苦參-雷公藤防治黃芪白粉病植物源乳油的研制

劉計權 ，王 宇 ，劉 昕 ，閆曉睿 ，薛幗珍 ，王菊平

（1.山西中醫(yī)藥大學，山西晉中030619； 2.山西省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理山西省重點實驗室，山西 太原030031）

黃芪 Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus 是豆科多年生草本植物，其根部是藥用價值很高的傳統(tǒng)中藥，每年的需求量過萬噸。隨著近年來黃芪種植面積的不斷擴大，種植時間加長，黃芪白粉病的發(fā)病率也在逐年上升［1-3］。黃芪白粉病主要為害葉片，也可為害莖和莢果。葉面最初產(chǎn)生近圓形白色粉狀斑，擴展后連接成片，呈邊緣不明顯的大片白粉區(qū)，上面布滿白色粉末狀霉層，嚴重時葉背及整株被白粉覆蓋。后期白粉呈灰白色，霉層中產(chǎn)生無數(shù)黑色小顆粒，造成葉片枯黃早落，嚴重影響黃芪的產(chǎn)量和品質(zhì)。目前生產(chǎn)上主要的防治方法是施用化學藥劑，如發(fā)病時用25%粉銹寧等進行噴霧防治，但是化學藥劑的使用不僅嚴重污染環(huán)境，而且造成藥材品質(zhì)的下降［4］。所以開發(fā)植物源農(nóng)藥來防治黃芪白粉病成為未來發(fā)展的必然趨勢。

苦參（Sophora flavescens）屬豆科植物，全國各地均有分布，苦參具有抗炎抑菌、清熱燥濕、殺蟲等活性［5］。雷公藤（Tripterygii wilfordii）為衛(wèi)矛科植物，分布于浙江、江西、安徽、湖南、廣東、福建、臺灣等地，具有消炎、解毒、殺蟲抑菌等功效，也是傳統(tǒng)的殺蟲抑菌植物，在民間很早就用來防治蔬菜上的多種害蟲［6］。本文選擇具有殺蟲抑菌活性的苦參和雷公藤進行植物源乳油的初步研制，以期研制出對黃芪白粉病具有高效、低毒、低殘留、選擇性高等特點的新型植物源制劑。

1 試藥與儀器

1.1 供試藥材

苦參（亳州市圣海中藥飲片有限公司）、雷公藤（安徽精誠本草中藥飲片有限公司）。

1.2 儀 器

JA2603B 電子天平（上海精科天美有限公司）、HH-2 水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）、回流裝置、蒸餾裝置、電爐等。

1.3 試 劑

95%乙醇、無水乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜（天津市天力化學試劑有限公司），甲醇（天津市進豐化工有限公司），OP-4、OP-10（上海麥克林生化科技有限公司）等。

2 方法與結果

2.1 苦參、雷公藤浸膏的制備

用電子天平分別稱取150 g 苦參、雷公藤藥材飲片，雷公藤粉碎過30 目篩，苦參搗至約1 cm直徑大小，分別置于提取器中。第1 次加入3 倍量85%乙醇，回流提取2.0 h，濾取提取液。第2 次在殘渣中再各加入2 倍量85%乙醇，回流提取1.5 h，得到提取液。合并2 次所得液體進行抽濾，將所得提取液，蒸發(fā)回收乙醇，得到干燥浸膏備用。

2.2 溶劑的選擇

取5 支試管，每支試管中放入雷公藤浸膏和苦參浸膏各（0.3 土 0.02）g，用移液管取 1 mL 溶劑分別注入每個試管中，在室溫下輕輕搖動，必要時可微熱以加速溶解。如果此時不能全部溶解，再加入1 mL溶劑，再次微熱溶解。如果還不能完全溶解再加入1 mL，重復上述操作，這樣一直到加至5 mL 溶劑還不能完全溶解時，則棄去，選擇另一種溶劑進行實驗。在某一溶劑完全溶解后，則將其放入0 ℃冰箱，4 h 后觀察有無沉淀（結晶）或分層。計算溶解度，根據(jù)溶解度大小，選取合適的溶劑系統(tǒng)。結果見表1。

表1 溶劑選擇結果

由表1 可以看出，甲醇、無水乙醇、異丙醇、乙酸乙酯對苦參、雷公藤復配浸膏溶解度均低于120 mg/mL，均棄去。 二甲基亞砜對苦參、雷公藤復配浸膏溶解度為200 mg/mL，故選擇二甲基亞砜作為乳油中苦參、雷公藤復配浸膏的溶劑。

2.3 乳化劑的選擇

將苦參、雷公藤復配浸膏（占總體積10%）溶解于2.2 篩選出的溶劑中（占總體積80%），加入乳化劑（占總體積10%）。按下述方法觀察其乳化分散性及乳液穩(wěn)定性，然后根據(jù)制劑的外觀、乳化性能選擇乳化劑，能形成透明均一的單相液體的乳化劑入選。

2.3.1 乳化分散性評價方法 用注射器取1 mL乳油，在距離水面2 cm 高處緩慢地滴加到裝有100 mL（25±1℃）硬水的燒杯中，觀察乳油在水中的乳化狀態(tài)和自然分散情況，乳油乳化分散評價方法見表2。

