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    柴術(shù)理胃飲對(duì)肝郁脾虛型功能性消化不良大鼠血清MTL、GAS的影響

    2021-11-03 02:00:28范明明林偉韓海瑞張嘉裕王順
    中醫(yī)藥信息 2021年10期
    關(guān)鍵詞:中藥劑量血清

    范明明,林偉,韓海瑞,張嘉裕,王順*

    (1.黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院南崗分院,黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150036)

    功能性消化不良(Functional dyspepsia,F(xiàn)D)是一類需排除器質(zhì)性疾病后,以早飽、餐后腹脹、餐后惡心或嘔吐、噯氣、反酸、上腹脹氣、上腹痛、上腹部燒灼感等不適癥狀為特點(diǎn)的,以胃和十二指腸功能障礙為特征的一種功能性胃腸病[1-2]。可分為餐后不適綜合征和上腹疼痛綜合征兩種亞型及混合型。根據(jù)其臨床表現(xiàn),多將功能性消化不良?xì)w屬于“脹滿”“痞滿”“胃痛”等范疇[3]。中醫(yī)學(xué)在對(duì)本病的辨證施治方面取得了一定進(jìn)展,能有效緩解胃腸功能障礙,促進(jìn)胃腸動(dòng)力,具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。既往相關(guān)研究表明,肝郁脾虛是導(dǎo)致FD的主要病因[4]。筆者結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn),以自擬方劑柴術(shù)理胃飲對(duì)肝郁脾虛型功能性消化不良患者進(jìn)行辨證治療,臨床效果較好。此方為柴胡疏肝散、小建中湯、香砂六君子湯三方加減而成,本實(shí)驗(yàn)主要通過觀察組方對(duì)肝郁脾虛型功能性消化不良大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率、胃泌素(GAS)及胃動(dòng)素(MTL)分泌水平以及胃竇病理形態(tài)學(xué)的影響,研究柴術(shù)理胃飲對(duì)功能性消化不良的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SPF級(jí)健康雄性SD大鼠60只,體質(zhì)量(220±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SCXK 黑2016004。大鼠在安靜適宜環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周,室溫(22 ± 2)℃,相對(duì)濕度55%~60%。飼養(yǎng)期間充足清潔飲水,自由攝食。

    1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

    柴術(shù)理胃飲組方:柴胡15 g,白術(shù)15 g,黨參20 g,枳實(shí)10 g,白芍15 g,陳皮10 g,姜半夏10 g,丹參10 g,砂仁10 g 和炙甘草10 g。所需中藥均由黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院藥房提供,常規(guī)水煎濃縮至生藥含量為10.8 g/mL后4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩6嗯肆⑼ㄎ靼矖钌?,?guī)格:10 mg,批號(hào):180906650),蒸餾水配成0.3 mg/mL的溶液備用。

    1.3 主要試劑與儀器

    GAS大鼠ELISA試劑盒(批號(hào):20201216,武漢博士德生物工程有限公司);MTL 大鼠ELISA 試劑盒(批號(hào):20201024,武漢博士德生物工程有限公司);攝像機(jī)(HDR-PJ200,日本索尼公司);顯微攝影系統(tǒng)(moticam3000,美國motic公司);臺(tái)式離心機(jī)(GL-16G型,上海安亭科學(xué)儀器廠);切片機(jī)(2135型,德國徠卡公司)。

    1.4 動(dòng)物造模、分組與給藥

    大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后,通過曠場(chǎng)試驗(yàn)篩選出分?jǐn)?shù)相對(duì)集中的60 只納入正式實(shí)驗(yàn)并編號(hào)。采用隨機(jī)數(shù)字表將全部大鼠分為正常組、模型組、中藥低劑量組(低劑量組)、中藥中劑量組(中劑量組)、中藥高劑量組(高劑量組)和西藥組,每組各10 只。正常組大鼠常規(guī)飼養(yǎng),不予造模;其余組參考毛蘭芳等[5]的造模方法,采用復(fù)合因素刺激(慢性疲勞+ 懸尾+ 飲食失節(jié))方法制備FD模型,連續(xù)進(jìn)行28 d。

    具體方法如下:①慢性疲勞:每日于上午、下午將大鼠放置于轉(zhuǎn)棒疲勞儀上各運(yùn)動(dòng)1 次,每次60 min,轉(zhuǎn)速為20 r/min;②懸尾刺激:用長柄無齒止血鉗纏上3~4 層紗布后,夾住大鼠尾部中后1/3 處使其倒懸,力度以大鼠尖叫且無法掙脫為宜,早晚各進(jìn)行1次,每次進(jìn)行10 min,兩次間隔6 h以上;③飲食失節(jié):大鼠采取隔日禁食,其余時(shí)間給予充足食物。造模后通過曠場(chǎng)試驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),曠場(chǎng)試驗(yàn)合格者視為模型制備成功。

