• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    miR-34a靶向MMP2對(duì)TNF-α誘導(dǎo)人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo遷移及侵襲的影響

    2021-10-27 06:17:36溫彥靜彭青王靜娜李曼常美英
    天津醫(yī)藥 2021年10期
    關(guān)鍵詞:滋養(yǎng)層遷移率絨毛

    溫彥靜,彭青△,王靜娜,李曼,常美英

    子癇前期(preeclampsia,PE)為一種妊娠期特發(fā)性疾病,是造成孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一[1]。滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移和侵襲能力下降引起子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙是PE 發(fā)病的原因之一[2]?;|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一類鋅依賴性蛋白酶,為血管和子宮重塑的重要調(diào)節(jié)劑,血管MMP2的減少可能導(dǎo)致血管舒張減弱,收縮增強(qiáng),引起妊娠高血壓和PE[3]。微小RNA(miRNA)的異常表達(dá)與人類多種疾病的發(fā)生有關(guān),人類胎盤組織中miRNA的異常表達(dá)可能導(dǎo)致胎盤功能障礙或PE等疾?。?]。miR-34a 能夠調(diào)控多種基因的表達(dá),與多種癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移有關(guān)[5-7],是公認(rèn)的抑癌基因。Xue等[8]研究表明,PE患者血清miR-34a-5p表達(dá)水平顯著高于健康孕婦。miR-34a 能夠通過(guò)靶向MMP2 抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞LN229 及U251 的遷移和侵襲[9]。人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo來(lái)源于早孕期滋養(yǎng)層細(xì)胞,常被用于滋養(yǎng)層細(xì)胞的生物學(xué)活性研究。本研究通過(guò)腫瘤壞死因子(TNF)-α刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo,體外模擬PE的炎性環(huán)境,探討miR-34a能否通過(guò)與MMP2結(jié)合,影響滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移,從而參與PE的發(fā)展。

    1 材料與方法

    1.1 材料 人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo(CN-10079)購(gòu)自上海弘順生物科技有限公司。TNF-α(SRP3177)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;胎牛血清(G20228)、DMEM培養(yǎng)基(G17115)、胰蛋白酶(G10231)均購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司;Lipofectamine 3000 試劑盒(L3000-050)購(gòu)自美國(guó) Invitrogen 公司;RNAiso Plus試劑盒(RK-0057)、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(RK-0311)、熒光定量PCR試劑盒(RA-1075)購(gòu)自日本TAKARA公司;CCK-8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(P5119)、蛋白提取試劑盒(SF60013)、BCA 蛋白定量試劑盒(SK10078)、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗(A0208)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(YT128)購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司;兔抗人MMP2單克隆抗體(40994)、兔抗人β-actin單克隆抗體(4970)購(gòu)自美國(guó) Cell Signaling Technology 公司;miR-34a、MMP2、U6、GAPDH 引物以及miR-34a mimics、miR-34a mimics陰性對(duì)照、miR-34a inhibitor、miR-34a inhibitor陰性對(duì)照由生工生物工程(上海)股份有限公司合成;MCO-5AC 型CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自日本三洋公司;AE2000型倒置顯微鏡購(gòu)自北京汗盟紫星儀器儀表有限公司;QuantStudio 3型實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)儀購(gòu)自美國(guó)ABI 公司;ELx808 型酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳市瑞士寶特貿(mào)易有限公司;ZF-388 型蛋白凝膠成像儀購(gòu)自上海嘉鵬科技有限公司。

    1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 對(duì)人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 進(jìn)行常規(guī)復(fù)蘇,轉(zhuǎn)移至含10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基中,在37 ℃、5%CO2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2~3 d更換1次培養(yǎng)液,細(xì)胞生長(zhǎng)良好且達(dá)到對(duì)數(shù)期時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.2.1 TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 取對(duì)數(shù)期的HTR-8/SVneo 細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,接種細(xì)胞至6孔板中,調(diào)整細(xì)胞數(shù)目為1×105個(gè)/孔,加入不含胎牛血清的DMEM 完全培養(yǎng)基,于37 ℃、5%CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí),分別設(shè)置TNF-α誘導(dǎo)組(將培養(yǎng)液換為含0.5 μg/L TNF-α的DMEM完全培養(yǎng)基)和對(duì)照組(僅更換正常新鮮培養(yǎng)液)[10]。

