長鏈非編碼RNA 在乳腺癌中的研究進(jìn)展△

楊豆宇，馬方婧，迪麗米娜·伊拉木，陳芳，郭麗英

新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺外科，烏魯木齊 830000

乳腺癌是全世界女性中最常見的惡性腫瘤，盡管在過去十年中乳腺癌的治療取得了重要進(jìn)展，但該疾病仍然是嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題?？鼓[瘤治療方法的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展極大地提高了腫瘤患者的生存率和生活質(zhì)量。然而，接受抗腫瘤藥物治療的患者通常會產(chǎn)生明顯的耐藥性，導(dǎo)致療效降低、腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致治療失敗。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，傳統(tǒng)乳腺癌標(biāo)志物缺乏足夠的靈敏度和特異度，2007 年美國臨床腫瘤學(xué)會（American Society of Clinical Oncology，ASCO）不再推薦傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志 物[ 如 癌 胚 抗 原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖 類 抗 原153（carbohydrate antigen 153，CA153）]作為早期乳腺癌的診斷和術(shù)后隨訪指標(biāo)。近年來，微陣列和高通量測序技術(shù)的發(fā)展使人們更深層次地了解分子生物學(xué)，尤其是非編碼RNA。其中長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移中具有重要的調(diào)節(jié)作用，是能夠應(yīng)用于腫瘤診斷和預(yù)后判斷的分子標(biāo)志物。lncRNA 是一種長度超過200 個(gè)核苷酸的不編碼蛋白質(zhì)的RNA 分子，根據(jù)最新的研究數(shù)據(jù)，lncRNA 的組織特異性表達(dá)特征可能代表乳腺癌不同階段的組織特異性，因此可作為乳腺癌診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。本文就lncRNA 在乳腺癌診斷、侵襲與轉(zhuǎn)移、耐藥、治療前景及預(yù)后等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 lncRNA 概述

1.1 lncRNA 的發(fā)現(xiàn)

人類基因組測序結(jié)果顯示，具有編碼蛋白質(zhì)功能的基因只占不到全部基因組序列的2%，而在占據(jù)人類基因組98%以上的非蛋白編碼序列中，絕大多數(shù)為lncRNA。lncRNA 起初被認(rèn)為是基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的“噪聲”，并不具有生物學(xué)功能，然而隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，lncRNA 于2002 年對小鼠全基因組cDNA 文庫的大規(guī)模測序過程中首次被發(fā)現(xiàn)，其生物學(xué)功能逐一被呈現(xiàn)。目前常用于研究lncRNA 的公共數(shù)據(jù)庫包括TCGA、LNCipedia、lncRNAdb、starBase、miRCode、TargetScan、Ensembl、CLIPdb、PARma、lncRNAtor、NONCODE、lnCeDB。lncRNA 是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200 個(gè)堿基的RNA，其長度為200～100 000 nt，一般位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，許多l(xiāng)ncRNA 滯留在不同的亞細(xì)胞器中，在真核細(xì)胞中普遍被轉(zhuǎn)錄。大量數(shù)據(jù)表明，大多數(shù)已鑒定的lncRNA 由RNA 聚合酶Ⅱ（RNA polⅡ）轉(zhuǎn)錄，具有mRNA 樣結(jié)構(gòu)，經(jīng)過酶的剪切和加工作用，具有polyA 尾和啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)，但由于其序列中缺少開放閱讀框而不具有或者很少具有蛋白質(zhì)編碼功能。研究表明，lncRNA 是腫瘤來源的核酸，可以釋放到周圍循環(huán)中并在血漿和血清中檢測到。

