血清蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B、雌二醇水平與青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人肥胖的關(guān)系

劉莉莉，蘇靜，付葉紅，王娟娟

肥胖被定義為過(guò)度的脂肪積累，已成為一種全球流行病。近年來(lái)隨著各種不良刺激及不健康的生活飲食習(xí)慣，使得青春期脾虛肝郁型閉經(jīng)病人日益增多。脾虛肝郁型是肝失疏泄，脾失健運(yùn)而表現(xiàn)以胸脅脹痛、腹脹、便溏等為主癥的證候。閉經(jīng)屬中醫(yī)學(xué)經(jīng)閉、血枯等范疇，病因可由肝、脾、腎三臟，氣血、臟腑功能失調(diào)（氣血虛、脾虛、肝郁）引發(fā)。 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B）是一種細(xì)胞內(nèi)磷酸酶，可介導(dǎo)瘦素和胰島素途徑的失活，在肥胖和胰島素抵抗病人中PTP1B 的表達(dá)和活性增加。雌二醇（estra?diol，E2）是一種甾體雌激素，有很強(qiáng)的性激素作用，由卵巢內(nèi)卵泡的顆粒細(xì)胞分泌，其代謝產(chǎn)物是雌酮和雌三醇，被認(rèn)為是卵巢分泌最重要的性激素。研究發(fā)現(xiàn)，E2 通過(guò)介導(dǎo)促進(jìn)食欲和抑制食欲的激素，對(duì)食物攝入、能量平衡和脂肪積累具有調(diào)節(jié)作用。本研究通過(guò)檢測(cè)青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人血清PTP1B、E2 水平，并探討二者與肥胖的關(guān)系，為臨床治療青少年脾虛肝郁閉經(jīng)合并肥胖病人提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1―8 月張家口市中醫(yī)院婦科門(mén)診確診的青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人110例作為研究對(duì)象，根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2002年頒布的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》脾虛肝郁證診斷標(biāo)準(zhǔn)以及《中國(guó)學(xué)齡兒童青少年超重、肥胖篩查體重指數(shù)值分類標(biāo)準(zhǔn)》將病人分為青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)發(fā)生肥胖（閉經(jīng)肥胖組）60 例，青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)未發(fā)生肥胖（閉經(jīng)未肥胖組）50 例。另選取年齡相當(dāng)?shù)耐隗w檢者60例作為對(duì)照組，并記錄受試者年齡、體質(zhì)量、肥胖度、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）、高密度脂蛋白（highdensity lipoprotein，HDL）等資料。其中，三組人員年齡相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

>0.05）。病人或其近親屬及體檢者知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①受試者腰圍≥80 cm；②年齡范圍為10～20 周歲；③正常月經(jīng)周期建立后停經(jīng)6 個(gè)月，或按自身月經(jīng)周期計(jì)算停經(jīng)3 個(gè)月經(jīng)周期或以上者；④近3個(gè)月未用性激素者；⑤卵泡生成激素及黃體生成激素均≤5 IU/L。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①垂體-下丘腦器質(zhì)性病變者；②先天性生殖器官發(fā)育異?；蚝筇炱髻|(zhì)性疾病導(dǎo)致的原發(fā)性或繼發(fā)性閉經(jīng)；③精神病病人；④正在參與其他臨床試驗(yàn)的病人；⑤系統(tǒng)性免疫缺陷病人或有家族遺傳病史；⑥藥物性或其他醫(yī)源性所致肥胖。

1.4 主要試劑和儀器

低溫高速離心機(jī)（型號(hào)Sor?vall Legend Micro17，美國(guó)Thermo Scientific 公司），PTP1B 及E2 ELISA 試 劑 盒（ 批 號(hào)20180616、20180425，美國(guó)R&D 公司），Tecan genios 酶標(biāo)儀（型號(hào)Freedom EVO75，奧地利Tecan公司）。

1.5 研究方法

1.5.1 樣本采集

研究對(duì)象均于入院后、對(duì)照組于體檢當(dāng)日空腹抽取外周靜脈血5 mL，靜置30 min，室溫條件下3 000 r/min，離心15 min，吸取上清液分別裝入EP管中，置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?p>1.5.2 血清PTP1B、E2 水平檢測(cè)

