環(huán)氧蟲啶液相色譜通用分析方法研究

徐成辰，吳 晗，唐慧敏，楊淑嫻

(江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇南京 210036)

環(huán)氧蟲啶是華東理工大學(xué)和上海生農(nóng)生化制品有限公司聯(lián)合開發(fā)的一種新型新煙堿類殺蟲劑。研究表明其作用機(jī)制不同于傳統(tǒng)的新煙堿類殺蟲劑，其對(duì)nAChR具有一定的拮抗作用，對(duì)大多同翅目害蟲，尤其對(duì)稻飛虱、蚜蟲、粉虱具有優(yōu)異殺蟲活性，同時(shí)對(duì)鱗翅目、鞘翅目、雙翅目害蟲也有效[1]?；谄鋸V譜、高效、無交互抗性、低毒、低殘留等特點(diǎn)，可以被應(yīng)用于水稻、蔬菜、果樹、小麥、棉花、玉米等作物害蟲的防治，特別是對(duì)水稻飛虱、甘藍(lán)蚜蟲及黃瓜蚜蟲具有良好的田間藥效[2,3]。

環(huán)氧蟲啶登記有原藥和可濕性粉劑，前者已有相關(guān)分析方法的研究報(bào)道[1]，后者還沒有。為了滿足企業(yè)生產(chǎn)質(zhì)控、相關(guān)市場(chǎng)監(jiān)管等需求，本文開發(fā)了一種適用于環(huán)氧蟲啶原藥及其可濕性粉劑定量分析的液相色譜通用方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

乙腈：色譜純(德國(guó)Merck公司)；水：超純水；醋酸銨：分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；冰醋酸：分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；環(huán)氧蟲啶標(biāo)樣：已知含量≥98.0%(上海生農(nóng)生化制品有限公司)；環(huán)氧蟲啶原藥(上海生農(nóng)生化制品有限公司)；25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑(上海生農(nóng)生化制品有限公司)。

1.2 儀器

Agilent 1290高效液相色譜儀，具有二極管陣列檢測(cè)器及色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；超純水制備系統(tǒng)(Millipore)；色譜柱：Zorbax SB-C18不銹鋼色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm (Millipore)。

1.3 色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈+醋酸銨緩沖液(20 mmol/L，pH= 7.0)=20+80(體積比)；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；流動(dòng)相流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時(shí)間：環(huán)氧蟲啶約4.6 min。環(huán)氧蟲啶原藥、可濕性粉劑的高效液相色譜圖如圖1和圖2。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取0.1 g(精確至0.000 1 g)環(huán)氧蟲啶標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超聲波振蕩 5 min使樣品溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取含環(huán)氧蟲啶0.1 g(精確至0.000 1 g)的試樣于50 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，超聲波振蕩5 min使樣品溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm濾膜過濾。

1.4.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的峰面積變化小于1.2%后，再按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣分析。

1.4.4 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液及試樣前后2針標(biāo)樣溶液的峰面積分別進(jìn)行平均，按下式計(jì)算環(huán)氧蟲啶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X)。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中環(huán)氧蟲啶峰面積平均值；A2為試樣溶液中環(huán)氧蟲啶峰面積平均值；m1為環(huán)氧蟲啶標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中環(huán)氧蟲啶質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過Agilent1290高效液相色譜儀的二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行紫外光譜掃描，得到環(huán)氧蟲啶的紫外吸收光譜圖(圖3)，環(huán)氧蟲啶在340 nm有最大紫外吸收，靈敏度優(yōu)于報(bào)道的325 nm[1]，同時(shí)考慮檢測(cè)波長(zhǎng)越大，容易產(chǎn)生吸收的雜峰越少，故選擇340 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)過程中分別使用甲醇、乙腈、水、緩沖液不同比例混合作為流動(dòng)相，根據(jù)環(huán)氧蟲啶和雜質(zhì)峰的出峰時(shí)間、分離效果、峰形以及峰純度進(jìn)行綜合考慮，當(dāng)使用乙腈+醋酸銨緩沖液(20 mmol/L，pH= 7.0)=20+80(體積比)時(shí)，環(huán)氧蟲啶色譜峰峰形及峰純度較好，能顯著改善峰形拖尾問題，且與雜質(zhì)能完全分離，保留時(shí)間在4.6 min，與報(bào)道12.9 min[1]相比分析時(shí)間大大縮短，提高了工作效率(圖1、圖2)。