1.2 lncRNA 的生物學(xué)功能

lncRNA 表現(xiàn)出發(fā)育和組織特異性的表達(dá)模式，并與許多生物學(xué)過程有關(guān)，例如選擇性剪接、蛋白質(zhì)活性調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)定位改變以及表觀遺傳調(diào)控。一些lncRNA 可以作為小RNA 的前體和沉默微小RNA（microRNA，miRNA）的工具。研究表明，lncRNA 可作為miRNA 海綿體即miRNA 的競爭性抑制劑來降低miRNA 的水平。lncRNA 在分子功能上主要充當(dāng)4 種角色：信號、誘餌、引導(dǎo)、支架。lncRNA 可以作為信號分子發(fā)揮作用，當(dāng)細(xì)胞受到特定刺激時(shí)，lncRNA 將表現(xiàn)出相應(yīng)的組織特異性。lncRNA 可以作為miRNA 靶點(diǎn)的誘餌，還可以刺激和結(jié)合特定的蛋白質(zhì)，然后阻止其下游序列的反應(yīng)。lncRNA 不僅可以招募染色質(zhì)修飾酶或其他蛋白質(zhì)來靶向基因，還可以形成一個(gè)蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，聚集兩種表面修飾酶。lncRNA 在基因表達(dá)的調(diào)控中發(fā)揮廣泛作用，在人類和動(dòng)物細(xì)胞周期調(diào)控、免疫監(jiān)視和胚胎干細(xì)胞多能性等過程中發(fā)揮重要作用。lncRNA 可在細(xì)胞中調(diào)節(jié)基因表達(dá)，影響蛋白質(zhì)定位，并對形成細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)或蛋白質(zhì)復(fù)合物具有重要作用。lncRNA 可通過與蛋白質(zhì)相互作用調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性和定位。此外，lncRNA 通過將轉(zhuǎn)錄因子募集到其靶基因啟動(dòng)子上調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，激活基因表達(dá)。因此，lncRNA 與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。

2 lncRNA 在乳腺癌診斷中的作用

許多l(xiāng)ncRNA 能夠促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥，并在許多人類惡性腫瘤中表現(xiàn)出較高的組織特異性。研究表明，許多l(xiāng)ncRNA 的表達(dá)譜與乳腺癌的不良預(yù)后、生存率和疾病復(fù)發(fā)相關(guān)。重要的是，乳腺癌中組織特異性lncRNA 的表達(dá)可以作為臨床上有用的生物標(biāo)志物來區(qū)分正常組織和腫瘤組織或乳腺癌亞型。lncRNA 也可以作為乳腺癌的標(biāo)志物，有助于早期乳腺癌的診斷和提高疾病治療療效。H19 是乳腺癌中首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的lncRNA，通過多個(gè)機(jī)制參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，包括編碼miRNA-675、參與競爭性內(nèi)源性RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、與MYC 相互作用等。曹鳴菲等研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA-ROR（long non-coding RNA-ROR，lincRNA-ROR）在乳腺癌患者的乳腺癌組織和血清中表達(dá)上調(diào)，術(shù)后其表達(dá)水平下降，這一研究支持了lncRNA 作為乳腺癌診斷及預(yù)后預(yù)測標(biāo)志物的觀點(diǎn)。此外，lncRNA 可能有助于乳腺癌的分子分類，MS-lncRNA-BCLIN25 作為人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）過表達(dá)亞型的特異性lncRNA，被發(fā)現(xiàn)通過表觀遺傳修飾和RNA-RNA 相互作用上調(diào)erb-b2 受體酪氨 酸 激 酶2（erb-b2 receptor tyrosine kinase 2，ERBB2）的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。Cedro-Tanda 等研究發(fā)現(xiàn)，AC009283.1 高表達(dá)可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，并認(rèn)為其在HER2 富集型乳腺癌中具有潛在的作用。研究表明，SNHG3 在三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）中高表達(dá)，其表達(dá)沉默可能通過影響miRNA-326/整合素-α5（integrin-α5，ITGA5）軸和抑制Vav2/Rac1 信號通路抑制體外TNBC細(xì)胞的惡性發(fā)展。這一結(jié)果說明SNHG3 可作為TNBC 的潛在生物標(biāo)志物。研究表明，lncRNA CASC9 可作為一種新的治療靶點(diǎn)，并可作為診斷乳腺癌的潛在標(biāo)志物。

3 lncRNA 在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用

侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞重要的生物學(xué)行為。由于lncRNA 具有與DNA、RNA、蛋白質(zhì)及其結(jié)合物相互作用的能力，lncRNA 可通過表觀遺傳調(diào)控、ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、促進(jìn)血管生成、誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等途徑影響乳腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。

