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    二仙湯治療絕經(jīng)綜合征的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

    2021-11-16 07:40:36孫薇麗郝健亨郭彩霞毛宇楠劉宏奇
    關(guān)鍵詞:二仙靶標(biāo)絕經(jīng)期

    孫薇麗 ,郝健亨 ,郭彩霞 ,毛宇楠 ,劉宏奇

    (1.山西中醫(yī)藥大學(xué),山西晉中030619; 2.山西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,山西太原030024)

    女性在絕經(jīng)前后期,女性荷爾蒙隨著卵巢功能逐漸退化而減少,會(huì)出現(xiàn)一些生理和心理方面的癥狀,主要表現(xiàn)為潮熱、疲倦、四肢酸痛、焦慮、失眠、情緒低落等,臨床稱為絕經(jīng)綜合征[1]。平均年齡為51 歲,它標(biāo)志著女性生殖狀態(tài)的重要轉(zhuǎn)變。中醫(yī)學(xué)將其歸于“經(jīng)斷前后諸證”范疇,常見(jiàn)于中醫(yī)“臟躁”和“百合病”等相關(guān)病癥。中醫(yī)認(rèn)為腎虛是其主要病機(jī),腎氣不足導(dǎo)致機(jī)體陰陽(yáng)平衡失調(diào),臟腑功能出現(xiàn)紊亂。激素替代療法是目前治療絕經(jīng)綜合征的最常見(jiàn)的方法,但藥物不良反應(yīng)也一直是不能避免的問(wèn)題[2-3]。近年來(lái)中醫(yī)學(xué)在絕經(jīng)綜合征治療方面逐漸顯出優(yōu)勢(shì),中醫(yī)多以補(bǔ)腎治療圍絕經(jīng)期綜合征,尤其是以補(bǔ)腎陰的配方和治療方案為主導(dǎo)[4]。二仙湯作為中醫(yī)有名的方劑,全方由知母、仙茅、淫羊藿、黃柏、巴戟天、當(dāng)歸6味中藥組成,仙茅和淫羊藿溫補(bǔ)腎陽(yáng),巴戟天補(bǔ)益精血,知母和黃柏滋陰清肝,當(dāng)歸溫潤(rùn)調(diào)血補(bǔ)氣,諸藥配伍補(bǔ)虛同時(shí)去除苦寒之弊,可有效平衡人體陰陽(yáng),調(diào)和內(nèi)外,體現(xiàn)了陽(yáng)中求陰、陰中求陽(yáng)的精神,對(duì)治療絕經(jīng)綜合征有很好的療效[5]。在此,我們使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法來(lái)研究二仙湯對(duì)絕經(jīng)綜合征的治療作用,并發(fā)現(xiàn)活性成分、靶點(diǎn)以及信號(hào)通路間的相互作用與關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 二仙湯活性成分的篩選和靶點(diǎn)的收集

    通過(guò)TCMSP 中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫(kù)(http://tcmspw.com/tcmsp.php)進(jìn)行檢索,收集二仙湯中所包含的6 味中草藥的活性成分,設(shè)定口服生物利用度(Oral bioavailability,OB)和類藥性(Druglikeness,DL)的相關(guān)參數(shù)(OB≥30%,DL≥0.18)進(jìn)行篩選,最終確定其主要有效活性成分。同時(shí)利用TCMSP 平臺(tái)查找收集其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn),并將這些靶點(diǎn)信息通過(guò) Uniprot 網(wǎng)站(http://www.uniprot.org/)得到目標(biāo)基因名稱,更簡(jiǎn)潔地表達(dá)成分與靶標(biāo)之間的關(guān)系。

    1.2 二仙湯活性成分和靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    將收集的二仙湯活性成分和靶點(diǎn)等信息進(jìn)行整理,并把以上信息導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2 軟件(http://cytoscape.org /),分析各藥物靶點(diǎn)的相關(guān)參數(shù),構(gòu)建二仙湯活性成分和靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖,進(jìn)行可視化分析。