表2 乳油乳化分散評價方法

2.3.2 乳油穩(wěn)定性評價方法 采用國內(nèi)GB-1603-79規(guī)定的方法。在250 mL 燒杯中加入100 mL 25~30 ℃標準硬水，用移液管吸取乳油試樣在不斷攪拌的情況下徐徐加入硬水中（稀釋系500 倍），使其配成100 mL 乳狀液。加完乳油后，繼續(xù)用2~3 r/min 的速度攪拌30 s，立即將乳狀液移至清潔、干燥的100 mL 量筒中，將量筒置于25~30 ℃范圍內(nèi)的恒溫水浴鍋中，靜置1 h 后取出，觀察乳液分離情況。如在量筒中沒有沉油或沉淀析出，則穩(wěn)定性合適。結果見表3。

表3 乳化劑選擇結果

試驗對常用乳化劑OP-4 及OP-10 進行選擇。將2 種乳化劑分別加入由二甲基亞砜溶解的苦參、雷公藤復配浸膏溶液，配制成乳油后，按照2.3.1 方法操作，得出OP-4 的乳化分散性評價級別為四級，不合格，棄去。OP-10 的乳化分散性評價級別為三級，按照2.3.2 方法對乳液進行穩(wěn)定性評價，觀察到量筒中沒有沉油或沉淀析出，穩(wěn)定性合適。且乳油呈深棕黃色單相透明液體，符合乳油質(zhì)量標準。故選擇OP-10 作為乳油的乳化劑。

2.4 苦參-雷公藤乳油配方的確定

設置苦參-雷公藤浸膏復配比例分別為1∶1、1∶2、2∶1，溶劑二甲基亞砜以 200 mg/mL 的比例溶解，再加入乳化劑OP-10（占乳油總體積15%），稀釋倍數(shù)分別為 30、40、50，制得 1~9 組樣品。在山西中醫(yī)藥大學校園內(nèi)黃芪種植區(qū)，目測選擇白粉病病情一致的植株，取以上配方樣品對黃芪白粉病病株噴施進行試驗，每個樣品噴施5 株染病黃芪植株，以10 號樣品為清水對照組。處理區(qū)內(nèi)不噴施其他防病藥劑，其他田間管理措施均同大田常規(guī)。在黃芪發(fā)病初期五月下旬（5 月22 日）在田間按組別噴施，樣品配方設置及噴施結果見表4。

表4 苦參-雷公藤乳油不同配方對黃芪白粉病的影響

由表4 可以看出，不同組別的乳油對黃芪白粉病的防治效果有一定的差異。當稀釋倍數(shù)為30、40 時，在抑制白粉菌的同時對植物也造成傷害，且當苦參-雷公藤復配比例為1∶2 時，對黃芪植物體傷害較大。當稀釋倍數(shù)為50 時，藥液對黃芪白粉菌有較好抑制效果，且對植物體無明顯傷害，在該稀釋倍數(shù)下，其中以樣品9 對黃芪白粉菌的抑制效果最好。

所以確定樣品9 為最佳配方，即苦參-雷公藤浸膏復配比例2∶1，稀釋倍數(shù)50，并且以二甲基亞砜為溶劑，溶解比例200 mg/mL，以OP-10 為乳化劑，乳化劑占乳油體積15%。

3 討 論

本研究最終確定乳油配方為苦參-雷公藤浸膏復配比例2∶1，以二甲基亞砜為溶劑，溶解比例200 mg/mL，以OP-10 為乳化劑，乳化劑占乳油體積15%，乳油噴灑稀釋適宜倍數(shù)為50 倍。

目前國內(nèi)對黃芪白粉病的防治以化學防治為主，黃芪白粉病發(fā)生規(guī)律及防治方法已有相關報道。邢占民等［7］對河北承德黃芪示范基地的蒙古黃芪進行了調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)多年連茬種植與防治不當致使黃芪白粉病發(fā)生嚴重，田間防效試驗顯示30%金瑞馳（醚菌酯+啶酰菌）SC1000 倍液處理、枯草芽孢桿菌FG300 處理、3 億cfu/g 哈茨木霉菌 WP 200 倍液防效較好。李華義等［8］選擇 4 種常用殺菌劑在承德市隆化縣進行了田間施藥試驗，結果表明25%三唑酮可濕性粉劑效果最好。周天旺等［9］對甘肅省隴西縣首陽鎮(zhèn)中草藥示范園區(qū)黃芪白粉病進行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)白粉病的發(fā)生與溫度、降雨有關，對黃芪白粉病田間防治試驗表明，5%烯唑醇ME 和20%丙環(huán)唑ME 防治效果較好。趙胡代［10］對黃芪白粉病田間防治試驗表明15%三唑酮可濕性粉劑500 倍液防治和增產(chǎn)效果最好。陳泰祥等［11］明確了甘肅省黃芪白粉病的病原菌為真菌界子囊菌門束絲殼屬黃芪束絲殼［Trichocladia astragali（DC.）Neger］，田間藥效試驗結果表明75%肟菌酯·戊唑醇WG、10%苯醚甲環(huán)唑WG 和50%硫磺·三唑酮SC 防治效果較好。張弘弛等［12］研究了黃芪內(nèi)生真菌AR15 中吲哚二酮哌嗪對黃芪白粉病原菌的抑制作用，表明所有吲哚二酮哌嗪對黃芪白粉病原菌都顯示出一定的抑制作用。

對植物源殺菌劑防治黃芪白粉病的研究較少，本文對苦參和雷公藤這兩種具有殺菌活性的中藥材進行了植物源復配制劑的研究，以期能夠篩選出有效防治黃芪白粉病的植物源殺菌劑。雷公藤和苦參有效成分對菌類的抑制效果較好，其復配制成的植物源乳油顯示出對黃芪白粉菌有很好的抑制作用，同時雷公藤和苦參對黃芪蚜蟲也有一定殺滅效果，本文研制的雷公藤-苦參乳油兼具抑菌殺蟲作用。