益原素配方茶對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響

楊 銳，鄒小林，符宗林，羅 賽，官興麗

（云南省普洱茶發(fā)酵工程研究中心，昆明 650217）

尿酸是生物體內(nèi)細(xì)胞代謝和食物中嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，機(jī)體內(nèi)尿酸水平長(zhǎng)期升高會(huì)形成高尿酸血癥。高尿酸血癥是繼高血壓、高血脂和高血糖后又一影響人體健康的重要風(fēng)險(xiǎn)因子，近幾年高尿酸血癥的發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)逐年增加，尤其是在美國(guó)和中國(guó)地區(qū)，研究顯示5%～12%的高尿酸血癥會(huì)發(fā)展成為痛風(fēng)［1］。

痛風(fēng)的治療藥物主要分為抑制尿酸生成、促進(jìn)尿酸排泄和抗炎等［2］，毒副作用較明顯，因此具有降尿酸功效的日常食品和藥食兩用食品逐漸成為目前研究的熱點(diǎn)［3］。黃嘌呤氧化酶是尿酸生成的關(guān)鍵，其催化反應(yīng)動(dòng)力學(xué)是當(dāng)前研究的重點(diǎn)，通過(guò)抑制其對(duì)黃嘌呤和次黃嘌呤的催化轉(zhuǎn)化，進(jìn)而降低尿酸水平，對(duì)高尿酸血癥和痛風(fēng)防治具有重要意義［4］。為此，筆者對(duì)益原素普洱茶與不同藥食同源食材復(fù)配的4 個(gè)樣品的黃嘌呤氧化酶活性抑制強(qiáng)弱進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示4 個(gè)組方樣品都具有較強(qiáng)的體外黃嘌呤氧化酶活性抑制效果，與堿性水相比有顯著差異。將具有降尿酸作用的普洱茶與藥食同源食材進(jìn)行復(fù)配，是天然來(lái)源植物性成分在降尿酸功能性食品開(kāi)發(fā)中的一個(gè)良好應(yīng)用，可為高尿酸和痛風(fēng)防治的天然降尿酸功能性食品開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料和方法

1.1 試劑

益原素與不同藥食同源食材復(fù)配樣提取物S1-S4（復(fù)配組方見(jiàn)表1）（云南大益微生物技術(shù)有限公司）、市售某堿性水（pH 9.3±0.6）、黃嘌呤氧化酶（XOD）和次黃嘌呤（HXA）（上海源葉生物科技有限公司），其他試劑為分析純。

表1 益原素普洱茶與不同藥食同源食材復(fù)配組方

1.2 儀器

756 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）、微孔板恒溫振蕩器（杭州奧盛儀器有限公司）、超聲波清洗器（北京市六一儀器廠）、電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 試劑配制

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）配制，取磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉，用超純水超聲溶解，配制成100 mM（pH 7.5）的磷酸鹽緩沖溶液；黃嘌呤氧化酶（XOD）溶液配制，用預(yù)冷的PBS 溶解，配制成2 U/ml 的酶工作液，分裝保存于-20 ℃；底物次黃嘌呤（HXA）溶液配制，底物用PBS 超聲溶解，配制成1 mM 的底物溶液；待測(cè)樣品溶液配制，樣品用1% DMSO 的PBS 溶解待用。

1.3.2 測(cè)定方法

尿酸在293 nm 波長(zhǎng)處有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定293 nm 處尿酸的紫外吸光度值反映尿酸含量的變化，進(jìn)而測(cè)定樣品對(duì)XOD 酶活性的影響。依據(jù)參考文獻(xiàn)［5-6］修改方法后檢測(cè)，依次將PBS 和1 mg/mL 的樣品溶液1.45 mL、2 U/mL 的XOD 溶液150 mL 加入24 孔板，37 ℃孵育3 min，加入1 mM的底物溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，37 ℃反應(yīng)5 min 后，將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)入比色皿中，測(cè)定293 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值A(chǔ)293。樣品XOD 抑制率計(jì)算公式如下：

Ac：對(duì)照組，加入底物和XOD；Ab：空白組，加入底物和PBS；As：樣品組，加入底物、XOD 和樣品；Asb：樣品空白組，加入底物和樣品。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)分析

酶活性抑制率以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（平均值±SD）表示，所有數(shù)據(jù)應(yīng)用Prism Graphpad 6.0 軟件進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

復(fù)配得到4 個(gè)組方樣品，檢測(cè)其對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響，結(jié)果如表2、圖1 所示，4 個(gè)組方樣品均能有效地抑制黃嘌呤氧化酶的活性，且顯著強(qiáng)于堿性水，表明4 個(gè)組方樣品都具有抑制尿酸生成的作用。其中，組方2 樣品的抑制作用最強(qiáng)，組方3 樣品次之，組方4 樣品的抑制效果最弱，這可能與不同組方食材其內(nèi)含成分不同有關(guān)。

表2 各組方樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制率 %

4 個(gè)組方的主要成分是益原素，益原素是云南大益微生物技術(shù)有限公司通過(guò)菌方組合發(fā)酵而成的一款普洱熟茶，富含多種對(duì)人體有益的活性成分，如茶褐素、茶多酚、puerins，具有抗氧化、抗癌、降血糖、降血脂、改善代謝綜合征等多種生理活性。而益原素普洱熟茶富含的黃酮類(lèi)、黃烷醇類(lèi)、酚酸類(lèi)、生物堿類(lèi)等物質(zhì)，在體外能有效抑制黃嘌呤氧化酶的活性［7］。此外，動(dòng)物水平研究表明，普洱茶除降低酶活性外還能抑制腎尿酸相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，減少尿酸鹽的重吸收，顯著降低機(jī)體尿酸水平［8-10］。

組方2 中復(fù)配了菊苣，其中含有的菊苣酸、綠原酸等在體外和體內(nèi)皆有較好降尿酸的作用［11］，此外還具有利尿作用能促進(jìn)尿酸的排泄［12］；桑葉、梔子、葛根等食材中含有大量酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿等化學(xué)成分［13-15］，能有效抑制黃嘌呤氧化酶的活性［7］。另外3 個(gè)組方中復(fù)配的食材，如蒲公英和玉米須，除能抑制尿酸的生成還能促進(jìn)尿酸排泄［16-17］。將益原素普洱熟茶與具有降尿酸功效的藥食同源食材進(jìn)行復(fù)配，經(jīng)提取濃縮后組方樣品中的活性成分含量增加，富含黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)等能抑制黃嘌呤氧化酶活性的物質(zhì)，還有生物堿和菊苣酸等物質(zhì)具有利尿作用能促進(jìn)尿酸的排泄。復(fù)配得到的組方樣品，作為具有更強(qiáng)降尿酸作用且能調(diào)節(jié)多種身體機(jī)能的功能性食品，通過(guò)日常食用可起到安全且有效的抗“高尿酸”的效果。

3 小結(jié)

隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，“高尿酸”發(fā)病率逐年升高，開(kāi)發(fā)高效、安全的天然降尿酸活性產(chǎn)品現(xiàn)已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。益原素普洱茶與不同藥食同源食材復(fù)配得到的4 個(gè)組方樣品都具有顯著的黃嘌呤氧化酶活性抑制效果，復(fù)配樣品兼具口感風(fēng)味和功能效果，是天然來(lái)源植物性成分在降尿酸功能性食品開(kāi)發(fā)中的一個(gè)良好應(yīng)用，可為高尿酸和痛風(fēng)防治的天然降尿酸功能性食品開(kāi)發(fā)提供參考。