    中藥低、中、高劑量組給藥劑量分別為13.5、27、54 g/kg,西藥組給予多潘立酮,劑量為3.125 mg/kg,正常組、模型組灌胃等量生理鹽水。各組每日給藥1 次,連續(xù)21 d。

    1.5 觀察指標(biāo)及方法

    1.5.1 一般狀態(tài)觀察

    觀察并記錄造模前后以及治療期間大鼠的精神狀態(tài)、自由活動(dòng)度、耳廓色澤、毛發(fā)情況、大便形態(tài)等一般行為學(xué)改變情況。

    1.5.2 大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量

    在造模期間和治療最后一周時(shí)用電子天平每日稱取一定的食物,計(jì)算每日平均進(jìn)食量;造模和給藥最后一天時(shí)用電子秤稱量大鼠體質(zhì)量。

    1.5.3 胃排空率測(cè)定

    術(shù)前12 h開始,大鼠禁食不禁水,采用碳素墨水以10 mL/kg 劑量灌胃,30 min 后以10%水合氯醛腹腔注射麻醉。先用真空采血管于心臟處取血,分離血清備用。將大鼠剖腹取胃稱重,稱取重量為全質(zhì)量;沿胃小彎側(cè)剪開胃壁并用生理鹽水沖洗干凈胃壁,濾紙吸干,稱取重量為凈質(zhì)量,利用公式計(jì)算胃排空率。

    胃排空率(%)=(全質(zhì)量-凈質(zhì)量)/全質(zhì)量 ×100%

    1.5.4 小腸推進(jìn)率測(cè)定

    截取小腸全段,測(cè)量小腸全長和幽門至碳墨上緣距離,利用公式計(jì)算小腸推進(jìn)率。

    小腸推進(jìn)率(%)=碳墨推進(jìn)距離/小腸總長度×100%

    1.5.5 病理形態(tài)學(xué)觀察

    胃腸動(dòng)力檢測(cè)完成后,分別取大鼠胃竇組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后,常規(guī)脫水、浸蠟和包埋,切片厚4 μm,HE染色觀察病理學(xué)改變。

    1.5.6 血清GAS和MTL水平測(cè)定

    心臟真空采血,室溫靜置2 h 后,在4 ℃條件下,以3 000 r/min 離心20 min,收集上清液即為待測(cè)血清。具體步驟如下:嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒操作說明進(jìn)行血清GAS、MTL 水平檢測(cè),記錄酶標(biāo)儀在450 nm 波長處各孔OD 值,以吸光度OD 值為縱坐標(biāo),以待測(cè)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),得到相應(yīng)的曲線,根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度水平。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    應(yīng)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠一般狀態(tài)情況比較

    造模前各組大鼠均精神狀態(tài)良好,進(jìn)水量與進(jìn)食量正常,皮毛色澤、糞便及瞇眼等活動(dòng)均正常,活潑好動(dòng),動(dòng)作敏捷,皮毛光亮順滑。造模后模型組大鼠神情疲憊,皮毛稀疏枯槁,靜臥少動(dòng),瞇眼明顯,進(jìn)水量與進(jìn)食量相繼下降,大便稀溏,反應(yīng)遲鈍。經(jīng)治療后各給藥組大鼠精神尚可,皮毛恢復(fù)光澤,進(jìn)食與飲食逐漸恢復(fù),活動(dòng)較前增加,糞便正常。

    2.2 各組大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量變化情況比較

    治療前,與正常組比較,中藥低、中、高劑量組和西藥組大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量均降低(P<0.05);治療后,與模型組比較,中藥低、中、高劑量組和西藥組大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量均增加(P<0.05);與中藥低劑量組比較,中藥高劑量組體質(zhì)量增加明顯(P<0.05),其余各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);治療后,中藥組和西藥組進(jìn)食量比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

    表1 各組大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量變化情況比較(±s,n=10)

    表1 各組大鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量變化情況比較(±s,n=10)

    注:與正常組治療前比較,▲P <0.05;與模型組治療后比較,ΔP <0.05;與低劑量組治療后比較,$P <0.05。

    組別正常組模型組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組西藥組體質(zhì)量(g)進(jìn)食量(g)治療后14.90±9.55 8.02±1.34 9.66±1.31Δ 10.31±1.35Δ 11.08±2.17Δ 10.83±2.16Δ治療前267.06±13.80 233.54±15.56▲240.63±14.87▲241.11±15.93▲240.50±9.59▲239.60±13.16▲治療后282.27±15.96 238.39±14.84 255.64±11.57Δ 262.92±23.66Δ 275.88±15.88Δ$267.64±17.90Δ治療前12.10±1.80 7.21±0.69▲7.08±0.77▲7.31±0.62▲7.29±0.63▲7.59±0.67▲

