繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)研究進展

秦紫藝　陳雙雙　王華娣　鄧衍明

摘要：繡球?qū)僦参锸菆@林和家庭園藝中重要的觀賞植物，具有較高的生態(tài)和經(jīng)濟價值，開發(fā)應(yīng)用前景廣闊。開展繡球?qū)僦参锓庇夹g(shù)研究對其資源開發(fā)、保護與應(yīng)用具有重要意義。與傳統(tǒng)扦插、壓條、分株等育苗技術(shù)相比，組織培養(yǎng)技術(shù)能夠滿足種苗周年、批量生產(chǎn)的要求，可有力地促進繡球?qū)僦参锏漠a(chǎn)業(yè)化開發(fā)與利用。對國內(nèi)外繡球?qū)僦参锏慕M織培養(yǎng)技術(shù)進行了綜述，包括外植體材料的選擇、外植體的消毒方法、植物生長調(diào)節(jié)劑的影響、培養(yǎng)條件等，旨在通過總結(jié)前人經(jīng)驗和方法，為建立更多繡球?qū)賰?yōu)良植物資源的高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系提供參考。

關(guān)鍵詞：繡球?qū)?組織培養(yǎng);再生;研究進展

中圖分類號： S685.990.4+3文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2021）19-0045-06

繡球?qū)伲℉ydrangea）又名八仙花屬[1]，為虎耳草科落葉灌木或小喬木。中國是繡球?qū)僦参锏馁Y源分布中心和起源中心之一，具有豐富的種質(zhì)資源，共有46種10變種[2]。繡球?qū)僦参镞m應(yīng)性強，具有耐寒、耐陰、抗性強和病蟲害少等優(yōu)點，種植范圍和適應(yīng)區(qū)域較廣[3]。繡球?qū)僦参锘ㄐ投鄻?，花期較長，花色豐富，包含了白色系、紅色系、藍色系等，被廣泛應(yīng)用于園林景觀及盆花、鮮切花等產(chǎn)業(yè)[4]。繡球?qū)僦参镆蜉嗥缓Ｉ椒?、繡球酚等物質(zhì)而可作為抗瘧疾、降血糖、治療心悸煩躁的入藥良材[5]。此外，很多繡球品種的花色可隨土壤酸堿度的變化而變化，當(dāng)土壤為強酸性時，花色呈藍色，而當(dāng)土壤為堿性時，花色為紅色，使其可以作為土壤酸堿度的指示植物[6]?？傊?，繡球?qū)僦参锞哂休^高的觀賞、經(jīng)濟、藥用及生態(tài)價值，產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景十分廣闊。

繡球?qū)僦参锏幕ǘ酁椴辉谢?，較難獲得種子，故關(guān)于繡球有性繁殖的報道較少。目前，繡球?qū)僦参飩鹘y(tǒng)繁殖方式主要是無性繁殖，包括扦插、分株、壓條等[7]。但無性繁殖方式因其繁殖系數(shù)低、速度慢、易受季節(jié)限制無法進行周年繁殖等缺點而不能大規(guī)模生產(chǎn)種苗。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以在保持母本優(yōu)良性狀的前提下實現(xiàn)周年、快速繁殖從而獲得大量種苗，有效彌補傳統(tǒng)無性繁殖方式的不足。此外，組培的環(huán)境條件可控，獲得的組培苗在植物基因工程、分子育種等領(lǐng)域也具有重要作用。因此，本綜述綜合了國內(nèi)外相關(guān)研究文獻，對繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)的現(xiàn)狀進行了歸納和分析，并對下一步研究方向進行了建議，旨在為今后更多繡球?qū)賰?yōu)良植物資源的組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立提供參考。

