MIPs修飾玻碳電極（glassy carbon electrode，GCE），制備了一種用于檢測赭曲霉毒素A（ochratoxin A，OTA）的新型電化學(xué)傳感器，示意圖如圖3所示[34]。

圖3 MWCNT-MIPs制備示意圖Fig.3 Preparation of MWCNT-MIPS

MWCNT的應(yīng)用增加了傳感器的電導(dǎo)率和表面積，大大提高了傳感器的靈敏度。MIP/MWCNT/GCE傳感器使用差分脈沖伏安法時，檢測限和定量限分別為1.7 μg/L 和 5.7 μg/L。由于 MIPs/MWCNT/GCE 傳感器易于制造且易于使用，已成功用于加標(biāo)啤酒和葡萄酒樣品中OTA的測定，回收率在84%～104%之間，且無需樣品預(yù)處理步驟。

2.3 金屬-有機骨架分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

金屬-有機骨架（metal-organic frameworks，MOFs）是一類由金屬離子或金屬離子簇與有機配體連接而成的相對較新的多孔晶體雜化有機-無機材料[36]。MOFs通過多齒有機配體和金屬離子的自組裝，合成具有類沸石網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的金屬有機骨架[37]。在MOFs中，有機配體和金屬離子或團簇的排列具有明顯的方向性，可以形成不同的框架孔隙結(jié)構(gòu)，從而表現(xiàn)出不同的吸附性能、光學(xué)性質(zhì)、電磁學(xué)性質(zhì)等。雖然MOFs材料在潮濕環(huán)境中的穩(wěn)定性及吸附性能均會明顯降低，但由于MOFs具有超高孔隙率、穩(wěn)定骨架、無毒性、大的內(nèi)表面積和化學(xué)功能高等優(yōu)點，在現(xiàn)代材料學(xué)方面呈現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摿桶l(fā)展前景。

BAGHERI等[38]將MIPs的選擇性識別特性與新型銀納米粒子/片狀鋅基 MOFs納米復(fù)合材料（Ag－NPs@ZnMOFs）突出的過氧化物酶活性以及靈敏的熒光檢測系統(tǒng)相結(jié)合，設(shè)計了一種可靠的展青霉素（patulin，PAT）探針，用于復(fù)雜水生環(huán)境或蘋果汁中PAT的檢測。該復(fù)合材料具有良好的穩(wěn)定性、較大的比表面積和較高的選擇性吸附親和力。在PAT存在的情況下，熒光強度在 0.1 μmol/L～10 μmol/L的范圍內(nèi)與其濃度成比例地降低，檢測限為0.06 μmol/L。該方法能夠在復(fù)雜介質(zhì)中選擇性地檢測PAT，而沒有來自模擬化合物的顯著干擾作用。Liang等[39]將MIPs與氨基功能化的鋯基金屬-有機骨架相結(jié)合（UiO-66-NH2@MIPs），制備了UiO-66-NH2@MIPs型表面印跡聚合物。利用MOFs的特殊識別特性、多孔性和化學(xué)修飾性，制備了新型吸附劑，并成功地用于糧食中黃曲霉毒素（aflatoxin，AFs）的定量分析。HPLC測定結(jié)果表明經(jīng)過該吸附劑處理的樣品具有良好的線性范圍（0.20 μg/kg～45 μg/kg）、低檢測限（90 μg/kg～130 μg/kg）和較好的回收率（74.3%～98.6%），證明該新型吸附劑具有良好的選擇性和可重用性。Du等[40]通過利用發(fā)光金屬-有機骨架建立了一種基于分子印跡聚合物的熒光傳感器，可高靈敏度檢測小麥中玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）。結(jié)果表明，該方法的檢出限為0.018 mg/L，且具有良好的回收率（95.53%～98.01%）。該傳感器表現(xiàn)出穩(wěn)定性高，選擇性好的優(yōu)點。

MOFs材料受熱易分解，因此可將其高溫煅燒碳化制備穩(wěn)定的納米多孔碳（nanoporous carbon，MNPC）材料，具有重要的研究意義[41]。Wu等[42]采用原子轉(zhuǎn)移自由基沉淀聚合法，在MNPC核表面包覆MIPs，其以3-香豆素羧酸乙酯為假模板，得到對AFs具有特異識別能力的MIPs。MNPC具有大孔體積，可以方便、有效地覆蓋聚合物層。利用MNPC@MIPs提取AFs，再用高效液相色譜法測定AFs的含量。在最佳條件下，加標(biāo)玉米樣品中AFs的檢測限通常為0.05ng/mL～0.07ng/mL，回收率為 75.1%～99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.7～5.1（n=6）。

