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    miR-34a靶向MMP2對(duì)TNF-α誘導(dǎo)人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo遷移及侵襲的影響

    2021-10-27 06:17:36溫彥靜彭青王靜娜李曼常美英
    天津醫(yī)藥 2021年10期
    關(guān)鍵詞:滋養(yǎng)層遷移率絨毛

    溫彥靜,彭青△,王靜娜,李曼,常美英

    子癇前期(preeclampsia,PE)為一種妊娠期特發(fā)性疾病,是造成孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一[1]。滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵襲能力下降引起子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙是PE 發(fā)病的原因之一[2]?;|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一類鋅依賴性蛋白酶,為血管和子宮重塑的重要調(diào)節(jié)劑,血管MMP2的減少可能導(dǎo)致血管舒張減弱,收縮增強(qiáng),引起妊娠高血壓和PE[3]。微小RNA(miRNA)的異常表達(dá)與人類多種疾病的發(fā)生有關(guān),人類胎盤組織中miRNA的異常表達(dá)可能導(dǎo)致胎盤功能障礙或PE等疾?。?]。miR-34a 能夠調(diào)控多種基因的表達(dá),與多種癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移有關(guān)[5-7],是公認(rèn)的抑癌基因。Xue等[8]研究表明,PE患者血清miR-34a-5p表達(dá)水平顯著高于健康孕婦。miR-34a 能夠通過(guò)靶向MMP2 抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞LN229 及U251 的遷移和侵襲[9]。人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo來(lái)源于早孕期滋養(yǎng)層細(xì)胞,常被用于滋養(yǎng)層細(xì)胞的生物學(xué)活性研究。本研究通過(guò)腫瘤壞死因子(TNF)-α刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo,體外模擬PE的炎性環(huán)境,探討miR-34a能否通過(guò)與MMP2結(jié)合,影響滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移,從而參與PE的發(fā)展。

    1 材料與方法

    1.1 材料 人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo(CN-10079)購(gòu)自上海弘順生物科技有限公司。TNF-α(SRP3177)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;胎牛血清(G20228)、DMEM培養(yǎng)基(G17115)、胰蛋白酶(G10231)均購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司;Lipofectamine 3000 試劑盒(L3000-050)購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司;RNAiso Plus試劑盒(RK-0057)、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(RK-0311)、熒光定量PCR試劑盒(RA-1075)購(gòu)自日本TAKARA公司;CCK-8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(P5119)、蛋白提取試劑盒(SF60013)、BCA 蛋白定量試劑盒(SK10078)、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗(A0208)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(YT128)購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司;兔抗人MMP2單克隆抗體(40994)、兔抗人β-actin單克隆抗體(4970)購(gòu)自美國(guó) Cell Signaling Technology 公司;miR-34a、MMP2、U6、GAPDH 引物以及miR-34a mimics、miR-34a mimics陰性對(duì)照、miR-34a inhibitor、miR-34a inhibitor陰性對(duì)照由生工生物工程(上海)股份有限公司合成;MCO-5AC 型CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自日本三洋公司;AE2000型倒置顯微鏡購(gòu)自北京汗盟紫星儀器儀表有限公司;QuantStudio 3型實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)儀購(gòu)自美國(guó)ABI 公司;ELx808 型酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳市瑞士寶特貿(mào)易有限公司;ZF-388 型蛋白凝膠成像儀購(gòu)自上海嘉鵬科技有限公司。

    1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 對(duì)人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 進(jìn)行常規(guī)復(fù)蘇,轉(zhuǎn)移至含10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基中,在37 ℃、5%CO2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2~3 d更換1次培養(yǎng)液,細(xì)胞生長(zhǎng)良好且達(dá)到對(duì)數(shù)期時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.2.1 TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 取對(duì)數(shù)期的HTR-8/SVneo 細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,接種細(xì)胞至6孔板中,調(diào)整細(xì)胞數(shù)目為1×105個(gè)/孔,加入不含胎牛血清的DMEM 完全培養(yǎng)基,于37 ℃、5%CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí),分別設(shè)置TNF-α誘導(dǎo)組(將培養(yǎng)液換為含0.5 μg/L TNF-α的DMEM完全培養(yǎng)基)和對(duì)照組(僅更換正常新鮮培養(yǎng)液)[10]。

    1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組 取1.2.1中TNF-α刺激的人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 接種至6孔板中,調(diào)整細(xì)胞數(shù)目為6×105個(gè)/孔。細(xì)胞融合度達(dá)到60%時(shí),棄去6孔板中培養(yǎng)基,加入含0.5 μg/L TNF-α的新鮮培養(yǎng)基,利用Lipofectamine 3000進(jìn)行轉(zhuǎn)染,操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。將細(xì)胞分為對(duì)照組(細(xì)胞不做任何處理,正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng))、miR-34a mimics組(轉(zhuǎn)染miR-34a mimics)、NC 組(轉(zhuǎn)染miR-34a mimics 陰性對(duì)照)、miR-34a inhibitor 組(轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor)、iNC 組(轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor陰性對(duì)照)和TNF-α誘導(dǎo)組(未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞)。轉(zhuǎn)染48 h后,倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。