2.2 特異性試驗(yàn)

本試驗(yàn)采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別環(huán)氧蟲啶。標(biāo)樣、原藥和可濕性粉劑中的環(huán)氧蟲啶HPLC-DAD峰純度均大于990，有效成分處無其他物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。峰純度色譜圖見圖4～圖6。

2.3 方法線性關(guān)系的測(cè)定

按1.4.1節(jié)標(biāo)樣溶液的制備方法配制5個(gè)不同濃度的有效成分線性相關(guān)溶液。在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按照濃度從低到高的順序測(cè)定每個(gè)溶液中環(huán)氧蟲啶的峰面積，取2次測(cè)定的平均結(jié)果。以環(huán)氧蟲啶質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖7)。

從圖7可以看出，當(dāng)環(huán)氧蟲啶質(zhì)量濃度在0.079 5 ～0.392 1 mg/mL(進(jìn)樣體積5 μL)，其與相應(yīng)的環(huán)氧蟲啶峰面積之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，計(jì)算得回歸方程為y=12 018x+3.883 8，相關(guān)系數(shù)r=1.000 0，完全可以滿足定量分析要求。

2.4 方法精密度測(cè)定

按1.4.2節(jié)試樣溶液的制備方法配制5個(gè)環(huán)氧蟲啶原藥精密度溶液和5個(gè)25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑精密度溶液。

以0.197 0 mg/L有效成分線性相關(guān)溶液為標(biāo)樣溶液，在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、精密度溶液、精密度溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1、表2。

表1 環(huán)氧蟲啶原藥中環(huán)氧蟲啶精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑中環(huán)氧蟲啶精密度試驗(yàn)結(jié)果

從表1可以看出，環(huán)氧蟲啶原藥中環(huán)氧蟲啶質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)為0.363 7%，小于修改 的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67=1.343 4，表明有效成分分析方法精密度的測(cè)定結(jié)果符合要求。

從表2可以看出，25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑中環(huán)氧蟲啶質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)為0.556 5%，小于修改的Horwitz公式2 (1-0.51ogC)×0.67= 1.644 1 (C=0.256 93)，表明有效成分分析方法精密度的測(cè)定結(jié)果符合要求。

2.5 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

稱取含0.05 g (精確至0.000 1 g)環(huán)氧蟲啶的25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑于50 mL容量瓶中，再加入環(huán)氧蟲啶標(biāo)樣0.05 g (精確至0.000 1 g)，按1.4.2節(jié)試 樣溶液的制備方法配制5個(gè)有效成分準(zhǔn)確度溶液。

以0.197 0 mg/L線性相關(guān)溶液為標(biāo)樣溶液，在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、準(zhǔn)確度溶液、準(zhǔn)確度溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

從表3可以看出，25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑中環(huán)氧蟲啶平均回收率為99.06%，表明此分析方法具有良好的準(zhǔn)確度。

表3 8%葉菌唑懸浮劑回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文選取環(huán)氧蟲啶原藥和25%環(huán)氧蟲啶可濕性粉劑作為試樣，通過試驗(yàn)建立了一種測(cè)定環(huán)氧蟲啶含量的液相色譜通用分析方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法精密度和準(zhǔn)確度高，分離效果好，且更加靈敏高效，具有通用性，為環(huán)氧蟲啶原藥及制劑的分析提供了指導(dǎo)。