太子參及其多糖對脾虛大鼠免疫功能的影響

肖愛波

（遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 沈陽 110032）

太子參是石竹科植物孩兒參的干燥塊根，具有益氣健脾、生津潤肺的功效，臨床常用于治療脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱等[1]。太子參中含有皂苷、多糖、氨基酸以及多種微量元素[2]，其中多糖具有心肌保護(hù)[3]、抗應(yīng)激[4]、抗氧化[5]、降血糖血脂[6]、增強(qiáng)免疫力[7]等多種生物活性功能，其藥理作用及機(jī)制是相關(guān)研究的熱點和難點[8]。本試驗研究太子參原藥材和太子參多糖對脾虛大鼠免疫功能的影響，探討其健脾功效，為太子參多糖的作用機(jī)制研究及其相關(guān)制劑的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

SPF級SD大鼠雄性，體重180～220 g，共60只，購置于湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，動物許可證號：SCXK（湘）2019-0004，試驗動物使用許可證號：SYXK（渝）2014-0002。飼養(yǎng)于西南大學(xué)藥學(xué)院實驗動物中心，動物試驗符合中國《試驗動物管理條例》。

1.1.2 藥品與試劑

太子參（福建貝迪藥業(yè)有限公司）、利血平（天津金耀藥業(yè)有限公司）；大鼠細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α及免疫球蛋白SIgA、IgG、IgM 等ELISA 試劑盒（武漢圣洛捷生物技術(shù)有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥物準(zhǔn)備

太子參原藥材：取太子參適量，除雜，60 ℃恒溫干燥24 h，粉碎過四號篩即得。太子參多糖：取太子參適量，加入10 倍量水，90 ℃回流提取3 次，每次2 h，減壓濃縮至80%醇沉3 次，冷凍干燥即得。苯酚硫酸法測得其總糖含量為56.83%，DNS 法測得其還原糖含量為3.17%，計算得其多糖含量為53.66%，多糖得率為19.75%，每0.20 g 太子參多糖相當(dāng)于太子參原藥材1.00 g。

1.2.2 模型復(fù)制

試驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w 后，隨機(jī)分為2 組。模型組50 只按1.0 g/kg 皮下注射利血平注射液[9-10]，正常對照組10只大鼠注射等體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥7 d。

1.2.2.1 模型成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)全國中西醫(yī)結(jié)合虛證老年病防治學(xué)術(shù)會議制定的“中醫(yī)虛證參考標(biāo)準(zhǔn)”及北京師范大學(xué)的脾虛模型復(fù)制標(biāo)準(zhǔn)[11-13]：消瘦、體重減輕，食少納呆，大便溏泄，神態(tài)萎靡、毛色無光澤，蜷縮聚堆，易疲勞。第2、3 項為主癥，第1、4、5、6項為兼項，具備2項主癥或1項主癥2項兼癥即為脾虛造模成功。

1.2.2.2 動物給藥量的確定

SD 大鼠與人按照體表面積折算，等效劑量的換算因子為6.3∶1[14]。根據(jù)2020年版《中國藥典》[1]，太子參原藥材用量為9～30 g/d，因此設(shè)定原藥材組每日劑量為2.0 g/kg（19.5 g/人·d/60 kg×6.3=2.0 g/kg）；每2.0 g 太子參中可提取太子參多糖0.4 g，取其0.5、1.0、2.0倍為太子參多糖組給藥劑量，設(shè)定太子參多糖低、中、高劑量組每日劑量分別為0.2、0.4、0.8 g/kg。

1.2.3 試驗設(shè)計

模型組造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對照組、太子參原藥材組和太子參多糖低、中、高劑量組5組，每組10只大鼠。各組均以1.5 mL/100 g灌胃給藥，連續(xù)7 d。動物分組及處理方法詳見表1。

表1 動物分組及處理方法Tab.1 Animal grouping and treatment methods

1.2.4 測定指標(biāo)及方法

1.2.4.1 臨床體征觀察

每日同一時間觀察并記錄大鼠體重、飲食、大便情況、精神狀態(tài)、皮毛色澤等臨床體征。

1.2.4.2 免疫器官指數(shù)

末次給藥24 h，各組大鼠精確稱重，腹主動脈取血后處死大鼠，分離脾臟和胸腺，分別稱重計算脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)。

1.2.4.3 免疫球蛋白及細(xì)胞因子

末次給藥24 h，腹主動脈取血，靜置離心，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。?yán)格按照試劑盒說明書測定脾虛大鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α和免疫球蛋白SIgA、IgG、IgM的含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行差異顯著性分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P<0.05 表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 太子參原藥材或多糖對脾虛大鼠體重的影響（見表2）

與正常對照組相比，造模后大鼠出現(xiàn)體重下降等特征癥狀，表明造模成功。給藥后的各組大鼠與模型對照組相比，情況明顯好轉(zhuǎn)。由表2可知，造模后大鼠體重極顯著降低（P<0.01）。給藥7 d 后，各組體重均稍有所回升。太子參原藥材組和太子參多糖中、高劑量組大鼠體重極顯著高于模型對照組（P<0.01）。