    2.3 各組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率情況比較

    模型組大鼠胃排空率以及小腸推進(jìn)率較正常組顯著減低(P<0.05);與模型組相比,中藥低、中、高劑量組和西藥組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率均有不同程度提高(P<0.05);治療后,與中藥低劑量組比較,中劑量組、高劑量組大鼠胃排空率明顯升高(P<0.05),其余各組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;小腸推進(jìn)率方面,中藥各劑量組組間比較、各中藥劑量組與西藥組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率比較(±s,n=10)

    表2 各組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率比較(±s,n=10)

    注:與正常組比較,*P <0.05;與模型組比較,#P <0.05;與低劑量組比較,▲P <0.05。

    小腸推進(jìn)率(%)71.64±6.90 52.36±3.82*58.71±6.08#59.99±5.17#63.54±6.76#61.26±6.71#組別正常組模型組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組西藥組劑量(g/kg)——13.5 27 54 3.125×10-3胃排空率(%)61.20±7.24 47.60±5.08*52.35±2.84#56.39±4.62#▲58.01±6.09#▲57.38±5.66#

    2.4 各組大鼠血清GAS和MTL水平比較

    與正常組比較,造模后模型組大鼠血清MTL、GAS含量顯著減少(P<0.05);治療后,與模型組相比,中藥低、中、高劑量組和西藥組大鼠血清MTL、GAS 水平均有不同程度恢復(fù)(P<0.05);中藥各劑量組間MTL比較、各中藥劑量組與西藥組MTL 比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與中藥低劑量組比較,高劑量組GAS 含量明顯增加(P<0.05),其余各組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    表3 各組大鼠血清MTL與GAS水平比較(±s,n=10)

    表3 各組大鼠血清MTL與GAS水平比較(±s,n=10)

    注:與正常組比較,*P <0.05;與模型組比較,#P <0.05;與低劑量組比較,▲P <0.05。

    GAS(pg/mL)303.13±29.06 246.63±20.37*267.74±17.40#274.72±21.08#289.14±19.75#▲286.41±22.99#組別正常組模型組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組西藥組劑量(g/kg)——13.5 27 54 3.125×10-3 MTL(pg/mL)260.51±26.37 217.46±21.15*237.42±21.05#243.32±23.63#248.94±19.84#247.84±19.12#

    2.5 各組大鼠胃竇組織病理形態(tài)學(xué)觀察

    各組大鼠胃竇組織黏膜層完整,各層次結(jié)構(gòu)完整,未見明顯病理改變;正常組大鼠胃竇組織無炎性細(xì)胞浸潤,模型組大鼠胃竇黏膜層伴有淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤;中藥低、中、高劑量組和西藥大鼠黏膜層也見炎性細(xì)胞浸潤,但嚴(yán)重程度不及模型組。見圖1。

    圖1 各組大鼠胃竇組織病理形態(tài)學(xué)觀察(HE染色,×100)

    3 討論

    功能性消化不良(FD)的發(fā)病率日漸上升,其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為FD的發(fā)生與胃腸動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感、精神心理因素、腦-腸軸功能紊亂、十二指腸黏膜低度炎癥及免疫與腸道微生態(tài)失衡等諸多因素密切相關(guān)[6]。其中胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂是FD 最主要的病理生理改變,被認(rèn)為是FD 發(fā)病的一種重要機(jī)制[6-7]。胃腸激素MTL、GAS在調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力過程中有著重要的作用[8]。MTL 是由M 細(xì)胞合成并分泌的22 個(gè)氨基酸組成的多肽,廣泛分布于十二指腸、近端空腸和胃竇中,此外還存在于神經(jīng)系統(tǒng)中[9],是促進(jìn)胃腸收縮活動(dòng)的腦腸肽之一,不僅可以刺激胃平滑肌收縮,而且能直接增強(qiáng)胃竇蠕動(dòng)[10],促進(jìn)胃腸道自主運(yùn)動(dòng)收縮和平滑肌肌電活動(dòng)[11]。MTL的分泌與胃腸消化間期的移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)息息相關(guān),能明顯促進(jìn)胃蠕動(dòng)和小腸的傳送運(yùn)動(dòng),縮短胃排空時(shí)間[12],此外,MTL 還可以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)在胃腸道的轉(zhuǎn)運(yùn)。GAS 主要由胃腸道G 細(xì)胞分泌,由17 個(gè)氨基酸組成,集中分布于胃竇、十二指腸、空腸,能直接刺激胃酸分泌,促進(jìn)膽汁、胰液等消化液的分泌[13],還可直接刺激胃腸平滑肌細(xì)胞收縮[14],松弛幽門括約肌,進(jìn)而增強(qiáng)胃腸道運(yùn)動(dòng)。在緊張的環(huán)境中,GAS 經(jīng)迷走神經(jīng)調(diào)控可以增強(qiáng)胃腸分泌和蠕動(dòng)功能。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)FD 的治療方案仍沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),主要是對(duì)癥處理,包括抑酸、保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)胃動(dòng)力、助消化、調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)和抗幽門螺桿菌等,對(duì)于伴有精神抑郁的患者,適當(dāng)加用抗抑郁藥。

