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    亞精胺促進(jìn)發(fā)芽大豆γ-氨基丁酸富集的工藝研究

    2021-11-16 13:42:04何旭東徐佳寧方維明尹永祺
    現(xiàn)代食品 2021年20期
    關(guān)鍵詞:脫羧酶精胺氨基丁酸

    ◎ 何旭東,徐佳寧,方維明,尹永祺

    (1.揚(yáng)州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所,江蘇 揚(yáng)州 225000;2.揚(yáng)州大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,江蘇 揚(yáng)州 225127)

    大豆在鹽、低氧、高溫和低溫等非生物脅迫下發(fā)芽是富集γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)的有效方式[1]。但是大豆是一種敏感型作物,在脅迫下增加γ-氨基丁酸的同時(shí)其生長(zhǎng)發(fā)育和生物產(chǎn)量也受到嚴(yán)重影響[2]。研究發(fā)現(xiàn)亞精胺(Spermidine,Spd)可直接參與抗逆境脅迫反應(yīng)等植物體內(nèi)多種生理活動(dòng)。杜紅陽(yáng)等[3]證實(shí)亞精胺通過提高大豆幼苗抗氧化酶活力,降低細(xì)胞內(nèi)部丙二醛和過氧化氫含量等,進(jìn)而緩解鹽脅迫帶來的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。同時(shí),亞精胺本身即為植物γ-氨基丁酸合成途徑中多胺降解途徑的前體物質(zhì)之一[4]。因此,本論文研究不同濃度亞精胺對(duì)鹽脅迫下發(fā)芽大豆的生長(zhǎng)、γ-氨基丁酸含量及其關(guān)鍵合成酶活性的影響,篩選出最適外源亞精胺濃度從而獲得鹽脅迫下發(fā)芽大豆富集γ-氨基丁酸的工藝。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    云鶴大豆籽粒,產(chǎn)地吉林省,編號(hào)YH-NJ,于-18 ℃保存?zhèn)溆?。亞精胺和?氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,其他試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Agilent 1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);BX-802發(fā)芽機(jī)(永康市貝欣五金電器廠);PGX-150型智能光照培養(yǎng)箱(寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 大豆發(fā)芽處理

    稱量籽粒飽滿、無蟲蛀、無異色的大豆,經(jīng)去離子水洗滌后浸泡于1%(v/v)次氯酸鈉水溶液中消毒15 min,消毒后用去離子水沖洗至pH中性,再置于30 ℃、大豆體積2.5倍的去離子水中避光浸泡4 h,將浸泡好的大豆置于發(fā)芽機(jī)中,于30 ℃的培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。不同發(fā)芽機(jī)中培養(yǎng)液分別設(shè)以下處理:①對(duì)照(去離子水)。②鹽脅迫處理(50 mmol·L-1NaCl)。③鹽脅迫聯(lián)合亞精胺 處 理(分 別 為50 mmol·L-1NaCl+0.05 mmol·L-1、0.10 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1亞精胺)。發(fā)芽周期為4 d,培養(yǎng)液每隔24 h更換一次,發(fā)芽結(jié)束后進(jìn)行取樣測(cè)定指標(biāo)。

    1.3.2 GABA含量的測(cè)定

    參照尹永祺等[5]采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。

    1.3.3 丙二醛含量的測(cè)定

    丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量采用硫代巴比妥酸法[6]測(cè)定。

    1.3.4 谷氨酸脫羧酶和氨基醛脫氫酶活性的測(cè)定

    谷氨酸脫羧酶(Glutamic Acid Decarboxygenase,GAD)和氨基醛脫氫酶(Amino-Aldehyde Dehydrogenase,AMADH)是γ-氨基丁酸合成途徑中的兩個(gè)關(guān)鍵酶,谷氨酸脫羧酶和氨基醛脫氫酶活性參照周新勇等[7]方法測(cè)定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度亞精胺處理下發(fā)芽大豆形態(tài)、芽長(zhǎng)和丙二醛含量變化

    圖1 所示,相較單獨(dú)鹽處理組相比,施加亞精胺后大豆生長(zhǎng)抑制得到緩解。不同濃度亞精胺緩解效果具有差異,亞精胺濃度為0.10 mmol·L-1時(shí)緩解效果優(yōu)于0.05 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1。大豆發(fā)芽4 d后,鹽脅迫下的大豆芽長(zhǎng)僅是對(duì)照的37.3%,經(jīng)0.10 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1亞精胺處理后其芽長(zhǎng)分別是單獨(dú)鹽脅迫處理的1.38倍和1.26倍(圖2)。此外,如圖3所示,鹽脅迫及其聯(lián)合0.05 mmol·L-1、0.10 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1亞精胺處理的發(fā)芽大豆中丙二醛含量分別是對(duì)照的116%、90%、77%和68%。與鹽處理相比,外源亞精胺處理可顯著降低丙二醛含量(p<0.05)。

    圖2 NaCl脅迫下外源Spd處理對(duì)發(fā)芽大豆芽長(zhǎng)的影響圖

    圖3 NaCl脅迫下外源Spd處理對(duì)發(fā)芽大豆丙二醛含量的影響圖

    2.2 不同濃度亞精胺處理下發(fā)芽大豆GABA合成關(guān)鍵酶活性變化

    谷氨酸脫羧酶(GAD)和氨基醛脫氫酶(AMADH)分別是植物GABA合成兩條途徑(GABA支路和多胺降解途徑)中的關(guān)鍵酶。圖4顯示,大豆經(jīng)鹽脅迫及其 聯(lián) 合0.05 mmol·L-1、0.10 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1亞精胺處理后其GAD活性分別是對(duì)照的324%、363%、609%和446%。經(jīng)0.10 mmol·L-1亞精胺處理的發(fā)芽大豆中GAD活性顯著提高,是對(duì)照處理的1.68倍。

    圖4 NaCl脅迫下外源Spd處理對(duì)發(fā)芽大豆GAD活性的影響圖

    由圖5可看出,相較對(duì)照處理,NaCl及其聯(lián)合Spd處理下大豆中AMADH活性均顯著增加(p<0.05)。NaCl脅 迫 下 分 別 經(jīng)0.05 mmol·L-1、0.10 mmol·L-1和0.15 mmol·L-1Spd處理的大豆中AMADH活力分別是單獨(dú)NaCl處理的107%、124%和137%。

    圖5 NaCl脅迫下外源Spd處理對(duì)發(fā)芽大豆AMADH活性的影響圖

    2.3 不同濃度亞精胺處理下發(fā)芽大豆GABA含量變化

    由圖6可知,大豆發(fā)芽4 d后較對(duì)照相比,鹽脅迫及其聯(lián)合亞精胺處理的大豆中GABA含量均顯著增增加(p<0.05),分別是對(duì)照的165%、172%、226%和201%。0.10 mmol·L-1亞精胺處理的大豆中GABA含量最高,含量達(dá)1.171 mg·g-1DW。

    圖6 NaCl脅迫下外源Spd處理對(duì)發(fā)芽大豆GABA含量的影響圖

    3 結(jié)論

    鹽脅迫聯(lián)合0.10 mmol·L-1亞精胺處理的大豆發(fā)芽4 d是富集γ-氨基丁酸的最佳工藝條件,γ-氨基丁酸含量達(dá)1.171 mg·g-1DW。

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