表2 太子參原藥材或多糖對脾虛大鼠體重的影響Tab.2 Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on body weight of spleen deficiency rats 單位：g

2.2 太子參原藥材或多糖對脾虛大鼠免疫器官指數(shù)的影響（見表3）

表3 太子參原藥材或多糖對脾虛大鼠免疫器官指數(shù)的影響Tab.3 Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on immune organ index of spleen deficiency rats

由表3 可知，模型對照組免疫器官指數(shù)均極顯著低于正常對照組（P<0.01）；與模型對照組相比，太子參多糖低、高劑量組脾臟指數(shù)升高（P<0.05），而中劑量組極顯著升高（P<0.01）。

2.3 太子參原藥或多糖對脾虛大鼠細(xì)胞因子及免疫球蛋白水平的影響

2.3.1 太子參原藥或多糖對脾虛大鼠細(xì)胞因子水平的影響（見圖1）

由圖1可知，與正常對照組相比，模型對照組大鼠IL-2、IL-6和IFN-γ水平極顯著降低（P<0.01）；與模型對照組相比，各給藥組IL-2、IL-6水平均極顯著升高（P<0.01），太子參多糖低、中劑量組IFN-γ 水平極顯著升高（P<0.01），中、高劑量組TNF-α水平極顯著升高（P<0.01）。

圖1 太子參原藥或多糖對脾虛大鼠細(xì)胞因子水平的影響Fig.1 Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on the levels of cytokine in the serum of spleen deficiency rats

2.3.2 太子參原藥或多糖對脾虛大鼠免疫球蛋白水平的影響（見圖2）

由圖2可知，與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清中SIgA水平均顯著降低（P<0.05），IgG、IgM水平極顯著降低（P<0.01）；與模型對照組相比，原藥材組SIgA、IgM 水平，低劑量組SIgA水平，中劑量組SIgA、IgG、IgM水平，高劑量組IgG、IgM水平極顯著升高（P<0.01）；低劑量組IgG、IgM水平顯著升高（P<0.05）。

圖2 灌胃子參原藥或多糖對脾虛大鼠免疫球蛋白水平的影響Fig.2 Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on the levels of Immunoglobulin in the serum of spleen deficiency rats

3 討論

利血平主要通過與腎上腺素能神經(jīng)末梢囊泡膜上的Mg2+-ATP結(jié)合，耗竭體內(nèi)的單胺類遞質(zhì)（NE、DA、5-HT），使動物產(chǎn)生類似脾虛的臨床體征，是制備脾氣虛模型的經(jīng)典方法之一[15-16]。本試驗采用利血平造模，大鼠出現(xiàn)體重下降、飲食減少、大便溏泄、毛色枯黃等情況，表明脾虛模型復(fù)制成功；免疫器官指數(shù)、免疫球蛋白和細(xì)胞因子水平顯著降低，表明脾虛證可引起免疫功能下降[17]。給藥后，太子參多糖中、高劑量組大鼠恢復(fù)情況更好，表明太子參多糖可明顯改善大鼠脾虛癥狀。機(jī)體淋巴細(xì)胞分化、成熟和定居的主要場所是脾臟和胸腺，其指數(shù)的高低是評價機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)[18]。本試驗結(jié)果表明，太子參原藥材及其多糖均可提高脾虛大鼠的脾臟指數(shù)，且太子參多糖較太子參原藥材效果更為明顯；治療后各組胸腺指數(shù)與模型對照組相比均無顯著增加，說明太子參多糖只能緩解利血平對大鼠胸腺造成損傷。細(xì)胞因子IL-2可促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長、增殖、分化；IL-6 誘導(dǎo)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞的增殖分化；IFN-γ 具有促進(jìn)抗原呈遞、提高NK 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和溶酶體活性的作用；TNF-α可殺傷抑制腫瘤細(xì)胞[19]。SIgA是腸道黏膜免疫的主要抗體，對內(nèi)源和外源病原體都具有一定抵抗作用[20]，IgG是免疫蛋白的主要成分，也是體液免疫的主要抗體，具有抗病毒、抗腫瘤等活性；IgM在體液免疫初期防御中至關(guān)重要。太子參原藥材及太子參多糖均可顯著提高IL-2、IL-6、SIgA、IgM 的水平，以中劑量組效果最為明顯，結(jié)果表明，太子參及太子參多糖有利于脾虛大鼠的細(xì)胞免疫、黏膜免疫和體液免疫功能的恢復(fù)。

4 結(jié)論

太子參及太子參多糖均可改善大鼠脾虛癥狀，提高大鼠免疫功能，其中太子參多糖療效更為明顯，表明太子參多糖為太子參益氣健脾、調(diào)節(jié)免疫的主要有效成分。