• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃芪甲苷通過RhoA/ROCK2通路對(duì)腦膜炎大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的保護(hù)作用

    2021-11-24 08:38:28安喆妮
    中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2021年11期
    關(guān)鍵詞:甲苷激動(dòng)劑皮質(zhì)

    于 倩,安喆妮

    (湖南省兒童醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410007)

    細(xì)菌性腦膜炎(bacterial meningitis,BM)多發(fā)于新生兒期,是由不同病原菌引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病[1]。B族溶血性鏈球菌(group B hemolytic strepto coccus,GBS)是引起新生兒腦水腫、血腦屏障損傷、神經(jīng)系統(tǒng)損傷及死亡的主要致病菌[2]。RAS同源基因家族成員A(RAS homologous gene family member A,RhoA)/Rho相關(guān)螺旋卷曲蛋白激酶2(Rhorelated spiral coiled protein kinase 2,ROCK2)通路可抑制神經(jīng)元內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)入、收斂細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)、抑制軸突生長(zhǎng),從而參與神經(jīng)元突起的延長(zhǎng)和再生過程[3],且抑制RhoA/ROCK2通路對(duì)神經(jīng)有保護(hù)作用[4]。但RhoA/ROCK2通路在BM神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的調(diào)控作用,還未見報(bào)道。黃芪甲苷是中藥黃芪中的主要活性成分之一,現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷能顯著抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥損傷,并能夠通過調(diào)控mTOR、炎癥、氧化應(yīng)激、線粒體自噬等多種途徑,來抑制神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)神經(jīng)元再生及修復(fù),并發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[5]。但黃芪甲苷是否對(duì)BM引起的神經(jīng)損傷有保護(hù)作用,還未見報(bào)道。本研究擬建立大鼠BM模型,對(duì)此進(jìn)行驗(yàn)證,并探究其發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用是否與RhoA/ROCK途徑有關(guān),以期為黃芪甲苷的開發(fā)應(yīng)用及BM的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3周齡健康SPF級(jí)SD新生大鼠100只,體質(zhì)量約50 g,雌雄不限,購自福州海王福藥制藥有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(閩)2020-0001,動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(閩)2020-0006。所有大鼠于本院動(dòng)物房中常規(guī)飼養(yǎng),飼養(yǎng)條件:室溫(23±2)℃,濕度(55±10)%,自然光照。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意,符合3R原則。

    1.2 藥物與試劑 黃芪甲苷鈉標(biāo)準(zhǔn)品(上海寶曼生物科技有限公司,批號(hào):20190413);腫瘤壞死因子(TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司,批號(hào):20190303);神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司,批號(hào):20190403);降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒(上海撫生實(shí)業(yè)有限公司,批號(hào):20190523);兔抗大鼠RhoA抗體(美國(guó)abcam公司,貨號(hào):ab187027);ROCK抗體(美國(guó)abcam公司,貨號(hào):ab134181);勿動(dòng)蛋白-A(Nogo-A)抗體(美國(guó)abcam公司,貨號(hào):ab62024);溶血磷脂酸(LPA)抗體(美國(guó)abcam公司,貨號(hào):ab23698);雞抗大鼠微管相關(guān)蛋白2(MAP2)抗體(美國(guó)abcam公司,貨號(hào):ab5392);TUNEL染色試劑盒(北京伊塔生物科技有限公司,批號(hào):20190304);鬼筆環(huán)肽染色液(廣州宏新生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20190416)。

    1.3 主要儀器 SMZ745型光學(xué)顯微鏡(日本尼康公司);GIS-500型化學(xué)發(fā)光成像儀(杭州米歐公司號(hào));ASA-602S腦立體定向儀(深圳安科高技術(shù)股份有限公司);Mini-PROTEAN Tetra Cell蛋白電泳儀(美國(guó)伯樂公司);M-Blot快速轉(zhuǎn)膜儀(南京中科通儀科技有限公司);JEM-F200透射電鏡儀器(日本電子株式會(huì)社)。

    1.4 造模與分組 取SD新生大鼠80只,參照文獻(xiàn)[6]方法制備GBS菌液,將大鼠麻醉后,用腦立體定向儀向大鼠小腦延髓池注入濃度為1×108cfu/L的GBS菌液50 μL,建立BM模型。感染后24 h,抽取腦脊液并檢測(cè)腦脊液中TNF-α水平,若TNF-α水平高于正常腦脊液10倍以上,視為造模成功。共80只大鼠造模成功,將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、黃芪甲苷組、RhoA激動(dòng)劑組、黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組,每組20只。另取20只大鼠,于腦側(cè)室相同部位注入等量生理鹽水,作為正常對(duì)照組。