    1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組 取1.2.1中TNF-α刺激的人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 接種至6孔板中,調(diào)整細(xì)胞數(shù)目為6×105個(gè)/孔。細(xì)胞融合度達(dá)到60%時(shí),棄去6孔板中培養(yǎng)基,加入含0.5 μg/L TNF-α的新鮮培養(yǎng)基,利用Lipofectamine 3000進(jìn)行轉(zhuǎn)染,操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。將細(xì)胞分為對(duì)照組(細(xì)胞不做任何處理,正常培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng))、miR-34a mimics組(轉(zhuǎn)染miR-34a mimics)、NC 組(轉(zhuǎn)染miR-34a mimics 陰性對(duì)照)、miR-34a inhibitor 組(轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor)、iNC 組(轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor陰性對(duì)照)和TNF-α誘導(dǎo)組(未經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞)。轉(zhuǎn)染48 h后,倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。

    1.2.3 qPCR 檢測(cè)各組細(xì)胞 miR-34a、MMP2 mRNA 的表達(dá)水平 按照RNAiso Plus試劑盒說(shuō)明書提取1.2.2中各組細(xì)胞總RNA,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將提取的RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA,之后進(jìn)行qPCR 反應(yīng),反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃變性45 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸30 s,共40 個(gè)循環(huán)。miR-34a 以 U6 作為內(nèi)參基因,MMP2 以 GAPDH 作為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt方法計(jì)算各組細(xì)胞中miR-34a、MMP2 mRNA相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

    Tab.1 Primer sequences表1 引物序列

    1.2.4 CCK-8 法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況 取1.2.2 中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,調(diào)整細(xì)胞密度為5×105個(gè)/mL,每孔 100 μL 加至 96 孔板中,每組設(shè)置 6 個(gè)復(fù)孔,于 37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,加入10 μL CCK-8 試劑,37 ℃避光培養(yǎng)2 h,棄上清,酶標(biāo)儀450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔光密度(OD)值,細(xì)胞增殖抑制率=[(對(duì)照組OD 值-實(shí)驗(yàn)組OD 值)/對(duì)照組OD值]×100%。

    1.2.5 Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力 取1.2.2中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞,0.25%胰蛋白酶消化,調(diào)整細(xì)胞密度為5×105個(gè)/mL。吸取 100 μL 細(xì)胞懸液加至鋪有 Matrigel 膠的Transwell小室上室,Transwell下室加入600 μL含胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基,于37 ℃培養(yǎng)24 h,倒掉上室培養(yǎng)液,用棉簽輕輕擦去Matrigel膠及未遷移細(xì)胞,無(wú)水甲醇固定30 min,0.1%結(jié)晶紫溶液染色20 min,顯微鏡下隨機(jī)讀取5個(gè)視野對(duì)染色細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算平均值。

    1.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力 取1.2.2 中各組對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種至6孔板中,37 ℃、5%CO2,飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞長(zhǎng)滿視野時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。黑色馬克筆于6 孔板板后劃線,利用滅菌的20 μL 槍頭在孔板上垂直于劃線進(jìn)行劃痕,劃好后沖洗殘余懸浮液??變?nèi)加入不含胎牛血清的DEME 培養(yǎng)基,37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于0、24 h 后顯微鏡下取點(diǎn),觀察并拍照。以0 h 時(shí)初始距離(D0h)為對(duì)比,測(cè)量24 h 時(shí)距離(D24h),計(jì)算細(xì)胞遷移率。遷移率(%)=(D0h-D24h)/D0h×100%。