1無菌苗的獲得

1.1外植體材料的選擇

外植體的選擇是植物組織培養(yǎng)的第一步，也是非常重要的一環(huán)，不同的外植體類型對植物組織培養(yǎng)的影響差異甚大。繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)中常用的外植體材料有莖尖、莖段、葉片等。有學(xué)者用八仙花葉片、莖段和莖尖為外植體，探究組織培養(yǎng)中的污染率和死亡率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用葉片污染率較低，但是難以形成愈傷組織，而利用莖尖污染率和死亡率都較低，分別為21.4%、18.5%[8-9]。王紅梅等比較了側(cè)芽、基部側(cè)芽、頂芽和帶頂芽的側(cè)芽后，發(fā)現(xiàn)基部側(cè)芽的萌發(fā)率最高[10]。同時，以葉柄為外植體的研究發(fā)現(xiàn)，中部葉柄愈傷組織誘導(dǎo)率比上部葉柄高[11]。此外，也有很多學(xué)者以葉片作為外植體，通過愈傷組織誘導(dǎo)建立高效的再生體系[12-14]。研究發(fā)現(xiàn)，由于生理狀態(tài)和年齡的不同，即使同一植株上的同一種器官，其誘導(dǎo)分化情況也不同，通常外植體越幼嫩、分生能力越強[15]。雖然繡球?qū)僦参锝Y(jié)實率低，但也有以種子和花粉為外植體進行組織培養(yǎng)的研究。陳爽等以種子為外植體雖獲得了無菌苗，但僅限于“蠟蓮繡球”“莼蘭繡球”等較易獲得種子的品種[16]。周靜偉以花藥（花粉發(fā)育處于單核靠邊期）為外植體，其愈傷組織誘導(dǎo)率僅有36.7%[17]。由此可見，繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)宜以葉片、莖尖和帶腋芽莖段作為外植體，污染率低、誘導(dǎo)率高。

1.2外植體消毒

外植體消毒常用試劑有75%乙醇、氯化汞（HgCl2）和次氯酸鈉溶液。乙醇因其穿透力強，可以使菌體蛋白變性，還可以排除外植體表面的空氣有利于其他消毒劑的進入，被廣泛用于外植體消毒的第一步[18]。但乙醇消毒時間長易導(dǎo)致外植體死亡、時間短不能徹底消毒，因此要結(jié)合其他消毒劑共同處理外植體。不同的消毒劑處理不同的時間，外植體的污染率及存活率也不同。

對于莖尖、莖段的消毒，馮潤東等[8]和邢合龍等[9]的研究中利用70%乙醇浸泡30～45 s，再用01%HgCl2對繡球花莖段和莖尖消毒 7 min，外植體污染率最低。也有學(xué)者在70%乙醇消毒30 s后用0.1%HgCl2溶液分別滅菌8、10 min，同樣可以達到較好的消毒滅菌效果[19-20]。因此，利用70%乙醇和0.1% HgCl2溶液結(jié)合使用時，HgCl2滅菌時間一般可控制在7～10 min。HgCl2消毒易引起外植體的褐化，如王紅梅等對圓錐繡球“北極熊”的莖段用HgCl2消毒4 min，外植體褐化率較低，但由于外植體表面密被表皮毛，會消毒不徹底導(dǎo)致外植體的污染率比較高，而用HgCl2不間斷消毒 8 min，污染率降低，但是褐化率會增加，故選擇采用（4+4）min的HgCl2二次滅菌法，即用HgCl2分2次進行消毒，首次消毒4 min后，無菌水沖洗并用濾紙吸干外植體表面的水分再進行第2次消毒[10]。對于繡球?qū)僦参锘ㄋ幒头N子，利用HgCl2溶液可以得到較好的消毒效果[16-17]。

由于HgCl2溶液毒性較大，使用不當(dāng)會對繡球外植體造成損傷，因此，也有研究采用多種消毒試劑結(jié)合的方法進行滅菌。如對“Preziosa”的莖段利用0.1% HgCl2滅菌7 min后，再用飽和漂白粉上清液消毒8 min[21]，以及對“紅寶石”的莖段利用01%HgCl2滅菌3 min后，再利用2%次氯酸鈉（NaClO）滅菌6 min[22]，都可以獲得污染率較低的無菌外植體。Raffoni等利用2.5% NaClO溶液和0.2%～0.4% HgCl2溶液對“Snow Queen”的莖段消毒可以達到100%滅菌率，但考慮到HgCl2廢液不環(huán)保，認為選用5% NaClO溶液浸泡15 min進行消毒是最佳方案[23]。Liu等也認為應(yīng)避免使用HgCl2溶液，用活性氯濃度為1%的次氯酸鈉并添加Tween 20潤濕劑浸泡“Hyd1”莖段可以取得較好的消毒效果[24]。Tween 20是一種非離子型表面活性劑，在消毒劑中添加Tween 20可以增強消毒效果[25]。這些研究表明，除HgCl2溶液外，次氯酸鈉溶液是使用最廣泛的消毒劑。總之，對繡球?qū)僦参锿庵搀w的消毒，要結(jié)合不同類型的外植體選擇合適的消毒試劑和消毒時間以達到理想的消毒效果。