從-80 ℃冰箱中取出凍存血清樣本，解凍，采用ELISA法測(cè)定受試者血清PTP1B、E2 水平，樣品及標(biāo)準(zhǔn)品均設(shè)雙孔檢驗(yàn)，用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算PTP1B、E2 的濃度，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.3 肥胖的判斷

觀察并計(jì)算受試者身高、體質(zhì)量、肥胖度、BMI，肥胖度=（實(shí)測(cè)體質(zhì)量－標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量）/標(biāo)準(zhǔn)體重×100%，成人標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量=［身高（cm）－100］×0.9（kg），女性標(biāo)準(zhǔn)體重=［身高（cm）－70］×60%，BMI= 體 質(zhì)量（kg）/［身高（m）］。 BMI 18.5～23.9、肥胖度<20% 為正常；BMI 24.0～27.9、肥胖度30%～50% 為超重；BMI≥28、肥胖度≥50% 為肥胖。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

三組年齡和HDL 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

>0.05），體質(zhì)量、肥胖度、BMI、TC、TG、LDL水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

<0.05）；與對(duì)照組相比，閉經(jīng)未肥胖組年齡、體質(zhì)量、肥胖度、BMI、TC、TG、LDL、HDL 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

>0.05）；與閉經(jīng)未肥胖組相比，閉經(jīng)肥胖組體質(zhì)量、肥胖度、BMI、TC、TG、LDL水平均升高（

P

<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)110例及健康體檢者60例一般資料比較/± s

2.2 受試者血清PTP1B、E2 水平比較

與對(duì)照組相比，閉經(jīng)未肥胖組、閉經(jīng)肥胖組PTP1B、E2 水平均升高（

P

<0.05）；與閉經(jīng)未肥胖組相比，閉經(jīng)肥胖組PTP1B、E2 水平均升高（

P

<0.05），三組血清PTP1B、E2水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)110例及健康體檢者60例血清蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）、雌二醇（E2）水平比較/（ng/mL，± s）

2.3 logistic 回歸分析青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的影響因素

以青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人是否發(fā)生肥胖為因變量，以血清TC、LDL、PTP1B、E2 水平為自變量，進(jìn)行l(wèi)ogistic 回歸分析，結(jié)果顯示，TC、LDL、PTP1B、E2 水平均是青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（

P

<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的影響因素logistic回歸分析

2.4 血清PTP1B、E2 水平對(duì)診斷青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的ROC 曲線分析

ROC 曲線顯示，PTP1B 水平預(yù)測(cè)青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的ROC 曲線下面積為0.718（95%

CI

：0.627～0.812），截?cái)嘀禐?9.13 ng/mL，敏感度為60.0%，特異性為78.3%。E2 水平預(yù)測(cè)青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的ROC 曲線下面積為0.695（95%

CI

：0.599～0.790），截?cái)嘀禐?73.15 ng/mL，敏感度為63.3%，特異性為71.7%。聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的ROC 曲線下面積為0.750（95%

CI

：0.660～0.840），敏感度為75.0%，特異性為73.3%。見(jiàn)圖1。

圖1 血清PTP1B、E2水平對(duì)診斷青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的ROC曲線分析

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，脾虛肝郁型閉經(jīng)病人多因飲食失節(jié)、饑飽失常、勞倦過(guò)度、憂思不解或誤服汗下攻伐之藥，導(dǎo)致脾胃虛弱而引起?，F(xiàn)代青少年喜食甜食，飲食不節(jié)制，經(jīng)期前后常食冰凍食品，傷及脾胃運(yùn)化；或因缺乏鍛煉，致?tīng)I(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，形成痰濕等病理產(chǎn)物，阻滯經(jīng)血下注沖任胞宮，則見(jiàn)肥胖、月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)；加上青少年學(xué)業(yè)壓力較大，情緒上易郁、易怒，常致肝氣郁結(jié)，氣血運(yùn)行不暢，致使乳房胸脅脹滿、痤瘡。究其原因，與脾虛肝郁有關(guān)。