3.1 lncRNA 介導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控

lncRNA 廣泛參與基因組的調(diào)節(jié)，與腫瘤（包括乳腺癌）的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系。研究表明，lncRNA H19 是乳腺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)力。熒光素酶檢測結(jié)果表明，H19/miRNA-675-5p 能夠降低泛素連接酶E3 家族（c-Cbl 和Cblb）的表達(dá)水平，激活表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）和肝細(xì)胞生長因子受體c-met，通過蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）和胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）途徑促進(jìn)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移。此外，miRNA-675 還參與了H19 促進(jìn)Slug 表達(dá)并抑制上皮鈣黏素（Ecadherin）表達(dá)的機(jī)制，從而增加了乳腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的可能性。同時(shí)，lncRNA H19 和p53 在乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中可相互作用，腫瘤抑制因子p53 能夠調(diào)節(jié)與細(xì)胞周期阻滯和凋亡有關(guān)的下游基因。重要的是，lncRNA H19 基因座被置于細(xì)胞周期調(diào)控的核心，尤其是在G期到S 期的過渡期。乳腺癌細(xì)胞系中l(wèi)ncRNA H19 表達(dá)增強(qiáng)可誘導(dǎo)G/S 期轉(zhuǎn)換，而lncRNA H19 耗竭則阻止細(xì)胞進(jìn)入S 期和增殖。Li 等首次發(fā)現(xiàn)lncRNA H19 是乳腺癌中p53 的靶基因，強(qiáng)調(diào)了腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8（tumor necrosis factor alpha induced protein 8，TNFAIP8）和p53 在乳腺癌中的相互調(diào)節(jié)作用，lncRNA H19 的表達(dá)增強(qiáng)通過競爭性結(jié)合p53 來消除p53 對TNFAIP8 的抑制作用，進(jìn)而誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的EMT 和轉(zhuǎn)移。值得注意的是，一項(xiàng)關(guān)于乳腺癌發(fā)生發(fā)展調(diào)控機(jī)制的研究顯示，HOX 轉(zhuǎn)錄反義RNA（HOX transcript antisense RNA，HOTAIR）能夠促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移，部分是通過與多梳抑制復(fù)合物2（polycomb repressive complex 2，PRC2）結(jié)合，誘導(dǎo)PRC2 在全基因組范圍內(nèi)靶向與轉(zhuǎn)移有關(guān)的數(shù)百個(gè)基因，其結(jié)果是H3K27 甲基化，在表觀遺傳學(xué)上使這些基因沉默。此外，HOTAIR 通過促進(jìn)響應(yīng)啟動(dòng)子區(qū)域的H3K27 甲基化直接抑制WNT 抑制因子1（WNT inhibitory factor 1，WIF1）的表達(dá)，從而激活WNT/β-聯(lián)蛋白（β-catenin）信號通路。因此，HOTAIR 在乳腺癌的表觀遺傳調(diào)控中具有關(guān)鍵作用。另有研究表明，lncRNA-乳腺癌抗雌激素耐受 基 因4（breast cancer anti-estrogen resistance 4，BCAR4）通過參與Hippo 和Hedgehog 信號通路調(diào)節(jié)糖代謝，從而在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，這也可作為TNBC 的潛在治療靶點(diǎn)。雌激素調(diào)節(jié)的lncRNA CUPID1 和CUPID2 則通過抑制DNA 損傷后的細(xì)胞周期停滯促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。