    1.3 絕經(jīng)綜合征的基因檢索

    利用 OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.omim.org/)、GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù) (https://www.genecards.org/)和DisGeNET 數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.disgenet.org/),選取“perimenopausal syndrome”或“climacteric syndrome”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,將3 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中符合疾病的基因匯總,去除其中的重復(fù)靶點(diǎn),最終篩選得到絕經(jīng)綜合征的相關(guān)靶點(diǎn)。

    1.4 絕經(jīng)綜合征和二仙湯共同靶點(diǎn)基因的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    將得到的絕經(jīng)綜合征和二仙湯交集基因靶點(diǎn)輸入到 String 線上數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/),選擇物種為“homo sapiens”,最高置信度設(shè)置為0.9,隱藏PPI 網(wǎng)絡(luò)中游離的靶標(biāo)基因,導(dǎo)出PPI網(wǎng)絡(luò)信息文件,再運(yùn)用Cytoscape 3.7.2 軟件將文件轉(zhuǎn)化為PPI 網(wǎng)絡(luò)圖。

    1.5 KEGG 通路和GO 富集分析

    將最終選出的二仙湯治療絕經(jīng)綜合征的共有基因靶點(diǎn),結(jié)合R 語(yǔ)言,進(jìn)行GO 的生物過(guò)程(biological process,BP)、 分 子 功 能(molecular function,MF)、細(xì)胞組分(cell component,CC)富集和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。將校正P 值≤0.05 的項(xiàng)目進(jìn)行篩選,根據(jù)富集基因的校正P 值來(lái)排序,選取排名在前的相關(guān)信號(hào)通路,使用R 3.6.3 軟件,安裝利用相關(guān)R 包,繪制柱狀圖和氣泡圖。

    1.6 二仙湯-成分-絕經(jīng)綜合征-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

    為了更好地理解復(fù)方中藥、成分與其相應(yīng)靶點(diǎn)和通路之間的復(fù)雜相互作用關(guān)系,本文以二仙湯對(duì)應(yīng)的中藥成分、成分靶點(diǎn)和富集的通路為依據(jù),利用Cytoscape 3.7.2 軟件,構(gòu)建中藥-成分-疾病-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。

    2 結(jié) 果

    2.1 二仙湯活性成分篩選和靶點(diǎn)信息收集

    基于TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù),最終共篩選出二仙湯中藥活性成分104 個(gè),其中當(dāng)歸2 個(gè),仙茅7 個(gè),知母 15 個(gè),淫羊藿 23 個(gè),巴戟天 30 個(gè),黃柏 27 個(gè),去除重復(fù)成分還有92 個(gè)。通過(guò)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)和Uniprot 信息匹配,最終預(yù)測(cè)二仙湯有效作用靶點(diǎn)為 224 個(gè)。

    2.2 二仙湯活性成分和靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

    應(yīng)用Cytoscape 軟件構(gòu)建二仙湯活性成分和靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)可視圖(圖1),分析二仙湯中重要的成分和靶點(diǎn)信息。該網(wǎng)絡(luò)圖由304 個(gè)節(jié)點(diǎn)和1390 條邊組成,紅色菱形節(jié)點(diǎn)代表靶標(biāo)基因,玫紅色圓形節(jié)點(diǎn)代表巴戟天活性成分(左上角),淡藍(lán)色圓形節(jié)點(diǎn)代表黃柏活性成分(左下角),淡紅色圓形節(jié)點(diǎn)代表仙茅活性成分(正上方),淡紫色圓形節(jié)點(diǎn)代表知母活性成分(右上角),深綠色圓形節(jié)點(diǎn)代表淫羊藿活性成分(右下角),當(dāng)歸活性成分只有兩種且與多種藥物成分重合,所以無(wú)單獨(dú)顏色顯示。圖中八邊形代表藥物交集靶標(biāo)基因,A1 為知母和淫羊藿交集靶標(biāo)基因,B1 為知母、當(dāng)歸、仙茅、黃柏交集靶標(biāo)基因,C1 為當(dāng)歸、巴戟天、仙茅、黃柏交集靶標(biāo)基因,D1 為淫羊藿和黃柏交集靶標(biāo)基因。圖形大小代表degree 值的大小,degree 值越大圖形越大,表示其在網(wǎng)絡(luò)中的作用越重要。

