血站HBsAg反應(yīng)性樣本的ELISA與PCR法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性

【摘要】目的：分析血站應(yīng)用ELISA和PCR檢測(cè)HBsAg反應(yīng)樣本在結(jié)果方面的聯(lián)系。方法：選取2020年1月～2021年1月血液樣本31203份，進(jìn)行ELISA檢測(cè)與PCR檢測(cè)，比較檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：ELISA雙試劑檢出28份，PCR在此基礎(chǔ)上又檢出11份，有效提高用血安全。與單試劑檢測(cè)相比，雙試劑陽(yáng)性靈敏度較高（P<0.05），聯(lián)合PCR檢測(cè)后檢出率高于ELISA雙試劑檢測(cè)。結(jié)論：血液篩查中應(yīng)用ELISA時(shí)，試劑種類不同檢測(cè)精密度存在差異，雙試劑檢測(cè)更易陽(yáng)性確診，但聯(lián)合應(yīng)用PCR檢測(cè)可進(jìn)一步提高HBV-DNA的漏檢風(fēng)險(xiǎn)，確保用血者安全。

【關(guān)鍵詞】血液篩查;乙肝感染;血站;ELISA檢測(cè);PCR檢測(cè);HBsAg

【中圖分類號(hào)】R446.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.15.223

前言

HBsAg即乙肝表面抗原，在進(jìn)行血液乙肝病毒（簡(jiǎn)稱HBV）感染篩查時(shí)通?？蛇M(jìn)行HBsAg反應(yīng)性樣本檢測(cè)，從血液樣本中篩選出HBV感染樣本，促進(jìn)血站安全供血。ELISA是酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)，PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。乙肝是高發(fā)性公共衛(wèi)生問(wèn)題，相關(guān)調(diào)查顯示，HBV感染人群已超3.5億，其中約有1億為國(guó)內(nèi)患者。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，當(dāng)前國(guó)內(nèi)HBV攜帶率>8%[1]。對(duì)HBV標(biāo)志物即HBsAg進(jìn)行科學(xué)檢測(cè)，對(duì)乙肝感染防控意義重大。機(jī)體免疫反應(yīng)變化可能影響ELISA結(jié)果可靠性，PCR對(duì)HBV復(fù)制數(shù)量靈敏度較高，可促進(jìn)精準(zhǔn)檢驗(yàn)。本文從2020年1月～2021年1月血站血液樣本中選取31203份，說(shuō)明ELISA、PCR檢測(cè)方法，分析其結(jié)果相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月～2021年1月31203份血液樣本，根據(jù)所用試劑分組檢驗(yàn)結(jié)果資料，A初檢：試劑為北京萬(wàn)泰試劑，B復(fù)檢：試劑為廈門新創(chuàng)試劑，C：PCR選用上海浩源試劑。性別：男/女=18742/12461，年齡（18～54）歲，平均（35.79±6.42）歲。資料可予分析（P>0.05）。

1.2 方法

全部樣本實(shí)施HBsAg ELISA檢測(cè)，進(jìn)行試劑檢測(cè)后分析檢測(cè)結(jié)果。陽(yáng)性確診：初檢、復(fù)檢顯示S/CO不低于1;待查：?jiǎn)卧噭z測(cè)時(shí)顯示S/CO不低于1，同時(shí)可見單試劑（0.7～1）區(qū)間。對(duì)于待查樣本，實(shí)施雙試劑雙孔復(fù)檢。陽(yáng)性反應(yīng)歸為不合格樣本。ELISA陰性標(biāo)本做PCR檢測(cè)，ELISA反應(yīng)性標(biāo)本不做PCR檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

血清學(xué)檢測(cè)：實(shí)施HBsAg ELISA檢測(cè)，分析陽(yáng)性率。

HBV-DNA檢測(cè)：使用PCR法實(shí)施HBV- DNA檢測(cè)，比較HBV-DNA檢測(cè)、ELISA檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 24.0分析HBsAg反應(yīng)性樣本數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）”表示，t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料（檢測(cè)精度）以率（%）表示，x2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)檢測(cè)

雙試劑檢測(cè)顯示為HBsAg陽(yáng)性28份，陽(yáng)性率為0.09%（28/31 203）。其中雙試劑皆顯示陽(yáng)性為15份，單試劑顯示陽(yáng)性13份;雙試劑顯示待查2份，單試劑顯示待查45份。檢出率情況如下（見表1）。