    1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 參照文獻(xiàn)[7]將黃芪甲苷用生理鹽水稀釋成濃度為4.00 mg/mL的混懸液,黃芪甲苷組大鼠按10 mL/kg的劑量經(jīng)腹腔注射給藥3 d,2次/d;RhoA激動(dòng)劑參照文獻(xiàn)[8]設(shè)置劑量,RhoA激動(dòng)劑組大鼠用微量注射器于小腦延髓池注入濃度為50 μmoL/L的RhoA激動(dòng)劑溶液(按1 mL/kg劑量,每只大鼠約50 μL)1次;黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腹腔注射黃芪甲苷溶液的同時(shí)經(jīng)小腦延髓池注射RhoA激動(dòng)劑溶液;模型組及正常對(duì)照組大鼠經(jīng)腹腔注射及經(jīng)小腦延髓池注射等量生理鹽水。

    1.6 觀察指標(biāo)

    1.6.1 大鼠一般行為觀察 給藥期間觀察各組大鼠毛色、行為活動(dòng)及死亡狀況。

    1.6.2 大鼠腦脊液中TNF-α、NSE及PCT水平 0.3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,用腦立體定向儀,從小腦延髓池穿刺進(jìn)針后回抽腦脊液50 μL,取1 mL腦脊液,按ELISA試劑盒說明書檢測(cè)TNF-α、NSE及PCT水平。

    1.6.3 大鼠腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu) 將大鼠用0.3%戊巴比妥鈉麻醉后,采用尾靜脈空氣栓塞法處死,開顱取腦,冰上分離腦皮質(zhì)組織,剪取1 mm3腦皮質(zhì)組織,用4%戊二醛固定后,送于電鏡室處理后,電鏡下觀察腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)變化。剩余腦皮質(zhì)組織分成兩部分,一部分置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?,另一部分置?%多聚甲醛中固定備用。

    1.6.4 大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率 取“1.6.3”項(xiàng)下4%多聚甲醛中固定的腦皮質(zhì)組織,常規(guī)透明、浸蠟、包埋后,切成5 μm的間斷連續(xù)切片。取部分切片,按TUNEL染色試劑盒說明書方法進(jìn)行染色后,置于顯微鏡下觀察神經(jīng)元染色情況,凋亡細(xì)胞被染為紅棕色,用Image J圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

    1.6.5 F-actin在神經(jīng)元細(xì)胞中分布情況 取“1.6.4”項(xiàng)下部分切片石蠟切片,脫蠟及抗原修復(fù)后,加入曲拉通(Triton)透化30 min,滴加IgG標(biāo)記的MAP2(1∶200)抗體,室溫孵育過夜后,滴加相應(yīng)二抗溶液,室溫避光孵育1 h后,加入2 mg/mL FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽溶液室溫避光染色3 h后,用抗熒光淬滅劑封片,熒光共聚焦顯微鏡觀察腦皮層神經(jīng)元中F-actin分布情況。

    1.6.6 MAP2與RhoA共表達(dá)水平 取“1.6.4”項(xiàng)下部分切片,脫蠟及抗原修復(fù)后,加入曲拉通(Triton)透化1 h,加入一抗(MAP2、RhoA,1∶200),4 ℃孵育過夜后,加入二抗[羊抗兔-FITC(綠)和山羊抗雞IgG(紅)]室溫避光孵育2 h,DAPI顯色,封片,用熒光顯微鏡觀察并拍照,并通過Image Pro Plus 5.0圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽性染色細(xì)胞數(shù)目。

    1.6.7 大鼠腦皮質(zhì)組織ROCK2陽性表達(dá)水平 取“1.6.4”項(xiàng)下部分切片石蠟切片,于37 ℃條件脫蠟、水化、抗原修復(fù)后,加入一抗(ROCK2,1∶500),4 ℃孵育過夜后,加入羊抗兔二抗(1∶1 000),4 ℃孵育3 h,后進(jìn)行DAB顯色及蘇木精溶液復(fù)染、透明、封片,于光鏡下觀察拍照,用Image Pro Plus 5.0圖像分析系統(tǒng)分析單位面積內(nèi)棕褐色區(qū)域積分光密度值。