PTP1B 是胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸酶家族的代表，其在腦、心、肝、脾、肌肉和脂肪組織中均有表達(dá)，也是瘦素和胰島素信號(hào)通路的負(fù)調(diào)節(jié)劑，控制著細(xì)胞分化、運(yùn)動(dòng)、增殖和死亡的位置和時(shí)間，其調(diào)節(jié)錯(cuò)誤可導(dǎo)致肥胖、糖尿病等疾病。研究發(fā)現(xiàn)，PTP1B基因敲除小鼠在致肥胖飲食條件下也難以出現(xiàn)肥胖和糖尿病，其原因在于脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪顆粒顯著減少，同時(shí)小鼠基礎(chǔ)代謝率和總能量支出均增加。宋丹等研究發(fā)現(xiàn)，PTP1B 在繼發(fā)性閉經(jīng)合并肥胖病人血清中表達(dá)升高，在促進(jìn)疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。E2是一種性激素，主要來(lái)源于女性卵泡、黃體和胎盤(pán)，少量來(lái)自腎上腺和男性的睪丸，其靶器官為子宮、陰道、輸卵管和垂體。E2 測(cè)定對(duì)評(píng)價(jià)各種月經(jīng)異常來(lái)說(shuō)是非常有用的指標(biāo)，如女孩青春期提前或延遲、原發(fā)性或繼發(fā)性閉經(jīng)、卵巢早衰等，其增高多見(jiàn)于女性性早熟、妊娠、肝硬化等。應(yīng)用E2治療接受高脂飲食的肥胖小鼠，發(fā)現(xiàn)其可以減弱小鼠體重增加。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，閉經(jīng)未肥胖組、閉經(jīng)肥胖組PTP1B、E2 水平均升高；與閉經(jīng)未肥胖組相比，閉經(jīng)肥胖組PTP1B、E2 水平升高，三組血清PTP1B、E2 水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。猜測(cè)PTP1B、E2 水平可能與閉經(jīng)有關(guān)，同時(shí)二者水平升高導(dǎo)致胰島素信號(hào)通路抑制、性激素代謝紊亂等，繼而引發(fā)肥胖。

研究發(fā)現(xiàn)，PTP1B 會(huì)減弱高脂血癥狀態(tài)下下丘腦神經(jīng)肽Y/agouti 相關(guān)肽中的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，抑制PTP1B 則可以恢復(fù)飲食導(dǎo)致的胰島素反應(yīng)；E2的重要作用在于保持胰島素受體偶聯(lián)至下丘腦神經(jīng)肽Y/agouti 相關(guān)肽和促黑素皮質(zhì)醇神經(jīng)元中的通道激活上，從而防止肥胖女性胰島素抵抗的發(fā)展，二者與胰島素的傳導(dǎo)及其相關(guān)疾病密切相關(guān)。本研究進(jìn)行l(wèi)ogistic 回歸分析，結(jié)果顯示，TC、LDL、PTP1B、E2 水平均是青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示PTP1B、E2 可能通過(guò)某種機(jī)制參與青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖的致病機(jī)制，具體發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。ROC 曲線分析顯示，PTP1B、E2 水平均能較好地預(yù)測(cè)青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖，聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)效能更高。提示二者對(duì)診斷青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖具有一定價(jià)值。

綜上所述，在青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖病人體內(nèi)PTP1B、E2 水平升高，二者均是致病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)臨床診斷青少年脾虛肝郁型閉經(jīng)病人發(fā)生肥胖具有一定預(yù)測(cè)作用，但是敏感性和特異性不高，可能與納入病例數(shù)較少、病例間存在交叉現(xiàn)象有關(guān)。今后將進(jìn)一步補(bǔ)充相關(guān)人員的數(shù)據(jù)資料。本研究對(duì)象為正常女性和脾虛肝郁型閉經(jīng)病人（肥胖或未肥胖），未納入脾虛肝郁型肥胖（閉經(jīng)或未閉經(jīng)）病人，在以后研究脾虛肝郁型肥胖與閉經(jīng)的關(guān)系研究中將納入這部分病人。