    中醫(yī)學(xué)根據(jù)FD臨床表現(xiàn)可將其歸屬到“脹滿”“痞滿”“胃痛”等范疇。病位在胃,與肝、脾密切相關(guān),脾虛氣滯、胃失和降為其核心病機(jī)[15]?!端貑枴け哉撈氛f:“飲食自倍,腸胃乃傷”,《類證治裁》[16]指出:“暴怒傷肝,氣逆而痞者,舒其郁”,說明本病與飲食不節(jié)、情志失調(diào)密切相關(guān)。肝主疏泄、通暢氣機(jī),若情志抑郁,肝木不疏,肝氣橫逆,克犯脾胃,致中焦氣機(jī)紊亂,氣逆則腹脹、反酸、噯氣;飲食失節(jié),脾胃運(yùn)化失職,則水濕痰飲停聚,困阻中焦,影響肝的疏泄功能,進(jìn)而出現(xiàn)痞滿、腹痛等癥。本方柴術(shù)理胃飲中,柴胡和白術(shù)疏肝解郁,條達(dá)肝氣,健脾理氣,共為君藥。黨參健脾益肺,補(bǔ)中焦之虛,與白術(shù)相伍共資氣血生化,補(bǔ)益后天之本;陳皮理氣健脾、燥濕化痰,痰濕去而脾自運(yùn);枳實(shí)破氣消積而散痞;白芍養(yǎng)血柔肝,與柴胡相伍則氣機(jī)疏泄有道,疼痛自止,這四味共為佐藥。姜半夏燥濕健脾而止嘔,丹參活血祛瘀止痛,砂仁芳香醒脾,甘草調(diào)和諸藥,共為使藥。諸藥共效,疏肝解郁、益氣健脾,從而達(dá)到治療FD的目的。

    現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,柴胡具有降低胃酸分泌、保護(hù)胃黏膜、促使MTL 分泌增加,縮短胃排空時(shí)間,增強(qiáng)小腸推進(jìn)功能、止痛及抗炎等功效[17];白芍可以下調(diào)結(jié)腸血管活性腸肽,增加腸道內(nèi)水分含量,延長胃腸平滑肌收縮時(shí)間[18];白術(shù)多糖能促進(jìn)胃腸黏膜損傷修復(fù)[19];黨參具有抑制GAS 分泌,進(jìn)而起到減少胃酸分泌、修復(fù)胃黏膜、促進(jìn)腸道推動(dòng)、提高機(jī)體消化能力等藥理作用[20];陳皮提取物可不同程度調(diào)節(jié)大鼠血清GAS 水平,能刺激胃平滑肌收縮,促進(jìn)消化液分泌,顯著降低小鼠胃殘留率及提高小腸推進(jìn)率[21-22];枳實(shí)提取物能顯著促進(jìn)胃動(dòng)力和加速腸蠕動(dòng),進(jìn)而促進(jìn)胃排空,提高小腸推進(jìn)率[23-24];姜半夏水煎劑及提取物具有明顯的止吐和抗消化性潰瘍作用[25];丹參水溶性成分能夠增加胃黏膜血流,保護(hù)黏膜屏障,增強(qiáng)黏膜防御能力[26];砂仁能增加血清MTL 的含量,進(jìn)而促進(jìn)胃排空和胃蠕動(dòng)[27-28]。

    本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),采用復(fù)合病因方法復(fù)制的肝郁脾虛型FD大鼠模型有明顯的胃腸功能減退癥狀,血清中MTL、GAS 表達(dá)水平以及胃排空率和小腸推進(jìn)率明顯降低(P<0.05)。經(jīng)柴術(shù)理胃飲干預(yù)后,中藥各劑量組大鼠血清中MTL、GAS含量均顯著升高,胃排空和小腸推進(jìn)速率均明顯加快。柴術(shù)理胃飲能夠上調(diào)大鼠血清中MTL、GAS 表達(dá)水平可能是其改善肝郁脾虛型FD大鼠胃腸動(dòng)力障礙的重要機(jī)制之一。

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