    1.6.8 大鼠腦皮質(zhì)組織Nogo-A、LPA蛋白相對(duì)表達(dá)水平 取“1.6.4”中-80 ℃保存的腦皮質(zhì)組織,4 ℃解凍后,冰上勻漿分離提取蛋白,用BCA法檢測(cè)蛋白總濃度。取50 μg蛋白進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜反應(yīng),并加入一抗(Nogo-A、LPA,1∶800,內(nèi)參β-actin,1∶1 000),4 ℃孵育過夜,加入HRP羊抗兔二抗(1∶3 000)室溫孵育2 h,用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色,以化學(xué)發(fā)光成像儀觀察條帶并拍照,以Image-J軟件分析各組蛋白相對(duì)表達(dá)。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”()表示,單因素方差分析行多組間比較,SNK-q檢驗(yàn)行進(jìn)一步組間兩兩比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 各組大鼠一般行為觀察 正常對(duì)照組大鼠無死亡,飲食及活動(dòng)正常;模型組和黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠有4只死亡,活動(dòng)量減少;黃芪甲苷組大鼠無死亡,活動(dòng)量稍有增加;RhoA激動(dòng)劑組大鼠有8只死亡,活動(dòng)量進(jìn)一步減少。

    2.2 各組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT水平比較 與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT水平明顯升高(P<0.05);與模型組比較,黃芪甲苷組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT水平明顯降低(P<0.05),RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT水平明顯升高(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦脊液中NSE、PCT水平明顯高于黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦脊液中NSE、PCT水平與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表1)

    表1 各組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT 水平比較()

    表1 各組大鼠腦脊液中TNF-α、NSE、PCT 水平比較()

    注:與正常對(duì)照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05;與黃芪甲苷組比較,cP<0.05

    2.3 各組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化比較 正常對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常;模型組及黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元損傷,可見線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等細(xì)胞器壞死現(xiàn)象;黃芪甲苷組大鼠神經(jīng)元較為規(guī)整,且細(xì)胞器壞死減少;RhoA激動(dòng)劑組大鼠神經(jīng)元損傷及細(xì)胞器變形壞死進(jìn)一步加重。(見圖1)

    圖1 各組大鼠腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)圖(×15 000)

    2.4 各組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率比較 模型組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05);黃芪甲苷組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率明顯低于模型組(P<0.05);RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率明顯高于模型組和黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率明顯高于黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見圖2、表2)

    圖2 大鼠腦皮質(zhì)組織TUNEL 染色圖(×400)

    表2 各組大鼠腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率比較(,%)

    表2 各組大鼠腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率比較(,%)

    注:與正常對(duì)照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05;與黃芪甲苷組比較,cP<0.05

    2.5 黃芪甲苷對(duì)大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞骨架重排的影響 F-actin為細(xì)胞骨架重排的標(biāo)志分子,熒光染色顯示:正常對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞胞漿中F-actin熒光表達(dá)較弱;模型組和黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠F-actin的纖維形態(tài)及排列異常,出現(xiàn)大量板狀偽足和應(yīng)力纖維;黃芪甲苷組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞漿中F-actin分布減少,神經(jīng)元形態(tài)與正常對(duì)照組相近;RhoA激動(dòng)劑組大鼠F-actin的纖維形態(tài)及排列異?,F(xiàn)象進(jìn)一步加重。(見圖3)

    圖3 鬼筆環(huán)肽染色法檢測(cè)F-actin在神經(jīng)元中的分布圖(×1000)

    2.6 各組大鼠腦皮質(zhì)組織RhoA與MAP2陽性表達(dá)比較 MAP2標(biāo)記的神經(jīng)元顯紅色熒光,RhoA可陽性表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞漿中。模型組大鼠RhoA+MAP2+陽性表達(dá)數(shù)目高于正常對(duì)照組(P<0.05);黃芪甲苷組大鼠RhoA+MAP2+陽性表達(dá)數(shù)目低于模型組(P<0.05);RhoA激動(dòng)劑組大鼠RhoA+MAP2+陽性表達(dá)數(shù)目高于模型組和黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠RhoA+MAP2+陽性表達(dá)數(shù)目高于黃芪甲苷組(P<0.05)。(見圖4、表3)

    圖4 各組大鼠腦皮質(zhì)組織RhoA與MAP2免疫熒光雙染圖(×200)