    圖1 二仙湯“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

    2.3 絕經(jīng)綜合征和二仙湯共同靶點(diǎn)基因的收集

    將 OMIM、GeneCards 和 DisGeNET 3 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到的疾病相關(guān)基因匯總并去重后,共收集到絕經(jīng)綜合征基因4035 個(gè)。利用在線Venn 圖設(shè)計(jì)網(wǎng)站(http://bioinfogp.cnb.Csic.es/tools/venny/)對(duì)二仙湯靶點(diǎn)基因和絕經(jīng)綜合征疾病靶點(diǎn)分析制圖,最終得到61 個(gè)交集基因靶點(diǎn),見(jiàn)圖2。將61個(gè)交集基因靶點(diǎn)輸入String 數(shù)據(jù)庫(kù),將生成的含有節(jié)點(diǎn)信息的TSV 文件通過(guò)Cytoscape 軟件構(gòu)建靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)(圖3),包括節(jié)點(diǎn)60 個(gè),邊線619條(在String 數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)置隱藏?zé)o關(guān)聯(lián)的節(jié)點(diǎn),有1 個(gè)交集靶標(biāo)基因未參與網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建)。節(jié)點(diǎn)的大小代表自由度(degree),節(jié)點(diǎn)越大顏色由淺黃到深紅程度越深,代表其在網(wǎng)絡(luò)中的作用越重要,線條的粗細(xì)代表綜合得分(Combined scoer),線條越粗顏色越深表示靶點(diǎn)間的相互作用越緊密。

    圖2 二仙湯基因靶點(diǎn)和絕經(jīng)綜合征基因靶點(diǎn)Venn 圖

    圖3 絕經(jīng)綜合征和二仙湯共同靶點(diǎn)基因的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

    2.4 GO 富集分析結(jié)果

    將絕經(jīng)綜合征和二仙湯共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO 富集分析,引用String 數(shù)據(jù)庫(kù),將校正P 值≤0.05 的項(xiàng)目進(jìn)行篩選,共富集到1631 條生物過(guò)程,62 項(xiàng)分子功能相關(guān),26 項(xiàng)細(xì)胞組成相關(guān)。使用R 3.6.3軟件,安裝并引用 clusterProfiler,enrichplot,ggplot2包,繪制得出條形圖和氣泡圖(見(jiàn)圖4、圖5)。圖中氣泡越大表示富集到的基因數(shù)目越多,顏色越紅表示其顯著性越明顯。GO 分析結(jié)果表明,二仙湯-絕經(jīng)綜合征基因參與的生物學(xué)過(guò)程變化主要包括多細(xì)胞生物過(guò)程(multi-multicellular organism process)、活性氧代謝過(guò)程(reactive oxygen species metabolic process)、DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)節(jié)(regulation of DNA-binding transcription factor activity) 和上皮細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)(regulation of epithelial cell proliferation)等;這些靶點(diǎn)與細(xì)胞組分的細(xì)胞質(zhì)囊泡腔(cytoplasmic vesicle lumen)、囊泡腔(vesicle lumen)、線粒體外膜(mitochondrial outer membrane)和膜筏(membrane raft)等關(guān)系密切;同時(shí)這些靶點(diǎn)主要富集在分子功能的細(xì)胞因子活性(cytokine activity)、核受體活性(nuclear receptor activity)、細(xì)胞因子受體結(jié)合(cytokine receptor binding)和生長(zhǎng)因子結(jié)合(growth factor binding)等。