3.2 lncRNA 介導(dǎo)的ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是多種分子機(jī)制綜合作用的結(jié)果，包括ceRNA 網(wǎng)絡(luò)。其中，lncRNA 相關(guān)的ceRNA 網(wǎng)絡(luò)通過海綿化miRNA 在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。TP73-AS1 是在人類染色體1p36 上新發(fā)現(xiàn)的lncRNA，TP73-AS1 介導(dǎo)的miRNA/mRNA 網(wǎng)絡(luò)有助于乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。TP73-AS1 的表達(dá)與臨床中乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有顯著關(guān)聯(lián)。Liu 等研究發(fā)現(xiàn)，TP73-AS1 基因敲除可抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，且可通過靶向miRNA-125a 和上調(diào)異黏蛋白（metadherin，MTDH）的表達(dá)促進(jìn)體外乳腺癌細(xì)胞凋亡，提示TP73-AS1/miRNA-125a/MTDH 是導(dǎo)致乳腺癌惡性進(jìn)展的一條新的途徑。研究最多的lncRNA 之一是X 染色體失活特異性轉(zhuǎn)錄因子（X inactive specific transcript，XIST），它是從雌性哺乳動(dòng)物的X 染色體失活中心轉(zhuǎn)錄而成。研究表明，XIST 通過miRNA-155/尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子1（caudal type homeobox 1，CDX1）軸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長、遷移和侵襲。Liu 等研究證實(shí)，XIST 通過充當(dāng)miRNA-362-5p 的ceRNA 并調(diào)節(jié)泛素相關(guān)蛋白1（ubiquitin associated protein 1，UBAP1）的表達(dá)抑制乳腺癌的進(jìn)展。此外，H19 作為ceRNA 與miRNA-152結(jié)合，miRNA-152 能夠直接作用于DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）。H19 的過表達(dá)降低了miRNA-152 對DNMT1 表達(dá)的抑制作用，從而促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞MCF-7 和MDA-MB-231 的增殖和侵襲。H19 是miRNA-93-5p 的靶點(diǎn)，該分子可上調(diào)miRNA-93-5p 靶點(diǎn)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表達(dá)水平，STAT3 可顯著促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7 和MDA-MB-231 的增殖、遷移和侵襲。H19 充當(dāng)ceRNA 使let-7 家族的miRNA 海綿化并促進(jìn)核心多能性因子LIN28 的表達(dá)。H19、let-7a/b 和LIN28 形成了一個(gè)雙負(fù)反饋環(huán)，對乳腺癌干細(xì)胞的遷移產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響。這種ceRNA 調(diào)節(jié)作用可釋放缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α），導(dǎo)致丙酮酸脫氫酶激酶1 表達(dá)增加，從而影響乳腺癌干細(xì)胞的重編程。在TNBC 中，lincRNA-ROR 高表達(dá)，且lincRNA-ROR可發(fā)揮ceRNA 的功能，沉默miRNA-145 的表達(dá)可使其下游重要的靶基因ADP 核糖基化因子6（ADP ribosylation factor 6，ARF6）水平升高，進(jìn)而改變上皮鈣黏素的定位及細(xì)胞間連接，從而促進(jìn)乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

3.3 lncRNA 介導(dǎo)的腫瘤血管生成

腫瘤血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要過程，由于新生血管的形成，腫瘤細(xì)胞可以獲得生長和傳播所需的營養(yǎng)物質(zhì)，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。研究表明，lncRNA NR2F1-AS1 可能通過海綿化miRNA-338-3p 誘導(dǎo)乳腺癌血管生成。Zhang 等研究證實(shí)胰島素樣生長因子1（insulin like growth factor 1，IGF1）可以直接與miRNA-338-3p 結(jié)合，同時(shí)lncRNA NR2F1-AS1 也可以對IGF1的表達(dá)進(jìn)行正調(diào)控，因此，lncRNA NR2F1-AS1 可以海綿化miRNA-338-3p，保護(hù)IGF1 不受抑制。據(jù)報(bào)道，IGF1 可與內(nèi)皮細(xì)胞中的胰島素樣生長因子1受體（insulin like growth factor 1 receptor，IGF1R）結(jié)合以促進(jìn)血管生成，并且IGF1R 的激活可進(jìn)一步激活ERK 通路。lncRNA NR2F1-AS1 可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞中IGF1 的表達(dá)，從而提高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì) 胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中IGF1R 和ERK1/2 的磷酸化。因此，lncRNA NR2F1-AS1 可 通過海綿化miRNA-338-3p 及IGF1/IGF1R/ERK 途徑促進(jìn)乳腺癌血管生成。

3.4 lncRNA 介導(dǎo)的EMT 激活機(jī)制

EMT 是上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上發(fā)生向間充質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變并獲得遷移能力的過程。EMT 可導(dǎo)致細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞間黏附喪失、頂端-基底極性異常，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的活力和侵襲能力。據(jù)報(bào)道，lncRNA H19 可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞中多種EMT 相關(guān)基因的表達(dá)。H19的過表達(dá)降低了上皮標(biāo)志物上皮鈣黏素的表達(dá)并誘導(dǎo)了間充質(zhì)標(biāo)志物波形蛋白的表達(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞中間充質(zhì)樣形態(tài)變化延長。此外肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1）可與RNA 結(jié)合蛋白HuR 結(jié)合并形成抑制性復(fù)合物，這種復(fù)合物通過與腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物