2基本培養(yǎng)基的選擇

對于植物組織培養(yǎng)來說，培養(yǎng)基的成分對外植體的生長發(fā)育具有直接的影響。近年來，國內(nèi)大部分研究者都采用MS培養(yǎng)基（Murashige and Skoog medium）作為繡球?qū)僦参锏幕九囵B(yǎng)基[20，21，26]。MS培養(yǎng)基最初被用于煙草的愈傷組織培養(yǎng)，后來逐漸被廣泛用于其他植物的組織培養(yǎng)[27]，但并不是所有植物都適用于MS培養(yǎng)基。王海娥比較了MS、1/2 MS、1/4 MS基本培養(yǎng)基在啟動培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)階段的培養(yǎng)效果，發(fā)現(xiàn)對于朗姆系繡球不同品種最適宜的基本培養(yǎng)基并不一樣：“繡球”以1/2 MS為宜，“柏林”和“蝴蝶戲珠”以1/4 MS為宜，而“藍星”則以MS為宜[26]。陳爽比較了MS培養(yǎng)基和WPM培養(yǎng)基（woody plant medium）對“莼蘭繡球”和“蠟蓮繡球”增殖的影響，發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基更適合這2個品種繡球的增殖，分析認為可能是由于MS培養(yǎng)基中豐富的無機鹽和氮源對促進生長有利[16]。李楊麗研究發(fā)現(xiàn)，MS培養(yǎng)基并不適合其研究的繡球品種“Hyd1”，而B5（Gamborgs B-5 medium）和WPM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可促進增殖芽的伸長;采用B5培養(yǎng)基時，外植體生根率較高[28]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，與MS和WPM相比，B5培養(yǎng)基的銨鹽濃度較低，可促進“Hyd1”葉片外植體的不定芽形成[24，29]。但在蔣夢煙的研究中，1/2 MS、MS、B5這3種基本培養(yǎng)基對繡球品種“藍尼康”的愈傷組織誘導(dǎo)并無明顯差異[30]。比較MS、B5、WPM培養(yǎng)基的成分，可以發(fā)現(xiàn)幾種培養(yǎng)基中的NH+4、NO-3、SO2-4的含量有明顯差異，MS培養(yǎng)基和B5培養(yǎng)基中NH+4、NO-3含量較高，而WPM培養(yǎng)基中SO2-4含量較高[31]。因此，基本培養(yǎng)基的選擇不僅受外植體的基因型影響，不同培養(yǎng)基中大量元素的差異也是需要考慮的重要因素。

3植物生長調(diào)節(jié)劑的影響

除了基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分外，培養(yǎng)基中添加的植物生長調(diào)節(jié)劑種類和配比對于外植體的生長、增殖和分化也都具有不同的影響[32]。

3.1直接再生途徑

直接再生途徑又叫不定芽誘導(dǎo)途徑，是指外植體直接誘導(dǎo)分化產(chǎn)生器官的途徑。截至目前，該途徑已廣泛用于繡球?qū)僦参镆垣@得再生植株（表1）。繡球?qū)僦参锊欢ㄑ空T導(dǎo)途徑多以6-BA（6-芐氨基嘌呤）和NAA（α-萘乙酸）或IBA（3-吲哚丁酸）為外源植物生長調(diào)節(jié)劑。在Liu等的研究中，當(dāng)6-BA/IBA值從1.0/0.05提高到3.5/0.05時，不定芽再生頻率相應(yīng)增加;而在2.25/0、2.25/005、2.25/0.1和2.25/0.2范圍內(nèi)變化時，器官發(fā)生頻率呈拋物線形變化[24]。殷麗青在改良MS培養(yǎng)基[MS+Ca（NO3）2 556 mg/L]中添加不同比例 6-BA 和NAA處理繡球“Preziosa”發(fā)現(xiàn)，過高的 6-BA 會抑制芽的發(fā)生，而過高的NAA會出現(xiàn)芽細弱、基部產(chǎn)生愈傷組織等現(xiàn)象。這些結(jié)果表明，細胞分裂素/生長素的值與不定芽再生頻率密切相關(guān)。但也有學(xué)者認為生長調(diào)節(jié)劑的有無、種類、濃度及配比對器官發(fā)生影響不顯著，但對新稍伸長影響較大[22]。此外，培養(yǎng)基中添加GA3（赤霉素A3）也可以提高芽的誘導(dǎo)率、促進芽的伸長[19]。