2.4 熒光納米粒子的分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

熒光納米粒子分子印跡聚合物是指在聚合物中導(dǎo)入具有特異性識別能力的熒光信號，使待測物能夠被特定的熒光檢測機制所識別，具有靈敏度高，反應(yīng)迅速等優(yōu)點。目前常見的具有可操作性的熒光納米粒子主要有量子點、碳量子點、上轉(zhuǎn)換納米材料等。

2.4.1 量子點分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

量子點（quantum dot，QDs）作為一種越來越受關(guān)注的熒光納米粒子，是一種納米級別的半導(dǎo)體。因其具有獨特的光學(xué)和電子特性，如具有寬激發(fā)光的清晰發(fā)射帶和對光致漂白分子印跡聚合物的強耐受性，從而體現(xiàn)出對稱發(fā)射分布、高量子產(chǎn)率和高靈敏度等突出優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于各種檢測中[43-44]。但傳統(tǒng)量子點多含有重金屬元素，如汞、鎘等，操作不當(dāng)容易對人類和環(huán)境造成一定的危害，因此在食品檢測中應(yīng)合理利用QDs[45]。

MADURANGIKA等[46]用MIPs納米傳感器包覆Mn摻雜ZnS量子點制備了一種簡單的室溫磷光納米傳感器，并應(yīng)用于魚飼料中AFs的測定，樣品檢出限為3.56 μg/kg。該方法具有吸附能力強、成本低、靈敏度高、選擇性好等特點。Zhang等[47]采用表面分子印跡溶膠-凝膠法合成了Mn摻雜ZnS量子點納米傳感器，用于蘋果汁中PAT的選擇性測定。MIPs-QDs比非印跡聚合物具有更高的選擇性、吸附容量和傳質(zhì)速率，在競爭性真菌毒素及其類似物中，對PAT有特異性識別能力。MIPs-QDs對PAT的識別線性范圍為0.43 μmol/L～6.50 μmol/L，方法檢測限為 0.32 μmol/L，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.994 5。Guo等[48]以3-氨丙基三乙氧基硅烷為功能單體，正硅酸乙酯為交聯(lián)劑，并將分子印跡技術(shù)與量子點技術(shù)相結(jié)合，合成了一種新型、靈敏的熒光傳感器，用以檢測食品和中藥樣品中的AFB1。該試驗在最佳條件下，MIPs@CdTe QDs基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移機制，其檢測樣品的相對熒光強度與AFB1濃度在80ng/g～400 ng/g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢測限為4 ng/g。Chmangui等[49]將合成的MIPs材料錨定在聚乙二醇-錳 （polyethylene glycol manganese，PEG-Mn） 摻雜的ZnS量子點（QDs）表面，建立了識別測定非乳飲料中AFs的熒光探針。制備的MIPs-QDs復(fù)合物對AFs具有很高的親和力和選擇性，該方法檢測限和定量限分別為0.016 mg/L和0.053 mg/L。

石墨烯量子點（graphene quantum dots，GQDs）是石墨烯片的小型化衍生物，其可以分離界面產(chǎn)生的電荷，并向電極提供電荷傳輸路徑[50]。GQDs是一類新型的碳納米材料，與傳統(tǒng)的量子點相比，具有毒性低、生物相容性好等優(yōu)點[51]。目前，制備石墨烯量子點的方法大致可以分為兩種：尺寸調(diào)控和表面化學(xué)反應(yīng)，前者是將石墨烯、碳纖維、碳納米管等含大量石墨烯結(jié)構(gòu)的碳物質(zhì)通過物理方法、化學(xué)方法或電化學(xué)方法進行分割得到石墨烯量子點；后者是在石墨烯量子點表面修飾羥基、羰基和羧基等基團或摻雜氮、硫、硼等雜原子，以改變石墨烯量子點的性質(zhì)[52-53]。Aky?ld?r?m 等[54]以石墨烯量子點（GQDs）修飾鈀納米粒子（palladium nanoparticles，PdNPs）的GCE為基礎(chǔ)，制備了用于桔霉素（citrinin，CIT）分析的功能性納米粒子MIPs。納米傳感器的線性范圍為 1.0×10-9mol/L～5.0×10-9mol/L，檢出限為2.0×10-10mol/L，其能夠快速靈敏的檢測雞蛋樣品中的CIT，且材料消耗少。

2.4.2 碳量子點分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

碳量子點（carbon quantum dots，CQDs）是一種新興量子尺寸（10 nm以下）的碳納米材料，根據(jù)前驅(qū)體和制備方法的不同，CQDs的制備方法可分為自上向下法和自下而上法，前者主要是將碳源中的大分子分離并石墨化，使大分子變成小的有機物，然后碳化形成CQDs；后者則是小分子聚合形成大分子，然后碳化形成CQDs[55]。CQDs由于具有綠色合成、導(dǎo)電性顯著、易于功能化、低毒、生物相容性好和成本低等優(yōu)點，已被應(yīng)用于分子印跡領(lǐng)域[56]。