    1.2.7 蛋白免疫印跡法檢測(cè)MMP2 蛋白表達(dá)水平 取1.2.2中各組細(xì)胞,調(diào)整密度為5×105個(gè)/mL,每孔100 μL加至96孔板中,培養(yǎng) 24 h 后,棄上清,PBS 洗滌 2 次,重懸細(xì)胞,利用蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞總蛋白,BCA試劑盒測(cè)定提取總蛋白濃度,蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE,電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上,5%脫脂奶粉遮光封閉2 h。分別加入兔抗人MMP2、β-actin 一抗稀釋液(均為1∶1 000 稀釋),4 ℃孵育過(guò)夜,TBST 洗膜3 次,加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗(1∶2 000),室溫孵育1 h,TBST 洗膜3次,蛋白凝膠成像儀分析MMP2蛋白表達(dá)水平。

    1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析 通過(guò)Starbase(http://starbase.sysu.edu.cn/index.php)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)人MMP2 基因3′UTR含有與miR-34a的結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)含結(jié)合位點(diǎn)的MMP2區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增,并插入到pcDNA 載體上,構(gòu)建pcDNAMMP2-3′UTR-WT 質(zhì)粒;以此質(zhì)粒對(duì)結(jié)合片段進(jìn)行定點(diǎn)(Del:55539387-55539393)突 變 ,構(gòu) 建 pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 質(zhì)粒。pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 質(zhì)粒、pcDNAMMP2-3′UTR-Del 質(zhì)粒分別與miR-34a NC、miR-34a mimics共轉(zhuǎn)染到人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 中,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù),轉(zhuǎn)染6 h 后,更換培養(yǎng)基。質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染48 h 后,棄去培養(yǎng)基,PBS 洗滌細(xì)胞;每孔加入50 μL 1×PLB 裂解緩沖液,震蕩,使細(xì)胞全部裂解;在不透光96孔酶標(biāo)板中每孔加上述上清液10 μL,加入100 μL 雙熒光素酶反應(yīng)試劑Ⅱ,檢測(cè)螢火蟲熒光素酶反應(yīng)強(qiáng)度,測(cè)定結(jié)束后加100 μL Stop&Glo,檢測(cè)內(nèi)參海腎熒光素酶反應(yīng)強(qiáng)度。熒光素酶相對(duì)活性=螢火蟲熒光素酶活性值/海腎熒光素酶活性值。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA的表達(dá) 與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞miR-34a表達(dá)升高,MMP2 mRNA 表達(dá)降低(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞miR-34a表達(dá)升高,MMP2 mRNA表達(dá)降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞miR-34a表達(dá)降低,MMP2 mRNA表達(dá)升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    Tab.2 Comparison of expression levels of miR-34a and MMP2 mRNA between the six groups表2 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA表達(dá)水平比較(n=3,)

    Tab.2 Comparison of expression levels of miR-34a and MMP2 mRNA between the six groups表2 各組細(xì)胞miR-34a及MMP2 mRNA表達(dá)水平比較(n=3,)

    **P<0.01;a與對(duì)照組比較,b與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,c與NC 組比較,d與iNC組比較,P<0.05

    組別對(duì)照組TNF-α誘導(dǎo)組NC組miR-34a mimics組iNC組miR-34a inhibitor組F miR-34a 1.01±0.03 1.58±0.06a 1.55±0.05 3.93±0.04bc 1.52±0.03 0.44±0.04bd 2 290.913**MMP2 mRNA 0.99±0.03 0.54±0.05a 0.53±0.07 0.32±0.04bc 0.55±0.06 0.87±0.05bd 67.943**

    2.2 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 增殖的影響 對(duì)照組、TNF-α 誘導(dǎo)組、NC 組、miR-34a mimics 組、iNC 組、miR-34a inhibitor 組 細(xì) 胞 增 殖 抑 制 率 分 別 為 0、(54.37±2.06)% 、(52.75±2.19)% 、(78.93±2.67)% 、(55.29±1.86)% 和(19.16±2.18)%(n=6,F(xiàn)=1 208.115,P<0.01)。與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞增殖抑制率升高(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC 組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞增殖抑制率升高(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞增殖抑制率降低(P<0.05)。

    2.3 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 侵襲和遷移的影響 與對(duì)照組比較,TNF-α誘導(dǎo)組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率降低(P<0.05);與 TNF-α 誘導(dǎo)組和 NC 組比較,miR-34a mimics組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor 組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率升高(P<0.05),見(jiàn)表3,圖1、2。