3.2間接再生途徑

間接再生途徑又被稱為愈傷組織誘導(dǎo)途徑，是先使外植體脫分化成愈傷組織、愈傷組織再分化成器官并最終形成完整植株的過程。近年來，國內(nèi)外關(guān)于繡球?qū)僦参锿ㄟ^愈傷組織誘導(dǎo)途徑進行組織培養(yǎng)的報道已有不少（表2）。在該途徑中，最主要的影響因素是外源激素的類型和濃度。誘導(dǎo)愈傷常用的外源激素有6-BA、NAA、2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、KT（6-糠基氨基嘌呤）、CPPU[N-（2-氯-4-吡啶基）-N′-苯基脲]等;在細胞分裂素中，6-BA的使用率較高，通常以1.5～2.5 mg/L 為宜[11，14，35]。楊寶明等認為，在相同濃度的6-BA條件下，配合2，4-D和NAA均能誘導(dǎo)出愈傷組織，且2，4-D的誘導(dǎo)效果要比NAA好;但是2，4-D濃度過高則會造成愈傷組織結(jié)構(gòu)松散而不易分化成不定芽[11]。CPPU是一種人工合成的細胞分裂素，其活性高且價格低廉，被廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)中[36]。孫曉波等發(fā)現(xiàn)，大花繡球“無盡夏”葉片在CPPU+IBA（或NAA）激素組合培養(yǎng)基上的愈傷誘導(dǎo)率高達95%[20]。通常情況下，選擇較高濃度的細胞分裂素和較低濃度的生長素，有利于愈傷組織的分化[25]。

3.3增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)又叫繼代培養(yǎng)，是組織培養(yǎng)中實現(xiàn)快速繁殖的重要步驟。細胞分裂素和生長素是增殖培養(yǎng)中常用的生長調(diào)節(jié)劑組合。雷亞靈等認為，適合芽增殖的培養(yǎng)基為MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA，增殖系數(shù)為9. 2[22]。有的研究在增殖培養(yǎng)基中添加赤霉素，如王海娥發(fā)現(xiàn)以1/4 MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L CA3為增殖培養(yǎng)基時，增殖系數(shù)可達14.32[26]。李楊麗等以B5+1.5 mg/L 6-BA+0.6 mg/L CA3為增殖培養(yǎng)基時，增殖系數(shù)最高，但只有3.7[28]。除6-BA外，KT（細胞分裂素）也被用于增殖培養(yǎng)，如用MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.5 mg/L IBA培養(yǎng)“都山繡球”，增殖率可達2.85倍[14]。也有研究發(fā)現(xiàn)，增殖培養(yǎng)基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA）中添加腺嘌呤可促進增殖，提高增殖系數(shù)[19]。雖然增殖培養(yǎng)基以細胞分裂素和生長素組合作為外源激素的研究居多，但也有報道認為增殖培養(yǎng)基中添加任意濃度的6-BA都可以得到較高的不定芽增殖率和鮮質(zhì)量，而且不定芽長度與細胞分裂素濃度無關(guān)[24-25]。根據(jù)以上研究可見，繡球?qū)僦参镌鲋撑囵B(yǎng)使用的植物生長調(diào)節(jié)劑種類較多，但常用的只有6-BA、NAA、IBA等。

3.4生根培養(yǎng)

