嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)分子標(biāo)志物HLA-B*58：01、HLA-B*15：02和HLA-A*31：01在山東漢族人群中的分布

邵靜茹，潘英英，鄔彩紅，朱傳福，聶向民，劉艷

(1.山東省血液中心HLA研究室，山東濟(jì)南 250014；2.臨沂市中心醫(yī)院急診科，山東臨沂 276401)

嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)(serve adverse drug reactions，SADRs)具有遲發(fā)性、非劑量依賴性和不可預(yù)測(cè)性的特點(diǎn)，且與個(gè)體遺傳背景相關(guān)[1]。近年來(lái)，隨著藥物基因組學(xué)的迅速發(fā)展，多項(xiàng)研究表明，人類(lèi)白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因與SADRs的發(fā)生存在很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。Yu等[2]對(duì)HLA-B*58:01等位基因攜帶者在服用別嘌醇治療相關(guān)疾病時(shí)產(chǎn)生SADRs的文獻(xiàn)進(jìn)行薈萃(Meta)分析，證實(shí)篩查HLA-B*5801等位基因有助于患者預(yù)防別嘌呤醇誘導(dǎo)的SADRs的發(fā)生。Sargent等[3]報(bào)道了在開(kāi)具卡馬西平處方前，進(jìn)行HLA-B*15:02等位基因的篩查具有重要意義。McCormack等[4]報(bào)道了HLA-A*31:01等位基因攜帶者在服用了卡馬西平后產(chǎn)生了SADRs。HLA-B*15:02、HLA-B*58:01和HLA-A*31:01與SADRs相關(guān)性的研究成果在中國(guó)人群也陸續(xù)有報(bào)道[5-6]。本研究根據(jù)已有對(duì)中國(guó)人群的研究報(bào)道[5-6]，并結(jié)合HLADR數(shù)據(jù)庫(kù)(http://pgx.fudan.edu.cn/hladr/?action=list)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。此外，為有效指導(dǎo)臨床用藥，明確臨床用藥前進(jìn)行基因篩查的必要性，本研究調(diào)查了HLA-B*15:02，HLA-B*58:01和HLA-A*31:01 3種等位基因在山東漢族人群中的分布，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1資料檢索與數(shù)據(jù)提取 收集2007年1月至2019年12月山東省骨髓庫(kù)入庫(kù)，具有HLA-B位點(diǎn)高分辨數(shù)據(jù)的漢族樣本23 213例，其中男 13 928例，女9 285例，具有HLA-A位點(diǎn)高分辨數(shù)據(jù)的漢族樣本24 121例，其中男14 472例，女9 649例。志愿者入庫(kù)年齡為18～45歲，符合志愿者捐獻(xiàn)健康征詢要求，山東籍漢族且無(wú)親緣關(guān)系。志愿者均已簽署《中國(guó)造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫(kù)志愿捐獻(xiàn)者同意書(shū)》。采集各研究對(duì)象的靜脈血5 mL于EDTA抗凝管中，置于-20 ℃保存。HLA-A、HLA-B基因分型采用PCR-序列特異的寡核苷酸探針雜交(sequence specific oligo-nucleotide probe，SSOP)法，使用FLEXMAP-3D多功能流式點(diǎn)陣儀進(jìn)行高分辨等位基因分型，結(jié)果由HLA Fusion軟件(美國(guó)One Lambda公司)根據(jù)陽(yáng)性反應(yīng)探針自動(dòng)判讀結(jié)果。HLA-A、HLA-B等位基因數(shù)據(jù)以*后4位為準(zhǔn)。按照中華骨髓庫(kù)志愿者信息錄入的籍貫對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行分組，得到濟(jì)南、菏澤、淄博、德州、濰坊、濟(jì)寧、泰安、臨沂、東營(yíng)、濱州、棗莊、日照、萊蕪、聊城等14個(gè)地市。

1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Micosoft Excel 2010軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，HLA-B*58:01、HLA-B*15:02、HLA-A*31:01等位基因攜帶率=攜帶標(biāo)本數(shù)/標(biāo)本總數(shù)×100%；HLA-B*58:01、HLA-B*15:02、HLA-A*31:01等位基因頻率=等位基因數(shù)/(2×標(biāo)本總數(shù))×100%，分析方法為一般頻數(shù)分布。

2 結(jié)果

2.1山東各地市人群HLA-B*58:01、HLA-B*15:02、HLA-A*31:01等位攜帶率及等位基因頻率 山東省內(nèi)納入研究的漢族人群中，具有HLA-B位點(diǎn)高分辨的數(shù)據(jù)的樣本為23 213例。攜帶HLA-B*58:01、HLA-B*15:02等位基因的樣本數(shù)分別為2 009例和703例，其等位基因攜帶率分別為8.65%、3.03%；等位基因頻率分別為4.33%和1.53%。HLA-B*58:01、HLA-B*15:02等位基因攜帶率最高的2個(gè)城市分別為日照(12.7%)和聊城(3.96%)，等位攜帶率最低的2個(gè)城市分別為德州(6.76%)和濱州(2.12%)。見(jiàn)表1。