    圖4 GO 富集分析條形圖

    圖5 GO 富集分析氣泡圖

    2.5 KEGG 信號(hào)通路分析結(jié)果

    將絕經(jīng)綜合征和二仙湯共同靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析,引用String 數(shù)據(jù)庫(kù),將校正P 值≤0.05 的項(xiàng)目進(jìn)行篩選,總共富集到138 條信號(hào)通路。使用R 3.6.3,安裝并引用clusterProfiler 包后,繪制得出條形圖和氣泡圖(見(jiàn)圖6、圖7)。圖中氣泡越大表示富集到的基因數(shù)目越多,顏色越紅表示其顯著性越明顯。KEGG 通路分析結(jié)果表明這些靶點(diǎn)主要涉及的信號(hào)通路有磷脂酰肌醇三激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)信號(hào)通路、白細(xì)胞介素 17(IL-17)信號(hào)通路、腫瘤壞死因子(TNF)信號(hào)通路、叉頭轉(zhuǎn)錄因子O(FOXO)信號(hào)通路和缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1)信號(hào)通路等,同時(shí)與恰加斯?。–hagas disease)、瘧疾(Malaria)、甲型流感(Influenza A)等疾病基因信號(hào)通路密切相關(guān)。

    圖6 KEGG 信號(hào)通路分析條形圖

    圖7 KEGG 信號(hào)通路分析氣泡圖

    2.6 二仙湯-成分-絕經(jīng)綜合征-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建及分析

    從二仙湯各味中藥中篩選出活性成分,借助多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出的這些成分作用于絕經(jīng)綜合征的相關(guān)靶點(diǎn),找出KEGG 分析相關(guān)靶點(diǎn)富集所得通路,三者聯(lián)合,利用Cytoscape 軟件構(gòu)建二仙湯-成分-絕經(jīng)綜合征-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖(見(jiàn)圖8)。網(wǎng)絡(luò)圖中黃色部分為中藥成分靶點(diǎn),藍(lán)色菱形為中藥成分,墨綠箭頭為通路。二仙湯中的多種活性成分作用于絕經(jīng)綜合征多個(gè)靶點(diǎn),同時(shí)影響調(diào)控了多條信號(hào)通路,從而形成了一個(gè)多靶點(diǎn)、多通路、多環(huán)節(jié)的網(wǎng)絡(luò)聯(lián)系。

    圖8 二仙湯-成分-絕經(jīng)綜合征-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

    3 討 論

    圍絕經(jīng)期是女性發(fā)生的自然生理事件,被世界衛(wèi)生組織定義為月經(jīng)永久停止,并且由于卵巢卵泡減少導(dǎo)致卵巢類固醇激素(雌激素和孕酮)水平降低,產(chǎn)生了復(fù)雜的荷爾蒙變化[6],通常發(fā)生在50 歲左右。圍絕經(jīng)期女性可能出現(xiàn)潮熱和盜汗、失眠、抑郁和骨質(zhì)疏松等一系列癥狀,嚴(yán)重影響了這一時(shí)期婦女的生活質(zhì)量和身心健康。西醫(yī)治療目前仍以激素為主,有許多副作用不可避免。中醫(yī)認(rèn)為在絕經(jīng)前后體內(nèi)腎氣逐漸下降,腎氣不足,陰陽(yáng)失衡,最終導(dǎo)致肝腎等臟腑功能失調(diào)。臨床上多見(jiàn)腎陰虛,故治療方法以滋腎補(bǔ)陰、平衡腎陰陽(yáng)為主[4,7]。中醫(yī)根據(jù)患者個(gè)體差異,通過(guò)辨證論治,在圍絕經(jīng)期綜合癥的臨床治療中發(fā)揮了重要作用。二仙湯由6 味中藥組成,方中君藥為仙茅和淫羊藿,兩藥溫而不燥,可溫補(bǔ)腎陽(yáng);巴戟天為臣藥,有補(bǔ)腎陽(yáng)益精血之功效;知母、黃柏相佐,以滋腎陰清肝火;當(dāng)歸溫潤(rùn)為使,以補(bǔ)氣調(diào)血。全方中藥互補(bǔ)協(xié)同,溫腎滋陰,瀉火除寒,補(bǔ)虛同時(shí)除苦寒之弊,最終使機(jī)體達(dá)到陰陽(yáng)調(diào)和,內(nèi)外平衡,有效改善了絕經(jīng)綜合征癥狀[2,8]。