CD133

的啟動(dòng)子結(jié)合對CD133 進(jìn)行負(fù)性調(diào)控，影響EMT 的進(jìn)行，從而影響乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

4 lncRNA 在乳腺癌耐藥中的作用

雖然多種化療藥物及內(nèi)分泌治療藥物改善了乳腺癌患者的總體生存率和生活質(zhì)量，但仍有部分患者出現(xiàn)耐藥，阻礙其治療，乳腺癌仍然是全世界女性惡性腫瘤相關(guān)死亡的主要原因。lncRNA 通過賦予細(xì)胞耐藥表型的多種機(jī)制在調(diào)節(jié)內(nèi)源性和獲得性耐藥中發(fā)揮著動(dòng)態(tài)作用。

4.1 lncRNA H19

高水平的H19 通常與惡性腫瘤患者的不良預(yù)后相關(guān)，并與各種惡性腫瘤的化療耐藥相關(guān)。H19是雌激素受體α（estrogen receptor α，ERα）的下游靶分子，ERα的表達(dá)可改變H19 水平，通過抑制促凋亡基因

BIK

和

NOXA

的表達(dá)，降低紫杉醇（paclitaxel，PTX）治療后的細(xì)胞凋亡率。內(nèi)分泌治療被廣泛應(yīng)用于ERα陽性乳腺癌的治療中，但內(nèi)分泌治療抵抗（endocrine therapy resistance，ETR）的頻繁發(fā)生導(dǎo)致了疾病復(fù)發(fā)率增加，患者的總生存時(shí)間減少。原發(fā)性乳腺腫瘤中H19 與ERα的表達(dá)水平呈正相關(guān)。H19 可在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平上調(diào)節(jié)ERα的表達(dá)，阻斷NOTCH 和c-met 信號通路可顯著下調(diào)H19/ERα的表達(dá)水平。這種信號通路的藥物抑制劑有助于逆轉(zhuǎn)對內(nèi)分泌治療的抵抗，如他莫昔芬和氟維司群。Wang 等研究表明，H19 表達(dá)上調(diào)可通過H19/S-腺苷基高半胱氨酸水解酶（Sadenosylhomocysteine hydrolase，SAHH）/DNA 甲基轉(zhuǎn) 移 酶3β（DNA methyltransferase 3 beta，DNMT3B）軸降低

Beclin1

啟動(dòng)子區(qū)的甲基化，增強(qiáng)雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽性乳腺癌細(xì)胞的自噬作用，并最終導(dǎo)致三苯氧胺耐藥。此外，H19 的過表達(dá)增強(qiáng)了乳腺癌細(xì)胞對多柔比星（doxorubicin）的耐藥性。H19 誘導(dǎo)多柔比星耐藥的主要效應(yīng)蛋白可能包括多藥耐藥蛋白1（multidrug resistance protein 1，MDR1）和多藥耐藥蛋白4（multidrug resistance protein 4，MDR4）。泛素連接酶cullin 4A（CUL4A）被認(rèn)為是介導(dǎo)H19 和MDR1表達(dá)的一個(gè)重要因素，CUL4A 的高表達(dá)損害了細(xì)胞對多柔比星的化療敏感性，導(dǎo)致接受化療的乳腺癌患者的生存率降低?？傊琀19 能夠影響乳腺癌細(xì)胞的耐藥性和化療敏感性，使乳腺癌細(xì)胞對化療藥物的反應(yīng)減弱，導(dǎo)致腫瘤治療的療效下降。