具有HLA-A位點(diǎn)高分辨數(shù)據(jù)的樣本數(shù)為24 121例，攜帶HLA-A*31:01等位基因的樣本數(shù)為1 760例，其等位基因攜帶率為7.3%；等位基因頻率為3.65%。HLA-A*31:01等位基因攜帶率最高的城市為棗莊(9.94%)，等位攜帶率最低的城市為臨沂(6.25%)。見(jiàn)表2。

表2 HLA-A*31:01的等位基因攜帶率和等位基因頻率

3 討論

近年來(lái)，高尿酸血癥和精神類(lèi)疾病的患病率逐年升高，已成為威脅人民健康的重大慢性非感染性疾病。別嘌醇和卡馬西平是治療高尿酸血癥、痛風(fēng)以及精神類(lèi)疾病的一線藥物，對(duì)于大部分患者均有較好的療效，但對(duì)一些特定HLA基因型患者卻能誘發(fā)藥物不良反應(yīng)。HLA-B*58:01、HLA-B*15:02和HLA-A*31:01引發(fā)嚴(yán)重藥物不良的研究在國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)已建議對(duì)亞洲人出具卡馬西平處方前進(jìn)行HLA-B*15:02等位基因鑒定[7]；中國(guó)臺(tái)灣[8]、日本[4]、韓國(guó)[9]均已開(kāi)展了在使用卡馬西平和別嘌醇前進(jìn)行HLA-B*58:01、HLA-B*15:02和HLA-A*31:01的基因篩查。馬驕等[10]通過(guò)對(duì)中國(guó)大陸人群HLA-B*58:01等位基因頻率的調(diào)查，提出應(yīng)重視對(duì)我國(guó)華南地區(qū)人群患者進(jìn)行HLA-B*58:01的篩查。

納入本研究的山東漢族人群中，日照、東營(yíng)和臨沂地區(qū)HLA-B*58:01的等位基因攜帶率分別為12.7%、10.13%和10.33%。劉曉華等[11]報(bào)道山東半島地區(qū)(濰坊、日照、青島、威海和煙臺(tái))人群HLA-B*58:01的攜帶率約為10.2%，接近華南地區(qū)的攜帶率(10.69%)。除德州(6.8%)之外，其余地區(qū)攜帶率均大于8%，接近全省8.65%的攜帶率。Allele*Frequencies數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.allelefrequencies.net/hla.asp)分析顯示，HLA-B*58:01在中國(guó)臺(tái)灣和韓國(guó)人群中的攜帶率分別約為20%和13%。由此看出，為了避免嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)發(fā)生，在山東省內(nèi)對(duì)患者在使用別嘌醇之前，進(jìn)行HLA-B*58:01基因篩查是有必要的。HLA-B*15:02等位基因攜帶率最高的3個(gè)地區(qū)分別為聊城(3.96%)、濟(jì)南(3.84%)和淄博(3.77%)，高于全省3.03%的攜帶率，但明顯低于全國(guó)7%的攜帶率。Allele*Frequencies網(wǎng)站檢索亞洲人群HLA-B*15:02基因攜帶率的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，新加坡華人(約11%)、中國(guó)香港(約20%)、泰國(guó)(約16%)、越南(約26%)、馬來(lái)西亞(約12%)人群的攜帶率較高。與之相比，山東漢族人群的HLA-B*15:02等位基因攜帶率相對(duì)于其他亞洲人群以及中國(guó)南方地區(qū)人群較低，但為減少嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)的發(fā)生，有條件的地區(qū)可以嘗試性開(kāi)展用藥前基因篩查，為以后精準(zhǔn)用藥提供更為準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。HLA-A*31:01等位基因攜帶率最高的3個(gè)地區(qū)為棗莊(9.94%)、濱州(8.15%)和濟(jì)南(7.98%)，高于全省7.3%和全國(guó)6.4%的攜帶率。Allele*Frequencies網(wǎng)站檢索HLA-A*31:01等位基因攜帶率的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，日本人群HLA-A*31:01等位基因攜帶率約為16%，其中北海道地區(qū)的攜帶率高達(dá)約24%。已有研究表明，HLA-A*31:01基因篩查具有成本效益，并傾向于在使用卡馬西平治療之前對(duì)所有患者進(jìn)行HLA-A*31:01的基因篩查[12]。因此，本研究認(rèn)為在山東省內(nèi)有必要在用藥前開(kāi)展針對(duì)HLA-A*31:01的等位基因篩查，以減少嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)的發(fā)生。

本研究調(diào)查了山東14個(gè)地市漢族人群HLA-B*58:01、HLA-B*15:02和HLA-A*31:01等位基因攜帶率和等位基因頻率的分布，揭示了3種等位基因的分布特點(diǎn)，為山東全省及各個(gè)地市開(kāi)展用藥前進(jìn)行基因篩查提供了數(shù)據(jù)支持，具有一定的臨床意義。但因數(shù)據(jù)庫(kù)檢索權(quán)限的限制，本研究并未包括山東省全部地區(qū)的數(shù)據(jù)，如果能夠擴(kuò)大樣本數(shù)量且覆蓋山東省全部地市，將為臨床精準(zhǔn)用藥提供更為科學(xué)準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。