    在藥理學(xué)方面,淫羊藿含有豐富的黃酮類化合物,其中淫羊藿苷具有雌激素特性并可刺激雌激素驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞,有效預(yù)防絕經(jīng)綜合征導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥[9-10]。仙茅的根莖醇提物也具有類似特性,可以抗骨質(zhì)疏松和抗氧化活性[11]。知母含有甾體皂苷,具有雌激素活性,還能夠增加骨形成[12-13]。黃柏含有小檗堿等生物堿,與巴戟天中含有的蒽醌類化合物類似,它們都可以通過(guò)減弱破骨細(xì)胞的分化來(lái)減少骨吸收[12-15]。當(dāng)歸根部提取物表現(xiàn)出對(duì)子宮組織結(jié)構(gòu)的刺激,陰道上皮明顯角質(zhì)化,血清黃體生成激素濃度降低[16]。二仙湯多種成分共同作用通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng),增加卵巢激素分泌水平,延緩垂體老化,促進(jìn)子宮收縮,提高骨密度等多方面調(diào)節(jié)機(jī)體多個(gè)組織器官,達(dá)到治療絕經(jīng)綜合征的目的。

    二仙湯中6 味中藥的活性成分經(jīng)過(guò)篩選以及交集靶標(biāo)基因去重后,最終得到二仙湯有效作用靶點(diǎn) 224 個(gè),包括 B 淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)、B 細(xì)胞淋巴瘤蛋白 2 相關(guān) X(BAX)、AKT1、TNF 、絲裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)和IL-6 等多個(gè)主要靶標(biāo),它們不同程度地影響了疾病的發(fā)生發(fā)展。研究表明,促炎細(xì)胞因子廣泛參與了大多數(shù)與圍絕經(jīng)期相關(guān)的疾病。絕經(jīng)后婦女血清促炎因子水平升高,尤其是IL-6 和TNF-α,同時(shí)部分抗炎細(xì)胞因子如IL-4、IL-10 的水平也不同程度增加,這些細(xì)胞因子通過(guò)這種代償機(jī)制對(duì)抗促炎性TNF-α產(chǎn)生的影響。圍絕經(jīng)期促炎細(xì)胞因子水平升高和血清抗炎細(xì)胞因子水平變化可能與雌激素缺乏導(dǎo)致的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能受損有關(guān)[17]。這些細(xì)胞因子對(duì)圍絕經(jīng)期的重要表現(xiàn)如骨質(zhì)疏松癥、潮熱或抑郁綜合征的發(fā)生和發(fā)展有重要影響。Bcl-2 參與凋亡內(nèi)在途徑的起始階段,在抑制細(xì)胞凋亡中具有重要作用,Bax 則是Bcl-2 蛋白家族的促凋亡蛋白,二者共同參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。絕經(jīng)綜合征模型大鼠卵巢中Bcl-2 表達(dá)水平顯著下降,Bax 表達(dá)水平明顯升高,Kang Qiang 等[18-19]用二仙湯干預(yù)后發(fā)現(xiàn)大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡情況均有改善,并分析其作用機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)卵巢中Bcl-2 和Bax 的表達(dá)有關(guān)。PI3K 是一系列參與細(xì)胞功能的激酶,如細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化等。有研究發(fā)現(xiàn),PI3K-AKT 信號(hào)可以協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)卵泡的生長(zhǎng)、發(fā)育和成熟,用淫羊藿苷治療可以提高卵巢中AKT、PI3K 和Bcl-2 的表達(dá)水平,提高免疫功能,同時(shí)改善雌激素水平,促進(jìn)絕經(jīng)綜合征的治療[20]。MAPK3 屬于絲裂原活化蛋白激酶家族,也稱細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)。有學(xué)者分析過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)ERK 信號(hào)通路介導(dǎo)的,雌激素可通過(guò)激活ERK 信號(hào)通路來(lái)抑制骨細(xì)胞凋亡[21],提示 MAPK3 可能通過(guò) ERK/MAPK信號(hào)通路參與圍絕經(jīng)期骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制。