    Tab.3 Comparison of cell invasion number and migration rate between the six groups表3 各組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率的比較 (n=3,)

    Tab.3 Comparison of cell invasion number and migration rate between the six groups表3 各組細(xì)胞侵襲數(shù)目和遷移率的比較 (n=3,)

    **P<0.01;a與對(duì)照組比較,b與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,c與NC 組比較,d與iNC組比較,P<0.05

    遷移率(%)26.73±2.51 15.46±3.24a 14.59±3.16 6.25±2.18bc 14.34±2.29 23.48±3.57bd 19.413**組別對(duì)照組TNF-α誘導(dǎo)組NC組miR-34a mimics組iNC組miR-34a inhibitor組F細(xì)胞侵襲數(shù)目(個(gè))248.32±12.37 123.37±11.26a 126.58±12.35 84.61±11.54bc 117.38±13.65 178.45±14.22bd 64.118**

    Fig.1 Effects of miR-34a on cell invasion(crystal violet dyeing,×400)圖1 miR-34a對(duì)細(xì)胞侵襲的影響(結(jié)晶紫染色,×400)

    2.4 miR-34a 對(duì)TNF-α 刺激下人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 中MMP2 蛋白表達(dá)的影響 對(duì)照組、TNF-α 誘導(dǎo)組、NC 組、miR-34a mimics 組、iNC組、miR-34a inhibitor 組MMP2 蛋白表達(dá)分別為1.29±0.13、0.83±0.11、0.85±0.13、0.44±0.14、0.81±0.09、1.16±0.15(n=3,F(xiàn)=16.587,P<0.01);與對(duì)照組比較,TNF-α 誘導(dǎo)組細(xì)胞MMP2 蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05);與TNF-α 誘導(dǎo)組和NC 組比較,miR-34a mimics 組細(xì)胞MMP2 蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05);與TNF-α誘導(dǎo)組和iNC組比較,miR-34a inhibitor組細(xì)胞MMP2蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

    Fig.3 Effects of miR-34a on MMP2 protein expression in each group圖3 miR-34a對(duì)各組細(xì)胞中MMP2蛋白表達(dá)的影響

    2.5 miR-34a 對(duì)MMP2 基因的靶向調(diào)節(jié) Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)結(jié)果表明,MMP2 基因 3′UTR 區(qū)含有與miR-34a 結(jié)合位點(diǎn),位于miR-34a 3′UTR 55539387-55539393 區(qū) 域 ,見(jiàn) 圖 4。 miR-34a NC-pcDNAMMP2-3′UTR-WT 組 、miR-34a mimics-pcDNAMMP2-3′UTR-WT 組、miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 組 、miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-Del 組熒光素酶相對(duì)活性分別為2.35±0.02、1.19±0.02、2.32±0.04、2.29±0.05(n=3,F(xiàn)=745.474,P<0.01);與 miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTRWT 組 比 較 ,miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 組熒光素酶相對(duì)活性顯著降低(P<0.05)。

    Fig.4 Starbase database predicted that miR-34a had binding sites with MMP2圖4 Starbase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-34a與MMP2具有結(jié)合位點(diǎn)

    3 討論

    PE是圍產(chǎn)期導(dǎo)致母嬰死亡的主要疾病之一[11],終止妊娠是唯一有效的治療方法。目前PE 的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙和滋養(yǎng)層細(xì)胞分化缺陷被認(rèn)為是引起PE 的關(guān)鍵因素[12]。滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移能力下降是引起螺旋動(dòng)脈血管重鑄障礙的主要原因。因此,研究與滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲和遷移有關(guān)的因素,可能有助于進(jìn)一步解析PE的發(fā)生機(jī)制。高水平TNF-α與妊娠高血壓及PE、妊娠糖尿病等多種妊娠疾病有關(guān)[13]。體外實(shí)驗(yàn)表明,TNF-α刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo后能夠抑制其遷移和侵襲[14]。本研究利用TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo 體外模擬炎癥環(huán)境,發(fā)現(xiàn)TNF-α 刺激人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞后miR-34a表達(dá)水平、細(xì)胞增殖抑制率均顯著高于對(duì)照組,MMP2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞遷移率和侵襲數(shù)目均顯著低于對(duì)照組,說(shuō)明miR-34a、MMP2 可能與細(xì)胞的侵襲和遷移有關(guān)。