繡球?qū)僦参锷鄬θ菀?，組織培養(yǎng)中較常用的方法是瓶內(nèi)生根。生根培養(yǎng)一般選擇大量元素減半的培養(yǎng)基，這是因為在生根過程中，植物對大量元素的需求已明顯降低[37]。不同類型不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對繡球生根誘導(dǎo)的效果存在差異。龔偉等在1/2 MS培養(yǎng)基上添加0.1 mg/L的NAA，繡球生根率達82.5%[38]，添加0.2 mg/L或 0.3 mg/L IBA時，生根率也較高[9，35]。也有研究表明，NAA和IBA配合使用比單獨使用效果好，如利用1/2 MS+0.25 mg/L NAA+0.25 mg/L IBA為生根培養(yǎng)基時，圓錐繡球生根率可達95%，且生根快、根數(shù)多[11]。趙盈盈等認為最適宜繡球品種“Adria”的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+蛭石 ∶珍珠巖（1 ∶1），即使不添加激素，生根率也可達100%，且根系發(fā)達、生長健壯[13]。Liu等在含有珍珠巖的1/2 B5培養(yǎng)基上添加0.5 mg/L NAA，繡球“Hyd1”的生根數(shù)達每株7.1條，遠高于在瓊脂中培養(yǎng)的生根數(shù)[24]。分析認為，不僅是因為珍珠巖基質(zhì)相對于瓊脂更透氣，而且瓊脂中的不定芽只在培養(yǎng)基以外的莖段處生細小的根，這些根不接觸培養(yǎng)基，無法吸收營養(yǎng)，導(dǎo)致不定芽生長緩慢[39]。也有文獻報道在生根培養(yǎng)基中添加3 g/L活性炭可以促進生根，生根率達100%[19]?；钚蕴靠蔀榻M培苗提供生根暗環(huán)境，吸附植物生長調(diào)節(jié)劑等有利于生根的物質(zhì)[40]，但活性炭的濃度不宜過高，否則將會抑制生根[41]。除了瓶內(nèi)生根方法外，還有瓶外生根法。龔偉等將組培苗轉(zhuǎn)移到經(jīng)過福爾馬林消毒的基質(zhì)（珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1）中，在濕度大于85%的條件下培養(yǎng)，生根率可達100%[38]。

4煉苗移栽

組培苗葉綠素含量少，光合自養(yǎng)能力弱，根毛細軟，適應(yīng)能力較差，需要經(jīng)過馴化煉苗逐漸改變生長條件以提高其對外界環(huán)境的適應(yīng)能力[42]。影響繡球?qū)僦参锝M培苗移栽成活率的重要因素有組培苗的質(zhì)量、空氣濕度、移栽基質(zhì)等[22]。在移栽之前，需將誘導(dǎo)獲得的生根苗在室溫散射光下培養(yǎng) 3 d，再打開封口膜于溫室大棚預(yù)煉苗3 d，并于移栽時洗去根部培養(yǎng)基[33]。氣溫低時，煉苗時間可適當(dāng)延長;氣溫高時因培養(yǎng)基易污染，需縮短煉苗時間[43]。另外，繡球?qū)僦参锝M培苗通常在高濕、恒溫、弱光條件下培養(yǎng)，若移出培養(yǎng)基后水分不足，將直接導(dǎo)致幼苗失水死亡，所以除了每天向植株葉面噴霧外，初期還應(yīng)用薄膜覆蓋保濕一段時間[22]。

移栽時，應(yīng)選擇根系發(fā)達、莖稈粗壯、葉片深綠和木質(zhì)化程度較高的組培苗[14]。有研究表明，繡球“藍尼康”已生根的健壯苗移栽成活率可達到92%，且根系生長快、根數(shù)量多，而無根苗的移栽成活率僅為14%，很難成活[30]。繡球?qū)僦参锝M培苗移栽的基質(zhì)通常用泥炭土、珍珠巖、蛭石、腐殖土等，移栽所用基質(zhì)應(yīng)先高溫滅菌再使用。Thomas等為了使櫟葉繡球離體生根的植物適應(yīng)溫室條件，將櫟葉繡球組培苗移栽到泥炭土 ∶蛭石 ∶珍珠巖=3 ∶1 ∶1的基質(zhì)中，然后覆蓋塑料薄膜，放回培養(yǎng)室4周后，再轉(zhuǎn)移到溫室中[44]。也有研究表明，將繡球組培苗移栽到珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1的基質(zhì)中，成活率為896%[38];移栽到蛭石 ∶腐殖土=1 ∶2的基質(zhì)中，成活率達92%[14];栽入珍珠巖 ∶腐殖土=1 ∶2的培養(yǎng)缽中，成活率達90%以上[33]。但Preece等認為組培苗的移栽成活率與移栽基質(zhì)比例無關(guān)，只要移栽到泥炭+蛭石+珍珠巖的培養(yǎng)基質(zhì)中，其適應(yīng)能力都很好且生長旺盛[45]。此外，爐灰渣也是一種優(yōu)良的移栽基質(zhì)，有學(xué)者比較用于移栽繡球的爐灰渣和珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1的基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)爐灰渣的移栽成活率達97.5%，且組培苗長勢良好[46]。爐灰渣取材方便，透氣性好，不僅是組培苗移栽的優(yōu)良基質(zhì)，也是其他育苗方式的優(yōu)良基質(zhì)[47]。