    1.2.3 qPCR 檢測(cè)各組細(xì)胞 miR-34a、MMP2 mRNA 的表達(dá)水平 按照RNAiso Plus試劑盒說(shuō)明書提取1.2.2中各組細(xì)胞總RNA,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將提取的RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA,之后進(jìn)行qPCR 反應(yīng),反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃變性45 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸30 s,共40 個(gè)循環(huán)。miR-34a 以 U6 作為內(nèi)參基因,MMP2 以 GAPDH 作為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt方法計(jì)算各組細(xì)胞中miR-34a、MMP2 mRNA相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

    Tab.1 Primer sequences表1 引物序列

    1.2.4 CCK-8 法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況 取1.2.2 中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,調(diào)整細(xì)胞密度為5×105個(gè)/mL,每孔 100 μL 加至 96 孔板中,每組設(shè)置 6 個(gè)復(fù)孔,于 37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,加入10 μL CCK-8 試劑,37 ℃避光培養(yǎng)2 h,棄上清,酶標(biāo)儀450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔光密度(OD)值,細(xì)胞增殖抑制率=[(對(duì)照組OD 值-實(shí)驗(yàn)組OD 值)/對(duì)照組OD值]×100%。

    1.2.5 Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力 取1.2.2中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,調(diào)整細(xì)胞密度為5×105個(gè)/mL。吸取 100 μL 細(xì)胞懸液加至鋪有 Matrigel 膠的Transwell小室上室,Transwell下室加入600 μL含胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基,于37 ℃培養(yǎng)24 h,倒掉上室培養(yǎng)液,用棉簽輕輕擦去Matrigel膠及未遷移細(xì)胞,無(wú)水甲醇固定30 min,0.1%結(jié)晶紫溶液染色20 min,顯微鏡下隨機(jī)讀取5個(gè)視野對(duì)染色細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算平均值。

    1.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力 取1.2.2 中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種至6孔板中,37 ℃、5%CO2,飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞長(zhǎng)滿視野時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。黑色馬克筆于6 孔板板后劃線,利用滅菌的20 μL 槍頭在孔板上垂直于劃線進(jìn)行劃痕,劃好后沖洗殘余懸浮液??變?nèi)加入不含胎牛血清的DEME 培養(yǎng)基,37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于0、24 h 后顯微鏡下取點(diǎn),觀察并拍照。以0 h 時(shí)初始距離(D0h)為對(duì)比,測(cè)量24 h 時(shí)距離(D24h),計(jì)算細(xì)胞遷移率。遷移率(%)=(D0h-D24h)/D0h×100%。

    1.2.7 蛋白免疫印跡法檢測(cè)MMP2 蛋白表達(dá)水平 取1.2.2中各組細(xì)胞,調(diào)整密度為5×105個(gè)/mL,每孔100 μL加至96孔板中,培養(yǎng) 24 h 后,棄上清,PBS 洗滌 2 次,重懸細(xì)胞,利用蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞總蛋白,BCA試劑盒測(cè)定提取總蛋白濃度,蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE,電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上,5%脫脂奶粉遮光封閉2 h。分別加入兔抗人MMP2、β-actin 一抗稀釋液(均為1∶1 000 稀釋),4 ℃孵育過(guò)夜,TBST 洗膜3 次,加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗(1∶2 000),室溫孵育1 h,TBST 洗膜3次,蛋白凝膠成像儀分析MMP2蛋白表達(dá)水平。