4.2 lincRNA-ROR

近年來大量臨床藥物研究表明，lincRNA-ROR表達(dá)上調(diào)可導(dǎo)致乳腺癌化療耐受，是乳腺癌多重耐藥的一個(gè)標(biāo)志物。據(jù)報(bào)道，lincRNA-ROR 在乳腺癌中可通過抑制miRNA-205-5p 的表達(dá)和增強(qiáng)鋅指E-盒結(jié)合同源異形盒1（zinc finger E-box binding homeobox 1，ZEB1）、鋅指E-盒結(jié)合同源異形盒2（zinc finger E-box binding homeobox 2，ZEB2）轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)促進(jìn)EMT 過程，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞侵襲和三苯氧胺抵抗。另有研究表明，由于lincRNA-ROR 可以充當(dāng)miRNA-194-3p 的ceRNA海綿并下調(diào)其表達(dá)，因此通過lincRNA-ROR/miRNA-194-3p/甲 基 化CpG 結(jié) 合 蛋 白2（methyl-CpG binding protein 2，MECP2）調(diào)控軸，lincRNA-ROR 可以下調(diào)雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin kinase，MTOR）水平以抑制血管生成，然后降低乳腺癌細(xì)胞對雷帕霉素的敏感性。此外，lincRNA-ROR 可通過沉默miRNA-34a 的表達(dá)抑制吉西他濱誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞自噬和凋亡?？傊弑磉_(dá)的lincRNA-ROR 可促進(jìn)波形蛋白、神經(jīng)型鈣黏蛋白的表達(dá)，抑制上皮黏蛋白的mRNA 及蛋白表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致對5-氟尿嘧啶、PTX、他莫昔芬、吉西他濱等藥物耐受，是乳腺癌化療、激素治療泛耐藥的一個(gè)分子標(biāo)志物。

4.3 lncRNA HOTAIR

HOTAIR 的異常表達(dá)已被廣泛地作為不同實(shí)體瘤的耐藥標(biāo)志物。Xue 等研究結(jié)果表明，37 個(gè)lncRNA 基因被雌激素抑制并在三苯氧胺耐藥細(xì)胞中被上調(diào)。

HOTAIR

是三苯氧胺耐藥乳腺癌中主要上調(diào)lncRNA 的基因，它能夠與ER 相互作用，抑制ER 的表達(dá)，且在缺乏配體的情況下也能增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。HOTAIR 過表達(dá)可誘導(dǎo)ER 靶基因表達(dá)，如

GREB1

、

TFF1

和

c

-

myc

。另一項(xiàng)研究表明，在抗曲妥珠單抗的乳腺癌細(xì)胞株中，HOTAIR 過表達(dá)。在這些細(xì)胞中，HOTAIR 能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞從G期向S 期轉(zhuǎn)變，抑制細(xì)胞凋亡。

4.4 其他lncRNA

研究表明，lncRNA-ATB 高表達(dá)與曲妥珠單抗耐藥相關(guān)，并且對乳腺癌細(xì)胞侵襲和曲妥珠單抗耐藥具有多效性作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，敲除曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞中的生長抑制特異性基因5（growth arrest specific 5，GAS5）可導(dǎo)致磷酸酶與張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）表達(dá)降低。PTEN 在人類中廣泛表達(dá)，它可使磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate，PIP3）去磷酸化，并負(fù)性調(diào)節(jié)AKT/磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）途徑，這是一種已知的提高藥物敏感性的信號途徑。這些發(fā)現(xiàn)表明，GAS5 的下調(diào)可以導(dǎo)致曲妥珠單抗耐藥乳腺癌細(xì)胞中

PTEN

基因的去抑制，從而導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對曲妥珠單抗耐藥。結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（colon cancer associated transcript 2，CCAT2）、BCAR4 以及尿路上皮癌相關(guān)基因1（urothelial cancer associated 1，UCA1）在三苯氧胺耐藥乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，CCAT2 通過ERK/促分裂原活化的蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）信號通路在ER陽性乳腺癌細(xì)胞三苯氧胺耐藥中發(fā)揮重要作用，BCAR4 在三苯氧胺耐藥中的作用由ERBB2/erb-b2受體酪氨酸激酶3（erb-b2 receptor tyrosine kinase 3，ERBB3）信號通路驅(qū)動(dòng)，而UCA1 被認(rèn)為通過激活A(yù)KT/MTOR 信號通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對三苯氧胺的耐藥性。