    miR-34a 是一個(gè)公認(rèn)的抑癌基因。研究表明miR-34a過(guò)表達(dá)能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、膀胱癌細(xì)胞HT-1197、HT-1376的增殖、侵襲和遷移[5,15]。滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜的穿透性與侵襲性腫瘤相似,Liu 等[16]研究表明 PE 患者胎盤組織和細(xì)胞中miR-34a 表達(dá)水平顯著高于健康孕婦,且miR-34a通過(guò)Notch信號(hào)通路抑制PE患者胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲。本研究結(jié)果表明,miR-34a 顯著抑制TNF-α刺激導(dǎo)致的人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和遷移,而抑制miR-34a表達(dá),則情況相反,說(shuō)明miR-34a過(guò)表達(dá)可抑制胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和遷移。

    滋養(yǎng)層細(xì)胞是胎盤組織的重要細(xì)胞,其能夠通過(guò)侵襲和遷移穿透母胎界面,促使胎盤形成,維持正常胎盤功能,胎盤重塑和滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲螺旋動(dòng)脈可為胎兒提供充足的血液和營(yíng)養(yǎng)[17-18]。MMP2 在侵襲性絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞中大量表達(dá),與滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲性高度相關(guān),能夠在妊娠期間發(fā)揮子宮內(nèi)膜組織重塑的作用[3]。Jin等[19]研究表明抑制MMP2表達(dá)能夠抑制人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo的侵襲和遷移,參與PE 的發(fā)生。本研究結(jié)果表明,與TNF-α 誘導(dǎo)組比較,miR-34a 過(guò)表達(dá)能夠降低細(xì)胞中MMP2 mRNA 及蛋白的表達(dá),而抑制miR-34a 的表達(dá)能夠增加MMP2 mRNA及蛋白的表達(dá)。生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果表明MMP2的3′UTR序列含有與miR-34a結(jié)合的位點(diǎn),說(shuō)明miR-34a與MMP2之間可能存在靶向關(guān)系。Yang 等[20]研究表明 miR-34a 通過(guò)靶向抑制MMP2的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的侵襲和遷移。本研究雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明miR-34a mimics-pcDNA-MMP2-3′UTR-WT 組熒光素酶相對(duì)活性顯著低于miR-34a NC-pcDNA-MMP2-3′UTRWT 組,提示 miR-34a 抑制 MMP2 的表達(dá)。miR-34a可能通過(guò)靶向抑制MMP2 的表達(dá),降低滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲性,導(dǎo)致子宮螺旋動(dòng)脈重鑄障礙,進(jìn)而參與妊娠高血壓及PE等疾病的發(fā)生。

    綜上所述,miR-34a 可能通過(guò)靶向抑制MMP2的表達(dá)抑制人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo的侵襲和遷移,進(jìn)而導(dǎo)致PE的發(fā)生。本研究?jī)H從體外細(xì)胞模擬實(shí)驗(yàn)分析了miR-34a 及MMP2 對(duì)PE 的影響,還需結(jié)合臨床研究進(jìn)一步證明miR-34a 靶向調(diào)節(jié)MMP2在PE發(fā)病中的機(jī)制。