    表3 各組大鼠腦皮質(zhì)組織RhoA 與MAP2 陽性表達(dá)水平比較()

    表3 各組大鼠腦皮質(zhì)組織RhoA 與MAP2 陽性表達(dá)水平比較()

    注:與正常對(duì)照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05;與黃芪甲苷組比較,cP<0.05

    2.7 各組大鼠腦皮質(zhì)組織中ROCK2陽性表達(dá)比較 ROCK2在正常對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)組織神經(jīng)元中呈弱陽性表達(dá);與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠腦皮質(zhì)組織中ROCK2陽性表達(dá)明顯升高(P<0.05);與模型組比較,黃芪甲苷組大鼠腦皮質(zhì)組織中ROCK2陽性表達(dá)明顯降低(P<0.05);RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)組織中ROCK2陽性表達(dá)明顯高于模型組和黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)組織中ROCK2陽性表達(dá)明顯高于黃芪甲苷組(P<0.05)。(見圖5、表4)

    表4 各組大鼠腦皮質(zhì)組織ROCK2 陽性表達(dá)水平比較()

    表4 各組大鼠腦皮質(zhì)組織ROCK2 陽性表達(dá)水平比較()

    注:與正常對(duì)照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05;與黃芪甲苷組比較,cP<0.05

    圖5 各組大鼠腦皮質(zhì)組織ROCK 蛋白的免疫組化染色圖(×200)

    2.8 各組大鼠腦皮質(zhì)組織Nogo-A、LPA蛋白表達(dá)比較 與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠腦皮質(zhì)組織中Nogo-A、LPA蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯升高(P<0.05);與模型組比較,黃芪甲苷組大鼠腦皮質(zhì)組織中Nogo-A、LPA蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低(P<0.05);RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)組織中Nogo-A、LPA蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯高于模型組和黃芪甲苷組(P<0.05);黃芪甲苷+RhoA激動(dòng)劑組大鼠腦皮質(zhì)組織中Nogo-A、LPA蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯高于黃芪甲苷組(P<0.05)。(見圖6、表5)

    圖6 各組大鼠腦皮質(zhì)組織Nogo-A、LPA 蛋白免疫印跡圖

    表5 各組大鼠腦皮質(zhì)組織Nogo-A、LPA 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較()

    表5 各組大鼠腦皮質(zhì)組織Nogo-A、LPA 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較()

    注:與正常對(duì)照組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05;與黃芪甲苷組比較,cP<0.05

    3 討 論

    BM病死率及病殘率較高,據(jù)流行病學(xué)分析,GBS感染引起的BM,可導(dǎo)致約10%的患兒死亡,35%左右的患兒發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[1]。目前研究發(fā)現(xiàn),BM不良預(yù)后,與GBS等致病菌感染腦膜及皮質(zhì)組織后,引起的神經(jīng)元損傷及凋亡有關(guān)[9]。胡婧婧等[10]認(rèn)為細(xì)菌感染后引起的炎癥刺激及中樞神經(jīng)損傷是導(dǎo)致BM患兒死亡和傷殘的主要原因,并認(rèn)為BM患兒腦脊液中神經(jīng)元損傷后釋放物質(zhì)——NSE水平及炎癥敏感且特異的標(biāo)志物——PCT等水平越高,預(yù)示BM預(yù)后及轉(zhuǎn)歸越差。TNF-α是細(xì)菌感染標(biāo)志物,DINIZ A M M等[11]發(fā)現(xiàn)BM患者血清及腦脊液中TNF-α水平明顯高于正常人群。本研究經(jīng)新生大鼠側(cè)腦室注射GBS后,大鼠腦脊液中TNF-α水平增多的同時(shí),NSE及PCT水平也高于正常對(duì)照組,且大鼠死亡、神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡現(xiàn)象也顯著增加,提示GBS感染后,大鼠出現(xiàn)神經(jīng)元凋亡及損傷現(xiàn)象,表明造模成功。臨床上常采用抗生素及糖皮質(zhì)激素藥物來改善BM神經(jīng)并發(fā)癥和延緩死亡進(jìn)程,但隨著致病菌進(jìn)化、耐藥菌增加等多種因素的產(chǎn)生,BM的診治問題也日益突出[12]。現(xiàn)代藥理發(fā)現(xiàn),中藥黃芪中的活性成分黃芪甲苷具有抗鏈球菌作用[13],且對(duì)神經(jīng)元也有保護(hù)作用[5],預(yù)示黃芪甲苷也可能為治療BM神經(jīng)元感染性損傷的潛在藥物。本研究結(jié)果顯示,黃芪甲苷干預(yù)療BM大鼠后,大鼠死亡減少,腦脊液中TNF-α、NSE及PCT水平明顯降低,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡也顯著緩解,證實(shí)了黃芪甲苷對(duì)BM大鼠神經(jīng)元損傷有改善作用,但其改善作用的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