5培養(yǎng)條件

除了上述因素外，組織培養(yǎng)所處的溫度、濕度、光照等培養(yǎng)條件也是保證整個培養(yǎng)過程順利進行的重要因素[48]。組培瓶內(nèi)的濕度一般能達飽和狀態(tài)，通常不予考慮[49]。在已有的繡球組織培養(yǎng)研究中，培養(yǎng)溫度基本保持在（25 ± 2） ℃[13，17，50]。光照條件對于繡球?qū)僦参锏牟欢ㄑ空T導(dǎo)、愈傷組織的誘導(dǎo)和分化都有著顯著的影響。Liu等將“Hyd1”外植體經(jīng)暗培養(yǎng)之后，再置于光—暗周期14 h—10 h下孵育，冷白光照射，光照度為3 300 lx，芽誘導(dǎo)率高達100%[24]。周靜偉等將“玫紅媽媽”的花藥接種到培養(yǎng)基后，先在弱光條件下培養(yǎng)30 d，待誘導(dǎo)出愈傷組織后轉(zhuǎn)入光照1 800～2 500 lx下培養(yǎng)，每天光照培養(yǎng)12 h，愈傷誘導(dǎo)率為37.6%[17]。還有學(xué)者將“Hyd1”葉片置于紅光和藍光下，發(fā)現(xiàn)不定芽被提前誘導(dǎo)產(chǎn)生，且不定芽較白光下生長更健壯[51]。由此可見，繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)中光照度、光—暗周期及光質(zhì)等都發(fā)揮著重要作用。因此，在繡球組織培養(yǎng)過程中，應(yīng)研究并優(yōu)化培養(yǎng)所需的溫度、光照等培養(yǎng)條件。

6展望

繡球?qū)僦参锏慕M織培養(yǎng)技術(shù)對于優(yōu)質(zhì)種苗生產(chǎn)、新品種選育、遺傳轉(zhuǎn)化和種質(zhì)資源保護利用等都具有重要意義。目前，國內(nèi)外研究人員圍繞大花繡球“無盡夏”、圓錐繡球“北極熊”等開展了大量的組織培養(yǎng)相關(guān)研究，取得了較大的進展。但是，在此過程中還有一些問題需要進一步深入研究：（1）部分基因型建立無菌體系困難，污染率高;（2）增殖培養(yǎng)過程中玻璃化和褐化嚴重，影響增殖芽生長和分化，甚至導(dǎo)致死亡;（3）外植體類型較單一，以莖段為主，其他器官高效再生體系尚不成熟;（4）不定芽分化率仍較低等。此外，目前的繡球組織培養(yǎng)研究主要集中在無菌體系、再生體系的建立，而關(guān)于繡球?qū)僦参镞z傳轉(zhuǎn)化體系、原生質(zhì)體培養(yǎng)與再生等方面的研究報道較少。因此，未來針對繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)方面的研究應(yīng)重點聚焦于高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，為培育優(yōu)良新品種、開展基礎(chǔ)研究等奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。

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基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：31901359）;蘇州市科技計劃項目（編號：SNG201923）。

作者簡介：秦紫藝（1998―），女，內(nèi)蒙古鄂爾多斯人，碩士研究生，主要從事觀賞園藝學(xué)研究。E-mail：qinziyi0213@163.com。

通信作者：鄧衍明，博士，研究員，主要從事觀賞園藝學(xué)研究。E-mail：nksdym@163.com。