    猜你喜歡
    滋養(yǎng)層遷移率絨毛
    微小miR-184在調(diào)控女性滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡中的作用及其分子機(jī)制探究
    絨毛栗色鼠尾草根化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:06
    Kisspeptin對(duì)早期胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用
    DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在胚胎停育絨毛組織中的表達(dá)差異及臨床意義
    SiC/SiO2界面形貌對(duì)SiC MOS器件溝道遷移率的影響
    濾棒吸阻和濾嘴長(zhǎng)度對(duì)卷煙煙氣中6種元素遷移率的影響
    煙草科技(2015年8期)2015-12-20 08:27:17
    滋養(yǎng)層干細(xì)胞研究進(jìn)展
    高遷移率族蛋白B1對(duì)16HBE細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)和分泌的影響
    基于六普數(shù)據(jù)的年齡—遷移率模型研究
    兔妊娠早中期滋養(yǎng)層細(xì)胞侵潤(rùn)的觀察研究
    校园人妻丝袜中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 老司机亚洲免费影院| 亚洲专区中文字幕在线 | 国产激情久久老熟女| 咕卡用的链子| 男人舔女人的私密视频| 久久久国产精品麻豆| 黄片无遮挡物在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美日韩精品网址| 两个人免费观看高清视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 韩国高清视频一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日韩大码丰满熟妇| 成人漫画全彩无遮挡| 在现免费观看毛片| 美女中出高潮动态图| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 桃花免费在线播放| 我要看黄色一级片免费的| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久久久久久久久免费av| 日韩制服骚丝袜av| av电影中文网址| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲第一青青草原| 午夜av观看不卡| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲成国产人片在线观看| 国产1区2区3区精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美日本中文国产一区发布| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女国产视频网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久天堂一区二区三区四区| 一级片免费观看大全| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 丝袜美足系列| 极品少妇高潮喷水抽搐| 五月开心婷婷网| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品久久久久久精品古装| 久热这里只有精品99| 国产成人精品无人区| 国产精品人妻久久久影院| 一本久久精品| videos熟女内射| 国产成人精品在线电影| 狂野欧美激情性xxxx| 一级毛片我不卡| 嫩草影视91久久| 九草在线视频观看| 视频区图区小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 999精品在线视频| 深夜精品福利| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久国产电影| 国产成人精品在线电影| 一级毛片 在线播放| av卡一久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 中文字幕色久视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 中文欧美无线码| 久久综合国产亚洲精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美精品av麻豆av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 777米奇影视久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产麻豆69| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲一区二区三区欧美精品| 9色porny在线观看| 久久久久久人人人人人| 美女高潮到喷水免费观看| 男人操女人黄网站| 毛片一级片免费看久久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品aⅴ在线观看| 成人三级做爰电影| 国产精品免费视频内射| 尾随美女入室| 日韩伦理黄色片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久久久久国产电影| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美日韩av久久| 日韩一区二区视频免费看| 麻豆av在线久日| av天堂久久9| 亚洲成人一二三区av| 亚洲男人天堂网一区| 婷婷色综合大香蕉| 超碰成人久久| 男女床上黄色一级片免费看| 免费不卡黄色视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲人成网站在线观看播放| bbb黄色大片| av国产久精品久网站免费入址| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 男女之事视频高清在线观看 | 天堂8中文在线网| 飞空精品影院首页| 精品免费久久久久久久清纯 | 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美97在线视频| 国产福利在线免费观看视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 嫩草影视91久久| 在线天堂最新版资源| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一级黄片播放器| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 婷婷色综合大香蕉| 在现免费观看毛片| 黄片小视频在线播放| 一区在线观看完整版| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久99精品国语久久久| 久久 成人 亚洲| 少妇精品久久久久久久| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 久久精品久久久久久久性| 在线天堂中文资源库| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 在现免费观看毛片| 成年人免费黄色播放视频| 精品久久久久久电影网| a级毛片黄视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| av免费观看日本| 精品国产国语对白av| 亚洲第一av免费看| 青草久久国产| 精品久久久精品久久久| 久久狼人影院| 香蕉国产在线看| 大片免费播放器 马上看| 国产免费又黄又爽又色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 香蕉国产在线看| 日韩欧美精品免费久久| 赤兔流量卡办理| 69精品国产乱码久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久av网站| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 