    RhoA/ROCK2通路在神經(jīng)元分化及神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程中發(fā)揮了重要作用。研究[14-15]發(fā)現(xiàn)RhoA及ROCK2是神經(jīng)元細(xì)胞骨架的重要效應(yīng)分子,其激活可抑制神經(jīng)軸突生長(zhǎng)發(fā)育,引起細(xì)胞骨架重構(gòu)及異常收縮,導(dǎo)致神經(jīng)元損傷、神經(jīng)軸突生長(zhǎng)錐塌陷丟失,而參與神經(jīng)退行性病變過程;體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)RhoA/ROCK2激活可促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,阻斷RhoA/ROCK2通路激活,抑制神經(jīng)元凋亡,促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性修復(fù)[16-17]。本研究發(fā)現(xiàn)BM大鼠RhoA與腦皮質(zhì)神經(jīng)元陽性共表達(dá)數(shù)目增多,且ROCK2在神經(jīng)元中呈強(qiáng)陽性表達(dá),大鼠神經(jīng)元凋亡率也顯著降低,提示BM大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元中RhoA/ROCK2通路激活,可能是BM大鼠神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡的潛在影響因素。

    另外,F(xiàn)-actin是細(xì)胞骨架重排的重要標(biāo)志物,也是RhoA/ROCK2通路的下游效應(yīng)分子。盧葉等[18]發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染后,TNF-α可激活RhoA/ROCK2通路,刺激F-actin在血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中聚集,從而促進(jìn)細(xì)胞增粗、排列紊亂,引起細(xì)胞骨架重排,導(dǎo)致細(xì)胞通透性改變及損傷。本研究也檢測(cè)到F-actin在BM大鼠神經(jīng)元中分布增多,推測(cè)細(xì)菌感染后,RhoA/ROCK2通路激活,引起下游分子F-actin在神經(jīng)元中聚集,導(dǎo)致神經(jīng)元骨架改變、損傷及凋亡。LPA可與神經(jīng)元內(nèi)產(chǎn)生的髓鞘抑制性信號(hào)效應(yīng)分子——Nogo-A相互作用,促進(jìn)RhoA/ROCK2通路激活及細(xì)胞骨架重排[19]。本研究于BM大鼠側(cè)腦室注射RhoA激動(dòng)劑后,大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元LPA及Nogo-A蛋白表達(dá),RhoA/ROCK2通路激活,以及細(xì)胞F-actin分布進(jìn)一步增加的同時(shí),大鼠死亡、神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡也進(jìn)一步加重,提示激活RhoA/ROCK2通路,可加劇BM大鼠神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷和凋亡。XIE S H等[20]發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷可通過抑制RhoA基因表達(dá)來改善腸屏障損傷,預(yù)示黃芪甲苷可能對(duì)RhoA相關(guān)通路表達(dá)有干預(yù)作用。本研究顯示黃芪甲苷改善BM大鼠神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡的同時(shí),大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元LPA及Nogo-A蛋白表達(dá),RhoA/ROCK2通路激活,以及細(xì)胞F-actin分布均受到抑制,而RhoA激動(dòng)劑LPA可逆轉(zhuǎn)黃芪甲苷的上述作用。

    綜上所述,黃芪甲苷可抑制BM大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元中RhoA/ROCK2通路激活,抑制神經(jīng)元骨架重構(gòu),緩解神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷及凋亡。這可能為黃芪甲苷治療BM的機(jī)制提供一定參考。但BM細(xì)菌遷移與神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損傷的網(wǎng)絡(luò)機(jī)制較為復(fù)雜,黃芪甲苷改善BM神經(jīng)系統(tǒng)損傷的其他機(jī)制,還有待后續(xù)深入研究。