2.2 HBV-DNA檢測(cè)

ELISA雙試劑陽(yáng)性28份，經(jīng)PCR檢測(cè)另行檢出陽(yáng)性11例，總計(jì)檢出陽(yáng)性病例39例。ELISA雙試劑靈敏度為71.79%（28/39），漏檢率為28.21%（11/39）。該數(shù)據(jù)表明，聯(lián)合PCR檢測(cè)有效降低了漏檢率，促進(jìn)HBV感染者陽(yáng)性檢出。ELISA單試劑陽(yáng)性檢出13份，靈敏度為33.33%（13/39）。ELISA雙試劑待查2份，PCR陽(yáng)性檢出0份，占比為0.00%（0/28）。比較PCR檢測(cè)在4種檢測(cè)方法中陽(yáng)性檢出率，可見雙陽(yáng)性試劑+PCR檢測(cè)>雙試劑陽(yáng)性>單試劑陽(yáng)性>（P<0.05）。

3 討論

本研究顯示，PCR在不同ELISA檢測(cè)試劑應(yīng)用情況下陽(yáng)性率不同。該數(shù)據(jù)說(shuō)明，ELISA試劑存在質(zhì)量差異，檢測(cè)精密度不同。經(jīng)分析，試劑制作中所用材料不同，組合工藝各異，純度標(biāo)準(zhǔn)也不同，因而血站在使用ELISA試劑時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制采購(gòu)質(zhì)量，優(yōu)選重復(fù)性好的試劑，同時(shí)注意雙試劑互補(bǔ)。在實(shí)際檢測(cè)前，應(yīng)測(cè)試應(yīng)用精密度，并對(duì)重復(fù)性參數(shù)進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)。除此之外，應(yīng)在確認(rèn)采購(gòu)的試劑之外備選2種試劑，當(dāng)實(shí)際檢測(cè)出現(xiàn)異常數(shù)據(jù)時(shí)，及時(shí)對(duì)ELISA試劑進(jìn)行更換，實(shí)施精準(zhǔn)檢測(cè)。

分析ELISA和PCR結(jié)果相關(guān)性，可知單試劑待查血樣中含有符合性。分析檢測(cè)數(shù)據(jù)和后續(xù)追蹤結(jié)果，可知待查樣本可能出現(xiàn)假陰性樣本。ELISA待查樣本存在傳染性風(fēng)險(xiǎn)，在使用血液制品時(shí)可能造成乙肝傳播。待查弱陽(yáng)性成因是乙肝感染初期抗原含量較少，此時(shí)HBV基因可能發(fā)生突變導(dǎo)致陽(yáng)性反應(yīng)隱匿。在樣本監(jiān)控中，應(yīng)監(jiān)控S/CO值，當(dāng)其出現(xiàn)增高趨勢(shì)時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)乙肝預(yù)防。所以要聯(lián)合PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本，減少標(biāo)本的漏檢風(fēng)險(xiǎn)。因免疫異常、溶血和檢驗(yàn)技術(shù)、檢驗(yàn)所用試劑質(zhì)量影響，可能引起假陽(yáng)性。通過(guò)ELISA篩查可促進(jìn)乙肝輸血傳播控制，促進(jìn)安全供血[2]。

綜上所述，為提升HBsAg檢測(cè)可靠性，在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)應(yīng)科學(xué)控制待查范圍，積極復(fù)檢或者進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，促進(jìn)精準(zhǔn)檢測(cè)。同時(shí)，免疫學(xué)檢測(cè)應(yīng)與DNA檢測(cè)相結(jié)合，綜合技術(shù)應(yīng)用，降低檢測(cè)誤差。此外，應(yīng)完善追蹤制度，促進(jìn)后期確認(rèn)，提高血液質(zhì)量，對(duì)血液技術(shù)性浪費(fèi)進(jìn)行有效控制。

參考文獻(xiàn)：

[1]張毓，田豐，孫國(guó)棟等.HBV相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)與核酸檢測(cè)HBV DNA的關(guān)聯(lián)分析[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2021，37（01）：39-41.

[2]陳少彬，何子毅，陳慶愷等.ECLIA常規(guī)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液HBsAg檢測(cè)的結(jié)果分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2019，21（04）：383-386.

作者簡(jiǎn)介：范瓊玉 （1994-9），女，漢 ，山西省長(zhǎng)治，檢驗(yàn)師， 研究方向：PCR實(shí)驗(yàn)室。