午夜激情av网站| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久这里只有精品19| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲国产精品999| 精品久久久久久电影网| 在线观看www视频免费| 亚洲中文av在线| 日韩中文字幕视频在线看片| 18禁动态无遮挡网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日韩成人av中文字幕在线观看| 日日啪夜夜爽| 久久免费观看电影| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜影院在线不卡| 亚洲欧洲国产日韩| 黄色视频在线播放观看不卡| 午夜福利免费观看在线| 国产激情久久老熟女| 晚上一个人看的免费电影| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品久久午夜乱码| 两个人免费观看高清视频| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 久久97久久精品| tube8黄色片| 日韩大码丰满熟妇| 五月天丁香电影| 国产在线视频一区二区| av一本久久久久| 18禁观看日本| 国产精品 国内视频| 国产免费视频播放在线视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成年av动漫网址| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 嫩草影院入口| 欧美黑人欧美精品刺激| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人黄色视频免费在线看| 国产在视频线精品| 女性生殖器流出的白浆| 在线观看国产h片| 亚洲精品一区蜜桃| 日本午夜av视频| www日本在线高清视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 色吧在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日本av手机在线免费观看| 一级爰片在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| a 毛片基地| 国产一区二区激情短视频 | 少妇的丰满在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 天天操日日干夜夜撸| 中文字幕av电影在线播放| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品av麻豆狂野| h视频一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 在现免费观看毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产亚洲最大av| 亚洲伊人色综图| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一本大道久久a久久精品| 亚洲,欧美,日韩| 久久久久国产一级毛片高清牌| 老汉色∧v一级毛片| 丝袜美腿诱惑在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 人妻 亚洲 视频| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产精品成人久久小说| av.在线天堂| 免费观看性生交大片5| 秋霞伦理黄片| 777米奇影视久久| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久亚洲精品成人影院| 丰满少妇做爰视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 欧美人与善性xxx| 爱豆传媒免费全集在线观看| 97在线人人人人妻| 亚洲欧洲国产日韩| 飞空精品影院首页| 国产精品一国产av| 天堂俺去俺来也www色官网| 大话2 男鬼变身卡| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲国产精品一区三区| 久热这里只有精品99| 日本一区二区免费在线视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 久久99一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| www日本在线高清视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产乱来视频区| 伦理电影大哥的女人| 亚洲国产欧美在线一区| 一级黄片播放器| h视频一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品人妻久久久影院| 国产 精品1| 黄片小视频在线播放| 国产精品无大码| 精品久久久精品久久久| 秋霞伦理黄片| 哪个播放器可以免费观看大片| 在线观看免费高清a一片| 丝袜喷水一区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 校园人妻丝袜中文字幕| 乱人伦中国视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲综合色网址| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品一区二区在线观看99| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 99热网站在线观看| av女优亚洲男人天堂| 欧美人与善性xxx| 一级毛片电影观看| 午夜免费观看性视频| 大码成人一级视频| 国产成人系列免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品一区蜜桃| av片东京热男人的天堂| 亚洲少妇的诱惑av| 操美女的视频在线观看| av线在线观看网站| 午夜老司机福利片| www.自偷自拍.com| 少妇人妻 视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 波多野结衣一区麻豆| 99热全是精品| 亚洲人成电影观看| 在线观看www视频免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲五月色婷婷综合| 成人毛片60女人毛片免费| av电影中文网址| 老司机影院毛片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美黑人欧美精品刺激| xxxhd国产人妻xxx| 国产毛片在线视频| 天美传媒精品一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 熟女av电影| 欧美精品av麻豆av| 亚洲第一青青草原| 黄色怎么调成土黄色| 赤兔流量卡办理| 国产精品三级大全| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 美女午夜性视频免费| 免费不卡黄色视频| 男女午夜视频在线观看| 七月丁香在线播放| 精品亚洲成国产av| 中国三级夫妇交换| 波多野结衣av一区二区av| 99热网站在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 999精品在线视频| 中文欧美无线码| 欧美成人午夜精品| 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美在线一区亚洲| 欧美精品亚洲一区二区| 男的添女的下面高潮视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 精品国产国语对白av| 成人亚洲欧美一区二区av| 热re99久久国产66热| 伦理电影大哥的女人| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 不卡视频在线观看欧美| 久久97久久精品| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久久久久精品精品| 国产欧美亚洲国产| 在线观看免费高清a一片| 黄色一级大片看看| 嫩草影院入口| 黑丝袜美女国产一区| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 老司机亚洲免费影院| 久久精品国产亚洲av高清一级| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产高清不卡午夜福利| 