    猜你喜歡
    甲苷激動(dòng)劑皮質(zhì)
    基于基因組學(xué)數(shù)據(jù)分析構(gòu)建腎上腺皮質(zhì)癌預(yù)后模型
    皮質(zhì)褶皺
    迎秋
    睿士(2020年11期)2020-11-16 02:12:27
    綠蘿花中抗2型糖尿病PPARs激動(dòng)劑的篩選
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:22
    GPR35受體香豆素類激動(dòng)劑三維定量構(gòu)效關(guān)系研究
    曲美他嗪聯(lián)合黃芪甲苷對(duì)心力衰竭犬心肌細(xì)胞Ca2+水平的影響
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:12:05
    AMPK激動(dòng)劑AICAR通過阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖
    黃芪甲苷對(duì)特發(fā)性肺纖維化模型大鼠肺組織CD34表達(dá)的影響
    HPLC-ELSD法測(cè)定牛黃降壓丸中黃芪甲苷的含量
    HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定玉屏風(fēng)總苷中黃芪皂苷Ⅱ及黃芪甲苷
    中成藥(2014年8期)2014-02-28 22:28:38
    国产精品女同一区二区软件| 国产一区二区激情短视频 | 久久久久久人人人人人| 免费看av在线观看网站| 麻豆乱淫一区二区| 免费看av在线观看网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| videos熟女内射| 国产精品久久久av美女十八| 国产av一区二区精品久久| 欧美+日韩+精品| 看十八女毛片水多多多| 欧美激情高清一区二区三区 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 好男人视频免费观看在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 午夜免费观看性视频| 天堂中文最新版在线下载| 日韩伦理黄色片| 人人澡人人妻人| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲国产精品999| av网站免费在线观看视频| 中国三级夫妇交换| 亚洲四区av| av在线老鸭窝| 永久免费av网站大全| 日韩中文字幕视频在线看片| 不卡av一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久这里有精品视频免费| 边亲边吃奶的免费视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| av不卡在线播放| 亚洲精品一区蜜桃| 国产av码专区亚洲av| 国产国语露脸激情在线看| 黄片播放在线免费| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品免费大片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产成人精品久久二区二区91 | 久久久精品94久久精品| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品久久久久成人av| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久婷婷青草| 久久久欧美国产精品| 国产野战对白在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 涩涩av久久男人的天堂| 国产又爽黄色视频| 黄片小视频在线播放| 亚洲成人av在线免费| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 91国产中文字幕| 久久久久视频综合| 在线观看三级黄色| 国产精品一区二区在线不卡| 最近中文字幕高清免费大全6| 春色校园在线视频观看| 国产精品久久久久成人av| 热re99久久精品国产66热6| 丝袜喷水一区| 深夜精品福利| 亚洲人成77777在线视频| 国产成人精品无人区| 国产精品一国产av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黑人猛操日本美女一级片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 免费黄网站久久成人精品| 午夜福利乱码中文字幕| 国产成人精品无人区| 国产精品三级大全| 美女视频免费永久观看网站| 十八禁网站网址无遮挡| av福利片在线| 2021少妇久久久久久久久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| av免费在线看不卡| 五月天丁香电影| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产高清国产精品国产三级| 18禁动态无遮挡网站| 女人久久www免费人成看片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 男女午夜视频在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 久久ye,这里只有精品| 午夜激情av网站| 午夜福利视频在线观看免费| 伦精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲精品久久午夜乱码| 在现免费观看毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| h视频一区二区三区| 国产成人精品在线电影| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 国产免费视频播放在线视频| 麻豆乱淫一区二区| 美女中出高潮动态图| videosex国产| 国产精品成人在线| √禁漫天堂资源中文www| 丰满少妇做爰视频| 蜜桃国产av成人99| 热99久久久久精品小说推荐| 黄频高清免费视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产一区二区 视频在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 午夜影院在线不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 中国国产av一级| 在现免费观看毛片| 国产乱人偷精品视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产精品女同一区二区软件| 97人妻天天添夜夜摸| av线在线观看网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 在线观看免费高清a一片| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品第一国产精品| 国产野战对白在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 久久久久久久久免费视频了| 99久久人妻综合| 国产成人精品久久久久久| 男女边吃奶边做爰视频| 男人舔女人的私密视频| a级毛片在线看网站| 日本爱情动作片www.在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲在久久综合| 极品人妻少妇av视频| 一区二区三区乱码不卡18| 久热这里只有精品99| 欧美日韩成人在线一区二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 午夜福利视频在线观看免费| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩大片免费观看网站| 妹子高潮喷水视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人漫画全彩无遮挡| 狠狠精品人妻久久久久久综合| av.