Shao等[57]合成了高發(fā)光的CQDs，然后通過非水解溶膠-凝膠法將其封裝在硅基基體中，制備了分子印跡熒光猝滅粒子（molecularly imprinted fluorescence quenching particles，MIFQP）。所制備的印跡粒子對谷物樣品中的ZEN不僅具有優(yōu)異的分子識別能力，而且具有良好的光穩(wěn)定性和明顯的模板結(jié)合誘導(dǎo)熒光猝滅作用。在優(yōu)化條件下，MIFQP的熒光強度與ZEN的濃度成反比，MIFQP傳感器對玉米樣品中的ZEN檢測范圍在0.02 mg/L～1.0 mg/L之間，檢測限為0.02 mg/L，回收率為78%～105%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%，具有實際應(yīng)用的潛力。Liang等[58]采用碳量子點修飾的模擬分子印跡聚合物（carbon quantum dots-coated dummy molecularly imprinted polymer，CDs-DMIP） 整體柱預(yù)處理，結(jié)合高效液相色譜-熒光檢測（high performance liquid chromatography fluorescence detection，HPLC-FLD），建立了測定花生樣品中AFB1的新方法。該試驗對花生樣品的檢測限和定量限分別為0.118ng/mL和0.393ng/mL。在優(yōu)化條件下，富集倍數(shù)可達(dá)71倍以上，CDs-DMIPHPLC-FLD法可靈敏地測定花生樣品及其它樣品中的AFB1。

2.4.3 上轉(zhuǎn)換納米材料分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

上轉(zhuǎn)換發(fā)射熒光是指兩個或多個光子的順序吸收導(dǎo)致光在較短波長（通常在可見范圍內(nèi)）發(fā)射的非線性光學(xué)過程，而不是激發(fā)波長（紅外或近紅外），這意味著上轉(zhuǎn)換納米粒子（upconversion nanoparticles，UCNPs）遵循反斯托克斯定律，可以吸收兩個或多個低能光子發(fā)射高能光子[59]。與傳統(tǒng)的熒光材料如熒光染料和半導(dǎo)體量子點相比，上轉(zhuǎn)換納米粒子具有發(fā)射光譜清晰、壽命長、斯托克斯位移大、光穩(wěn)定性強、自發(fā)熒光背景低和毒性低等突出特性，因此越來越受到人們的關(guān)注[60-61]。

Liu等[62]基于MIPs的高選擇性和UCNPs的熒光特性，制備了具有特異性和熒光信號的MIPs，以識別真菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物雜色曲霉素（aspergillus variegatus，ST），在 0.05 mg/L～1.0 mg/L 范圍內(nèi)，熒光印跡聚合物的熒光強度與濃度呈良好的線性關(guān)系，檢出限為0.013 mg/L。實際樣品大米、玉米和大豆的回收率分別為83.8%～88.8%、82.1%～87.5%和 80.6%～89.2%，表明了該方法的可行性。Yan等[63]合成了一種基于UCNPs的新型MIPs，最終的復(fù)合物結(jié)合了MIPs的高選擇性和UCNPs的高熒光強度的優(yōu)點，對OTA具有選擇性和敏感性。結(jié)果表明在最優(yōu)條件下，當(dāng)OTA濃度為0.05 mg/L～1.0 mg/L時，熒光印跡聚合物的熒光猝滅程度與OTA的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。OTA的熒光傳感檢測方法的最低檢出限為0.031 mg/L。玉米、大米和飼料中OTA的回收率范圍分別為88.0%～91.6%、80.2%～91.6%和89.2%～90.4%。

2.5 磁性分子印跡聚合物在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

Fe3O4具有無毒、制備簡單和吸附動力學(xué)快等特點，近年來，以Fe3O4微球為磁性成分的磁性分子印跡聚合物在真菌毒素檢測領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注。通過在磁性納米粒子表面上合成MIPs殼，制備了磁性分子印跡聚合物（magnetic molecularly imprinted polymers，MMIPs），其與MIPs相比，MMIPs具有較高的吸附容量和優(yōu)異的磁性，在目標(biāo)組分的分離或檢測中具有廣泛的應(yīng)用前景[64-65]。