美国免费a级毛片| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美xxⅹ黑人| 欧美日韩av久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 婷婷成人精品国产| 99热国产这里只有精品6| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产国语露脸激情在线看| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品无大码| 国产日韩欧美视频二区| 人成视频在线观看免费观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲av综合色区一区| 中文欧美无线码| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 纯流量卡能插随身wifi吗| 成人国产麻豆网| 新久久久久国产一级毛片| xxx大片免费视频| 秋霞伦理黄片| 久久久久久久久免费视频了| 黄色一级大片看看| 日韩欧美精品免费久久| 在线看a的网站| 在线 av 中文字幕| 男女边摸边吃奶| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 夫妻午夜视频| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美一区视频在线观看| 夫妻午夜视频| 国产探花极品一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | www.熟女人妻精品国产| 精品一区二区三卡| 欧美中文综合在线视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 欧美在线一区亚洲| 激情视频va一区二区三区| 午夜av观看不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产精品人妻久久久影院| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 国产精品.久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产又爽黄色视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久99一区二区三区| 99热全是精品| 成人国产麻豆网| 国产一区有黄有色的免费视频| 一级毛片电影观看| 黄色视频不卡| 不卡av一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久精品区二区三区| 精品一区二区免费观看| 欧美黑人精品巨大| 亚洲色图综合在线观看| 免费观看av网站的网址| 国产日韩欧美视频二区| 一区二区av电影网| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲情色 制服丝袜| 大香蕉久久网| 亚洲精品日本国产第一区| 丝袜人妻中文字幕| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲图色成人| 国产激情久久老熟女| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 这个男人来自地球电影免费观看 | 午夜激情久久久久久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩人妻精品一区2区三区| 美女视频免费永久观看网站| 爱豆传媒免费全集在线观看| 黄片小视频在线播放| 嫩草影院入口| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品蜜桃在线观看| xxx大片免费视频| 久久av网站| 99九九在线精品视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品视频女| 成年av动漫网址| 高清av免费在线| 男女床上黄色一级片免费看| 一本大道久久a久久精品| 国产极品天堂在线| 97在线人人人人妻| 中国国产av一级| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产黄色视频一区二区在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 美女午夜性视频免费| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 黄频高清免费视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一级毛片 在线播放| 亚洲视频免费观看视频| 99九九在线精品视频| 1024视频免费在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 久久ye,这里只有精品| 国产精品一区二区在线观看99| a级毛片黄视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| av线在线观看网站| 国产精品三级大全| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜激情av网站| 99精品久久久久人妻精品| 日韩视频在线欧美| 色视频在线一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 在线观看三级黄色| 国产成人一区二区在线| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美在线一区亚洲| 成年av动漫网址| 国产精品 欧美亚洲| www.av在线官网国产| a级毛片黄视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 青春草视频在线免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲av国产av综合av卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 2018国产大陆天天弄谢| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲精品成人av观看孕妇| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久亚洲国产成人精品v| 99久久综合免费| 老鸭窝网址在线观看| 18禁观看日本| 久久久久精品国产欧美久久久 | 丝袜喷水一区| 久久久久久久精品精品| av网站免费在线观看视频| 亚洲图色成人| 两个人看的免费小视频| 大话2 男鬼变身卡| 免费黄网站久久成人精品| 国产人伦9x9x在线观看| 黄频高清免费视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美另类一区| 在线天堂最新版资源| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产高清不卡午夜福利| 另类精品久久| 国产激情久久老熟女| 久久国产精品大桥未久av| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲av福利一区| videosex国产| 午夜福利视频在线观看免费| 国产一区二区 视频在线| 在线看a的网站| 丝袜在线中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 精品酒店卫生间| 99热全是精品| 亚洲av福利一区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一二三四在线观看免费中文在| 日本vs欧美在线观看视频| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久精品性色| 少妇人妻久久综合中文| 午夜福利,免费看| a级毛片黄视频| 精品一区二区免费观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成年人午夜在线观看视频| bbb黄色大片| 欧美激情 高清一区二区三区| 在线 av 中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲久久久国产精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av男天堂| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 爱豆传媒免费全集在线观看|