在线天堂| 国产片内射在线| 999久久久国产精品视频| 男女免费视频国产| 国产成人a∨麻豆精品| 男人添女人高潮全过程视频| 精品国产一区二区久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产成人精品在线电影| 成人漫画全彩无遮挡| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| h视频一区二区三区| 观看av在线不卡| 高清欧美精品videossex| 久久久欧美国产精品| 最新中文字幕久久久久| 在线 av 中文字幕| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 十分钟在线观看高清视频www| 韩国av在线不卡| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产成人一精品久久久| freevideosex欧美| 亚洲精品国产av成人精品| 在线观看免费视频网站a站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 9191精品国产免费久久| 1024香蕉在线观看| 七月丁香在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| av.在线天堂| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 日韩视频在线欧美| 精品国产一区二区久久| 亚洲成人一二三区av| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久人妻精品一区果冻| 丁香六月天网| av在线观看视频网站免费| 丝袜美足系列| 欧美人与善性xxx| 日韩中文字幕视频在线看片| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 十八禁网站网址无遮挡| xxx大片免费视频| 丝袜在线中文字幕| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产成人精品无人区| 亚洲欧洲国产日韩| 精品国产国语对白av| 国产免费视频播放在线视频| 日韩欧美精品免费久久| 黄片播放在线免费| 伦理电影免费视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av片东京热男人的天堂| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久这里只有精品19| 色哟哟·www| 午夜日韩欧美国产| 伊人久久国产一区二区| 亚洲成色77777| 十分钟在线观看高清视频www| 国产在视频线精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 一边亲一边摸免费视频| 久久精品夜色国产| 久久久欧美国产精品| 大香蕉久久成人网| 久久久久久久精品精品| 三上悠亚av全集在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 日韩制服骚丝袜av| 性色avwww在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 高清不卡的av网站| 久久久精品免费免费高清| 99热网站在线观看| 18禁观看日本| 午夜av观看不卡| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产熟女欧美一区二区| 国产免费视频播放在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 精品一区在线观看国产| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲欧洲国产日韩| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日本vs欧美在线观看视频| 青春草国产在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 在线观看免费高清a一片| 欧美激情 高清一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产成人免费无遮挡视频| 免费黄频网站在线观看国产| av网站免费在线观看视频| 国产成人精品婷婷| 高清欧美精品videossex| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲第一青青草原| 日韩在线高清观看一区二区三区| 不卡视频在线观看欧美| 精品人妻偷拍中文字幕| freevideosex欧美| 国产 一区精品| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲四区av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产人伦9x9x在线观看 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日本av手机在线免费观看| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲欧洲日产国产| 婷婷色av中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 制服诱惑二区| av天堂久久9| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 婷婷色av中文字幕| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 精品酒店卫生间| 国产精品一区二区在线不卡| 蜜桃在线观看..| 一级片'在线观看视频| av线在线观看网站| 精品久久久久久电影网| 男人舔女人的私密视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品自拍成人| 水蜜桃什么品种好| 久久免费观看电影| 99久国产av精品国产电影| 最近中文字幕2019免费版| 国产1区2区3区精品| 亚洲第一青青草原| 伦理电影免费视频| 亚洲精品一二三| 国产亚洲欧美精品永久| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 制服诱惑二区| 如何舔出高潮| 日韩伦理黄色片| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久国产精品麻豆| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲综合色网址| 国产av国产精品国产| 热re99久久国产66热| 亚洲国产精品国产精品| 国产成人精品一,二区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av网站免费在线观看视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 午夜福利一区二区在线看| 欧美bdsm另类| 美女国产高潮福利片在线看| 99国产精品免费福利视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产av精品麻豆| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品国产a三级三级三级| 人成视频在线观看免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜激情久久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲视频免费观看视频| 五月伊人婷婷丁香| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 人妻 亚洲 视频| 99香蕉大伊视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一级,二级,三级黄色视频| 日本av手机在线免费观看| 少妇精品久久久久久久| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 最黄视频免费看| 欧美日韩av久久| 在线天堂中文资源库| 国产激情久久老熟女| 男人舔女人的私密视频| 午夜日本视频在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 另类亚洲欧美激情| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品av久久久久免费| 天美传媒精品一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 一级片'在线观看视频| 免费黄网站久久成人精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲综合色网址| 精品一品国产午夜福利视频| 午夜激情久久久久久久| 久热这里只有精品99| 国产亚洲最大av| 久久亚洲国产成人精品v| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久久精品人妻al黑| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲经典国产精华液单| 性色avwww在线观看| av.