    GO 富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),二仙湯-絕經(jīng)綜合征基因主要涉及活性氧代謝過(guò)程、營(yíng)養(yǎng)代謝過(guò)程和上皮細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)等環(huán)節(jié),它們通過(guò)多種途徑參與調(diào)節(jié)絕經(jīng)綜合征患者的體內(nèi)外生殖狀態(tài)的平衡。圍絕經(jīng)期發(fā)生骨質(zhì)疏松癥被認(rèn)為與卵巢激素缺乏有關(guān),是與年齡有關(guān)的骨質(zhì)流失的最常見(jiàn)原因。婦女在圍絕經(jīng)期雌激素水平降低,活性氧水平升高,氧自由基過(guò)量導(dǎo)致骨細(xì)胞凋亡增加,骨量減少,促進(jìn)了骨質(zhì)疏松生成[22]。因此部分抗骨質(zhì)疏松藥物可以通過(guò)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)與雌激素水平來(lái)實(shí)現(xiàn)其療效。有學(xué)者基于代謝組學(xué)方法研究發(fā)現(xiàn),去卵巢大鼠的脂質(zhì)代謝、能量代謝和氨基酸代謝均發(fā)生了變化。去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠血清中的超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH)含量明顯降低,血清丙二醛(MDA)含量增加。二仙湯可以通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)、能量和氨基酸代謝紊亂的途徑來(lái)逆轉(zhuǎn)骨質(zhì)疏松癥的病理過(guò)程,提高SOD和糖化血清白蛋白(GSP)的活性,并降低大鼠血清中MDA 的含量。GO 富集分析結(jié)果為研究治療圍絕經(jīng)期骨質(zhì)疏松癥提供了新的思路[23]。