5 靶向lncRNA 治療乳腺癌的方法

lncRNA 在腫瘤組織和正常組織中的表達(dá)具有差異。已有研究發(fā)現(xiàn)lncRNA 參與多種細(xì)胞過程并導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，這些研究促進(jìn)了針對致癌lncRNA 惡性腫瘤新療法的發(fā)展。然而，將lncRNA 作為靶點(diǎn)應(yīng)用于新的治療方法需要更深入的研究。目前多種方法通過靶向lncRNA 并調(diào)節(jié)其表達(dá)以達(dá)到治療目的，包括靶l(wèi)ncRNA 的失穩(wěn)和降解、適配體對lncRNA 功能的破壞、小分子抑制劑對lncRNA 結(jié)合位點(diǎn)的掩蔽作用、Morpholinos 以及CRISPR/Cas9 技術(shù)等。采用RNA 干擾（RNA interference，RNAi）介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)選擇性沉默lncRNA 是臨床中應(yīng)用的一種方法?；蛑委熓窍蛉橄侔┘?xì)胞傳遞抑癌基因lncRNA 的另一種治療方法。然而，需要指出的是，在實(shí)施治療性RNAi 和基因治療的過程中仍然存在許多技術(shù)挑戰(zhàn)。另一種策略是利用反義寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASO）、單鏈DNA 或RNA 分子靶向lncRNA，這些分子能夠與靶RNA 結(jié)合，并通過核糖核酸酶H1（ribonuclease H1，RNASEH1）促進(jìn)其沉默。已有研究證實(shí)了利用ASO 阻斷MALAT1 可以阻止肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。ASO 可以設(shè)計(jì)成靶向其他具有致癌作用的lncRNA，從而限制其表達(dá)。因此，lncRNA 分子可能是乳腺癌患者的“下一代”治療選擇。

6 lncRNA 作為乳腺癌預(yù)后標(biāo)志物

近幾十年來越來越多的證據(jù)表明，lncRNA 在腫瘤發(fā)展的各種過程中發(fā)揮著重要作用，lncRNA的差異表達(dá)模式已被認(rèn)為是腫瘤診斷和預(yù)后評估的潛在有效生物標(biāo)志物。研究報(bào)道，血清HIF-1α穩(wěn)定長鏈非編碼RNA（HIF-1α-stabilizing long noncoding RNA，HISLA）表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級、TNM 分期和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析顯示，血清HISLA 可用于乳腺癌患者與健康對照者的鑒別，且HISLA 高表達(dá)與患者的總體預(yù)后不良密切相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明血清HISLA 水平可作為乳腺癌患者的預(yù)后預(yù)測因子。另有一項(xiàng)研究確定了8 個(gè)免疫相關(guān)的lncRNA 作為乳腺癌患者潛在的預(yù)后工具，它與風(fēng)險(xiǎn)值、腫瘤狀態(tài)和生存情況密切相關(guān)。這為乳腺癌中免疫相關(guān)lncRNA 的研究提供了新的視角，并有助于發(fā)現(xiàn)預(yù)后和免疫治療的潛在生物標(biāo)志物。此外，一個(gè)新的與自噬相關(guān)的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)模型以及一個(gè)與乳腺癌干細(xì)胞相關(guān)的lncRNA 集合相繼被發(fā)現(xiàn)，在未來，通過前瞻性研究的驗(yàn)證，lncRNA 可能會提高預(yù)測的準(zhǔn)確性，并指導(dǎo)乳腺癌患者的個(gè)體化治療。

7 小結(jié)

lncRNA 作為基因表達(dá)的重要調(diào)控因子，具有廣泛的功能，能夠通過多種途徑影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。lncRNA 在鑒別正常組織、腫瘤組織甚至乳腺癌不同分期方面的潛力尚需進(jìn)一步研究，使其成為乳腺癌診斷和預(yù)后預(yù)測生物標(biāo)志物。各種lncRNA 通過調(diào)控靶基因的表達(dá)、編碼腫瘤抑制因子miRNA 和控制信號通路促進(jìn)乳腺癌耐藥。因此，靶向lncRNA 可能成為乳腺癌耐藥的一種潛在的治療方法?；赗NA 的治療新進(jìn)展使lncRNA成為新的治療靶點(diǎn)，可能為更安全、更有效地治療乳腺癌提供新的希望。然而，RNA 治療技術(shù)的發(fā)展仍然存在許多共同的挑戰(zhàn)，包括缺乏安全、特異和有效的載體類型，不確定最佳劑量方案以及非靶向效應(yīng)。本研究討論了一些與乳腺癌密切關(guān)聯(lián)的lncRNA，它們有可能作為乳腺癌診斷、預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)志物。盡管lncRNA 可能具有治療價(jià)值，但在其應(yīng)用于臨床之前仍需進(jìn)一步研究，還需要克服許多挑戰(zhàn)。