在线天堂| 国产老妇伦熟女老妇高清| 老鸭窝网址在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 亚洲国产日韩一区二区| 好男人视频免费观看在线| 国产av码专区亚洲av| 亚洲av免费高清在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 99热全是精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲图色成人| 十分钟在线观看高清视频www| 国产成人精品一,二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在线观看免费高清a一片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 男女免费视频国产| 亚洲精品第二区| 青草久久国产| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 日韩免费高清中文字幕av| 免费高清在线观看日韩| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 伊人亚洲综合成人网| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品成人在线| 捣出白浆h1v1| 99久久综合免费| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜激情av网站| 91国产中文字幕| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 永久网站在线| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 成年人午夜在线观看视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久免费观看电影| 18禁动态无遮挡网站| av片东京热男人的天堂| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 我的亚洲天堂| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 不卡av一区二区三区| 国产精品 国内视频| 超碰97精品在线观看| 精品国产一区二区久久| 日韩电影二区| 中国国产av一级| 亚洲精品美女久久av网站| videossex国产| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲三区欧美一区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 高清在线视频一区二区三区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久av网站| 99久久综合免费| 久久99一区二区三区| 三级国产精品片| 免费在线观看黄色视频的| 久久久久久久亚洲中文字幕| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产在线免费精品| 老司机影院成人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 午夜精品国产一区二区电影| 国产成人精品婷婷| 亚洲视频免费观看视频| 国产精品久久久久久av不卡| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产在线一区二区三区精| 亚洲成国产人片在线观看| 国产又爽黄色视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美日韩av久久| 日本色播在线视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产视频首页在线观看| 亚洲成色77777| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美日韩一级在线毛片| 免费少妇av软件| 久久久久久久久免费视频了| 香蕉丝袜av| 少妇熟女欧美另类| 人人妻人人澡人人看| 免费黄频网站在线观看国产| 青春草亚洲视频在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 1024视频免费在线观看| 18禁观看日本| 国产精品三级大全| 伦理电影大哥的女人| 超碰成人久久| 国产精品一国产av| 免费少妇av软件| 我的亚洲天堂| 老司机影院毛片| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲美女视频黄频| 精品一品国产午夜福利视频| 黄色毛片三级朝国网站| 男的添女的下面高潮视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av网站在线播放免费| 国产在线视频一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 制服诱惑二区| 国产色婷婷99| 色视频在线一区二区三区| 天堂中文最新版在线下载| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| a级片在线免费高清观看视频| av卡一久久| 麻豆av在线久日| 乱人伦中国视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品.久久久| 一级毛片我不卡| 亚洲精品,欧美精品| 日本91视频免费播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久国产精品大桥未久av| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品久久久久久电影网| 宅男免费午夜| 午夜91福利影院| 久久99精品国语久久久| 久久精品国产亚洲av天美| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品.久久久| 最近的中文字幕免费完整| 免费在线观看黄色视频的| 久久这里有精品视频免费| 精品少妇内射三级| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产视频首页在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 成人二区视频| 亚洲国产欧美在线一区| 精品酒店卫生间| 久久精品夜色国产| av免费在线看不卡| 国产探花极品一区二区| a 毛片基地| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品不卡视频一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日本爱情动作片www.在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲图色成人| 亚洲国产精品一区三区| 国产成人精品久久久久久| 中文字幕亚洲精品专区| 男女国产视频网站| 日本免费在线观看一区| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 人人妻人人澡人人看| 免费看不卡的av| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久久国产欧美日韩av| 久久久久久久精品精品| 老鸭窝网址在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 色视频在线一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 伦精品一区二区三区| 在线 av 中文字幕| 亚洲国产av新网站| 欧美+日韩+精品| a 毛片基地| 亚洲av.av天堂| 国产成人一区二区在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 尾随美女入室| 亚洲国产色片| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲在久久综合| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产成人91sexporn| 欧美黄色片欧美黄色片| av不卡在线播放| 一区二区av电影网| 中文字幕人妻丝袜一区二区 |