    KEGG 通路富集結(jié)果顯示TNF 信號(hào)通路、PI3K-AKT 信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路、FoxO 信號(hào)通路和HIF-1 信號(hào)通路富集了多數(shù)關(guān)鍵基因,可能與二仙湯治療絕經(jīng)綜合征有重要聯(lián)系。絕經(jīng)綜合征的根本原因在于卵巢功能下降,而卵巢細(xì)胞的增殖和凋亡是影響卵巢功能的重要因素。PI3K-AKT 信號(hào)通路對(duì)于多種生物學(xué)過(guò)程至關(guān)重要,它參與卵巢顆粒細(xì)胞的增殖、分化和遷移。一方面,該途徑可以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分裂,另一方面,它可以控制細(xì)胞凋亡。有研究表明,通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K-AKT 途徑,淫羊藿苷可以改善圍絕經(jīng)期大鼠的抑郁癥狀,增加p-AKT 的相對(duì)表達(dá),并促進(jìn)抗凋亡因子Bcl-2 的表達(dá),從而平衡圍絕經(jīng)期抑郁癥大鼠的性激素紊亂,調(diào)節(jié)大腦中神經(jīng)遞質(zhì)的分泌,增強(qiáng)免疫功能,并改善絕經(jīng)綜合征[20,24]。同時(shí)PI3K- AKT 細(xì)胞信號(hào)通路還通過(guò)促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化和骨形成而參與骨質(zhì)疏松的抑制。FoxO1 受PI3K-AKT 途徑調(diào)控,參與細(xì)胞增殖、凋亡、自噬、代謝、炎癥反應(yīng)等病理和生理過(guò)程。由于這些廣泛的功能,F(xiàn)oxO1 在骨骼肌和心肌、脂肪組織和胰腺β 細(xì)胞等絕經(jīng)綜合征相關(guān)的各種組織中存在大量基因靶標(biāo)。Sun Zhihua 等[25-26]研究表明,胰高血糖素樣肽1 受體激動(dòng)劑(GLP-IRA)對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞增殖和抗凋亡的促進(jìn)作用部分是通過(guò)FoxO1 磷酸化位點(diǎn)來(lái)介導(dǎo)的。圍絕經(jīng)期婦女的冠狀動(dòng)脈疾病發(fā)病率和死亡率均上升到絕經(jīng)前婦女的5 倍,表明雌激素降低可能促進(jìn)了冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)展。據(jù)報(bào)道,MAPK1 的下游因子,例如HIF-1和血紅素加氧酶1(HO-1),它們作為保護(hù)因子參與調(diào)控了圍絕經(jīng)期冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)展[27]。絕經(jīng)綜合征患者血清多種炎性因子水平異常升高,說(shuō)明患者體內(nèi)存在慢性炎癥狀態(tài)。IL-17 信號(hào)通路和TNF 信號(hào)通路被認(rèn)為是經(jīng)典的免疫信號(hào)通路,可以激活與絕經(jīng)綜合征發(fā)病機(jī)理相關(guān)細(xì)胞內(nèi)的分子信號(hào)。IL-17 細(xì)胞因子是Th17 細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子,可增加T 細(xì)胞的活性并誘導(dǎo)多種促炎介質(zhì)的產(chǎn)生;TNF-α 則為炎癥早期的重要炎癥因子,通過(guò)激活多種信號(hào)途徑和分子,調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖和凋亡。陳鵬等[28]研究發(fā)現(xiàn),圍絕經(jīng)期發(fā)生的骨質(zhì)疏松癥,其TNF-α 可以通過(guò)激活核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)促進(jìn)核因子κ B 受體活化因子配體(RANKL)誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成,誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松的發(fā)生發(fā)展。研究表明,二仙湯治療會(huì)減弱血清中TNF-α 的產(chǎn)生,保護(hù)成骨細(xì)胞免受TNF-α 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,二仙湯發(fā)揮了抗骨質(zhì)疏松作用與通過(guò)AKT/轉(zhuǎn)錄因子NF-類胡蘿卜素2 相關(guān)因子(Nrf2)/HO-1 信號(hào)通路減弱成骨細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[29]。最后,我們將通路相關(guān)基因信息與二仙湯-成分-絕經(jīng)綜合征PPI 網(wǎng)絡(luò)相結(jié)合,獲得了中藥-成分-疾病-通路-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)簡(jiǎn)潔地表達(dá)了藥物疾病靶標(biāo)之間的相互作用以及通路與靶標(biāo)之間的關(guān)系,這些與疾病相關(guān)基因或相關(guān)的途徑可能成為絕經(jīng)綜合征發(fā)展的關(guān)鍵途徑,這些途徑可以調(diào)節(jié)復(fù)雜的生物和代謝過(guò)程,而干擾這些途徑的某些靶標(biāo)可能是未來(lái)治療絕經(jīng)綜合征的潛在方法。

    網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于“疾病-基因-藥物”的信息,建立“疾病表型生物分子”網(wǎng)絡(luò),對(duì)中醫(yī)從經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)變?yōu)檠C醫(yī)學(xué)有重要意義。當(dāng)前的網(wǎng)絡(luò)分析是基于已經(jīng)進(jìn)行的研究和可獲得的文獻(xiàn),有效地理解中醫(yī)和西醫(yī)之間密切聯(lián)系的方法。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析了二仙湯與絕經(jīng)綜合征相關(guān)的活性成分、靶點(diǎn)以及信號(hào)通路間的相互作用、關(guān)系,初步闡釋了二仙湯治療絕經(jīng)綜合征的作用機(jī)理,為后期進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究以及中西醫(yī)結(jié)合的臨床治療提供了理論基礎(chǔ)。

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