    1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析 通過(guò)Starbase(http://starbase.sysu.edu.cn/index.php)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)人MMP2 基因3′UTR含有與miR-34a的結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)含結(jié)合位點(diǎn)的MMP2區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增,并插入到pcDNA 載體上,構(gòu)建pcDNAMMP2-3′UTR-WT 質(zhì)粒;以此質(zhì)粒對(duì)結(jié)合片段進(jìn)行定點(diǎn)(Del:55539387-55539393)突 變 ,構(gòu) 建 pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 質(zhì)粒。pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 質(zhì)粒、pcDNAMMP2-3′UTR-Del 質(zhì)粒分別與miR-34a NC、miR-34a mimics共轉(zhuǎn)染到人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 中,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù),轉(zhuǎn)染6 h 后,更換培養(yǎng)基。質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染48 h 后,棄去培養(yǎng)基,PBS 洗滌細(xì)胞;每孔加入50 μL 1×PLB 裂解緩沖液,震蕩,使細(xì)胞全部裂解;在不透光96孔酶標(biāo)板中每孔加上述上清液10 μL,加入100 μL 雙熒光素酶反應(yīng)試劑Ⅱ,檢測(cè)螢火蟲熒光素酶反應(yīng)強(qiáng)度,測(cè)定結(jié)束后加100 μL Stop&Glo,檢測(cè)內(nèi)參海腎熒光素酶反應(yīng)強(qiáng)度。熒光素酶相對(duì)活性=螢火蟲熒光素酶活性值/海腎熒光素酶活性值。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA的表達(dá) 與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞miR-34a表達(dá)升高,MMP2 mRNA 表達(dá)降低(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞miR-34a表達(dá)升高,MMP2 mRNA表達(dá)降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞miR-34a表達(dá)降低,MMP2 mRNA表達(dá)升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    Tab.2 Comparison of expression levels of miR-34a and MMP2 mRNA between the six groups表2 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA表達(dá)水平比較(n=3,)

    Tab.2 Comparison of expression levels of miR-34a and MMP2 mRNA between the six groups表2 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA表達(dá)水平比較(n=3,)

    **P<0.01;a與對(duì)照組比較,b與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,c與NC 組比較,d與iNC組比較,P<0.05

    組別對(duì)照組TNF-α誘導(dǎo)組NC組miR-34a mimics組iNC組miR-34a inhibitor組F miR-34a 1.01±0.03 1.58±0.06a 1.55±0.05 3.93±0.04bc 1.52±0.03 0.44±0.04bd 2 290.913**MMP2 mRNA 0.99±0.03 0.54±0.05a 0.53±0.07 0.32±0.04bc 0.55±0.06 0.87±0.05bd 67.943**

    2.2 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 增殖的影響 對(duì)照組、TNF-α 誘導(dǎo)組、NC 組、miR-34a mimics 組、iNC 組、miR-34a inhibitor 組 細(xì) 胞 增 殖 抑 制 率 分 別 為 0、(54.37±2.06)% 、(52.75±2.19)% 、(78.93±2.67)% 、(55.29±1.86)% 和(19.16±2.18)%(n=6,F(xiàn)=1 208.115,P<0.01)。與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞增殖抑制率升高(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC 組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞增殖抑制率升高(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞增殖抑制率降低(P<0.05)。

    2.3 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 侵襲和遷移的影響 與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率降低(P<0.05);與 TNF-α 誘導(dǎo)組和 NC 組比較,miR-34a mimics組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor 組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率升高(P<0.05),見(jiàn)表3,圖1、2。

    Tab.3 Comparison of cell invasion number and migration rate between the six groups表3 各組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率的比較 (n=3,)

    Tab.3 Comparison of cell invasion number and migration rate between the six groups表3 各組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率的比較 (n=3,)

    **P<0.01;a與對(duì)照組比較,b與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,c與NC 組比較,d與iNC組比較,P<0.05

    遷移率(%)26.73±2.51 15.46±3.24a 14.59±3.16 6.25±2.18bc 14.34±2.29 23.48±3.57bd 19.413**組別對(duì)照組TNF-α誘導(dǎo)組NC組miR-34a mimics組iNC組miR-34a inhibitor組F細(xì)胞侵襲數(shù)目(個(gè))248.32±12.37 123.37±11.26a 126.58±12.35 84.61±11.54bc 117.38±13.65 178.45±14.22bd 64.118**

    Fig.1 Effects of miR-34a on cell invasion(crystal violet dyeing,×400)圖1 miR-34a對(duì)細(xì)胞侵襲的影響(結(jié)晶紫染色,×400)

    2.4 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 中MMP2 蛋白表達(dá)的影響 對(duì)照組、TNF-α 誘導(dǎo)組、NC 組、miR-34a mimics 組、iNC組、miR-34a inhibitor 組MMP2 蛋白表達(dá)分別為1.29±0.13、0.83±0.11、0.85±0.13、0.44±0.14、0.81±0.09、1.16±0.15(n=3,F(xiàn)=16.587,P<0.01);與對(duì)照組比較,TNF-α 誘導(dǎo)組細(xì)胞MMP2 蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC 組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞MMP2 蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞MMP2蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

    Fig.3 Effects of miR-34a on MMP2 protein expression in each group圖3 miR-34a對(duì)各組細(xì)胞中MMP2蛋白表達(dá)的影響