Hu等[66]在磁納米粒子表面沉積了一種聚多巴胺的分子印跡聚合物（Fe3O4@PDAMIPs），其是一種高效特異的吸附劑，可用于各種赭曲霉毒素的提取。在最佳條件下，赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B和赭曲霉毒素C的校正曲線分別在0.01ng/mL～1.0ng/mL、0.02ng/mL～2.0 ng/mL和0.002 ng/mL～0.2 ng/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。大米和葡萄酒樣品的檢出限在1.8 pg/mL～18 pg/mL之間，加標(biāo)回收率為71.0%～88.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%和3.8%，此外，MIPs可多次重復(fù)使用，節(jié)約成本。Huang等[67]以Fe3O4為磁芯，改性埃洛石納米管為載體，選擇性印跡聚合物為殼，制備了MMIPs，并實現(xiàn)了對谷物樣品中的ZEN的提取和富集。方法的線性范圍為10 ng/mL～200 ng/mL，檢測限和定量限分別為2.5 ng/mL和8 ng/mL。玉米樣品的ZEN加標(biāo)回收率在74.95%～88.41%之間。Turan等[68]在磁性納米粒子表面合成了高選擇性的MIPs，實現(xiàn)了對葡萄汁樣品中OTA的快速檢測。結(jié)果表明，MMIPs對OTA具有吸附速度快、吸附容量大、選擇性高等特點。加標(biāo)葡萄汁樣品中OTA的回收率為97.1%～97.4%。MMIPs對OTA靶點具有很高的親和力，在食品樣品的純化方面有很大的應(yīng)用潛力。Fu等[69]采用表面印跡技術(shù)制備MMIPs，將其與高效液相色譜-熒光檢測器（HPLC-FLD）結(jié)合，快速測定谷物中ZEN。在實際樣品檢測中，檢出限和定量限分別為0.4 ng/kg和0.9 ng/kg。樣品回收率為90.56%～99.96%。結(jié)果表明，MMIPs對ZEN有很好的選擇性，適合于谷物中ZEN的測定。Díaz-Bao等[70]將分子印跡技術(shù)與磁性粒子相結(jié)合，開發(fā)了一種快速簡便的制備磁性分子印跡攪拌棒（magnetic molecularly imprinted stirbars，MMIP-SB）的方法。該試驗以MMIP-SB為常規(guī)攪拌棒，結(jié)合高效液相色譜和質(zhì)譜法測定奶粉（嬰兒配方食品）中的黃曲霉毒素M1和谷類嬰兒食品中的黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2。結(jié)果表明，黃曲霉毒素M1、黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2的平均回收率分別為60%、43%、40%、44%和39%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。Fu等[71]以Fe3O4納米粒子為載體，采用表面印跡法制備MMIPs，將其與HPLC相結(jié)合，快速測定果汁中的PAT。在實際樣品應(yīng)用中，檢出限和定量限分別為3μg/kg和10μg/kg，樣品回收率為86.44%～95.50%。結(jié)果表明，MMIPs對PAT具有良好的分離性能，適合于實際樣品中PAT的測定。Cavaliere等[72]以槲皮素為假模板合成MMIPs，從谷物粉中選擇性提取ZEN。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定分析物，ZEN回收率大于95%，定量限為0.14 ng/g，比歐洲法律規(guī)定的大多數(shù)谷物的最大限值低約500倍。

3 總結(jié)與展望

近年來，真菌毒素殘留問題受到人們的高度關(guān)注，基于新型納米粒子標(biāo)記的分子印跡技術(shù)將具有一定特性的功能性納米粒子與分子印跡技術(shù)相結(jié)合，極大的提高了MIPs識別待測物的靈敏度和吸附性，在真菌毒素檢測方面得到廣泛應(yīng)用。新型納米粒子標(biāo)記分子印跡技術(shù)是將具有一定特性的功能性納米粒子與分子印跡技術(shù)相結(jié)合，極大的提高了MIPs識別待測物的靈敏度和吸附性。為了讓功能性納米粒子標(biāo)記的MIT更好地應(yīng)用于食品與飼料中真菌毒素的檢測，未來的研究方向可能會集中在以下領(lǐng)域：1）真菌毒素本身具有劇毒和價格昂貴等特性，只能通過其結(jié)構(gòu)類似物作為替代模板進行分子印跡聚合物的制備，需解決聚合物特異識別能力較低的問題；2）開發(fā)能夠同時檢測多種待測物的功能性納米粒子分子印跡傳感器，以求實現(xiàn)對大量樣品進行快速現(xiàn)場篩查；3）開發(fā)新型功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑，使得模板分子更易洗脫；4）將功能型納米粒子與MIPs相結(jié)合，進一步實現(xiàn)真菌毒素的快速、高靈敏檢測，如：氧化石墨烯與金屬氧化物合成用作吸附劑的納米復(fù)合材料，以此來解決氧化石墨烯可靠性和可重復(fù)性以及非特異性差的問題，解決MOFs材料在潮濕環(huán)境中性能差的問題，解決上轉(zhuǎn)換給體的壽命易縮短和上轉(zhuǎn)換發(fā)光易猝滅等問題。