    2.5 miR-34a 對(duì)MMP2 基因的靶向調(diào)節(jié) Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)結(jié)果表明,MMP2 基因 3′UTR 區(qū)含有與miR-34a 結(jié)合位點(diǎn),位于miR-34a 3′UTR 55539387-55539393 區(qū) 域 ,見(jiàn) 圖 4。 miR-34a NC-pcDNAMMP2-3′UTR-WT 組 、miR-34a mimics-pcDNAMMP2-3′UTR-WT 組、miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 組 、miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 組熒光素酶相對(duì)活性分別為2.35±0.02、1.19±0.02、2.32±0.04、2.29±0.05(n=3,F(xiàn)=745.474,P<0.01);與 miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTRWT 組 比 較 ,miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 組熒光素酶相對(duì)活性顯著降低(P<0.05)。

    Fig.4 Starbase database predicted that miR-34a had binding sites with MMP2圖4 Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-34a與MMP2具有結(jié)合位點(diǎn)

    3 討論

    PE是圍產(chǎn)期導(dǎo)致母嬰死亡的主要疾病之一[11],終止妊娠是唯一有效的治療方法。目前PE 的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙和滋養(yǎng)層細(xì)胞分化缺陷被認(rèn)為是引起PE 的關(guān)鍵因素[12]。滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移能力下降是引起螺旋動(dòng)脈血管重鑄障礙的主要原因。因此,研究與滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移有關(guān)的因素,可能有助于進(jìn)一步解析PE的發(fā)生機(jī)制。高水平TNF-α與妊娠高血壓及PE、妊娠糖尿病等多種妊娠疾病有關(guān)[13]。體外實(shí)驗(yàn)表明,TNF-α刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo后能夠抑制其遷移和侵襲[14]。本研究利用TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 體外模擬炎癥環(huán)境,發(fā)現(xiàn)TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞后miR-34a表達(dá)水平、細(xì)胞增殖抑制率均顯著高于對(duì)照組,MMP2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞遷移率和侵襲數(shù)目均顯著低于對(duì)照組,說(shuō)明miR-34a、MMP2 可能與細(xì)胞的侵襲和遷移有關(guān)。

    miR-34a 是一個(gè)公認(rèn)的抑癌基因。研究表明miR-34a過(guò)表達(dá)能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、膀胱癌細(xì)胞HT-1197、HT-1376的增殖、侵襲和遷移[5,15]。滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜的穿透性與侵襲性腫瘤相似,Liu 等[16]研究表明 PE 患者胎盤組織和細(xì)胞中miR-34a 表達(dá)水平顯著高于健康孕婦,且miR-34a通過(guò)Notch信號(hào)通路抑制PE患者胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲。本研究結(jié)果表明,miR-34a 顯著抑制TNF-α刺激導(dǎo)致的人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和遷移,而抑制miR-34a表達(dá),則情況相反,說(shuō)明miR-34a過(guò)表達(dá)可抑制胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和遷移。

    滋養(yǎng)層細(xì)胞是胎盤組織的重要細(xì)胞,其能夠通過(guò)侵襲和遷移穿透母胎界面,促使胎盤形成,維持正常胎盤功能,胎盤重塑和滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲螺旋動(dòng)脈可為胎兒提供充足的血液和營(yíng)養(yǎng)[17-18]。MMP2 在侵襲性絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞中大量表達(dá),與滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲性高度相關(guān),能夠在妊娠期間發(fā)揮子宮內(nèi)膜組織重塑的作用[3]。Jin等[19]研究表明抑制MMP2表達(dá)能夠抑制人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo的侵襲和遷移,參與PE 的發(fā)生。本研究結(jié)果表明,與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,miR-34a 過(guò)表達(dá)能夠降低細(xì)胞中MMP2 mRNA 及蛋白的表達(dá),而抑制miR-34a 的表達(dá)能夠增加MMP2 mRNA及蛋白的表達(dá)。生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果表明MMP2的3′UTR序列含有與miR-34a結(jié)合的位點(diǎn),說(shuō)明miR-34a與MMP2之間可能存在靶向關(guān)系。Yang 等[20]研究表明 miR-34a 通過(guò)靶向抑制MMP2的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的侵襲和遷移。本研究雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 組熒光素酶相對(duì)活性顯著低于miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTRWT 組,提示 miR-34a 抑制 MMP2 的表達(dá)。miR-34a可能通過(guò)靶向抑制MMP2 的表達(dá),降低滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲性,導(dǎo)致子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙,進(jìn)而參與妊娠高血壓及PE等疾病的發(fā)生。

    綜上所述,miR-34a 可能通過(guò)靶向抑制MMP2的表達(dá)抑制人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo的侵襲和遷移,進(jìn)而導(dǎo)致PE的發(fā)生。本研究?jī)H從體外細(xì)胞模擬實(shí)驗(yàn)分析了miR-34a 及MMP2 對(duì)PE 的影響,還需結(jié)合臨床研究進(jìn)一步證明miR-34a 靶向調(diào)節(jié)MMP2在PE發(fā)病中的機(jī)制。

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