環(huán)氧合酶-2、微衛(wèi)星穩(wěn)定表達(dá)與結(jié)直腸癌術(shù)后患者含奧沙利鉑化療方案預(yù)后的關(guān)系

朱 靈, 孟 芳, 崔 英

(江蘇省無錫市錫山人民醫(yī)院/東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院無錫分院 腫瘤血液科, 江蘇 無錫, 214000)

結(jié)直腸癌病因較復(fù)雜，預(yù)后差，其轉(zhuǎn)移和侵襲受基因突變、環(huán)境等多方面因素的影響[1-2]。臨床研究[3-4]顯示, DNA微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)導(dǎo)致體內(nèi)錯配修復(fù)基因失活，復(fù)制過程中出現(xiàn)的錯誤不能修復(fù)，進(jìn)而升高腫瘤發(fā)生概率，是結(jié)直腸癌尤其是部分散發(fā)性結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制。但臨床對于部分患者微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系并不明確[5-6], 而MSS狀態(tài)說明沒有錯配修復(fù)基因的參與，細(xì)胞正常復(fù)制增殖，故可能存在其他的分子機(jī)制與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。既往研究[7-8]報道，環(huán)氧合酶-2(COX-2)水平升高是腫瘤發(fā)生發(fā)展的危險因素。目前臨床關(guān)于MSS與結(jié)直腸癌相關(guān)性的報道很少，為進(jìn)一步探究結(jié)直腸癌的發(fā)生機(jī)制，本研究分析了結(jié)直腸癌組織中COX-2、MSS表達(dá)與TNM分期及預(yù)后的關(guān)系，旨在為疾病診治和預(yù)后評估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本次研究設(shè)計采用回顧性、單中心臨床方案，選取2016年1月—2019年12月在本院治療的結(jié)直腸癌患者70例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2015版)》[9]中診斷標(biāo)準(zhǔn)者; ② 年齡>18歲者; ③ 臨床分期Ⅰ～Ⅲ期者; ④ 在本院接受結(jié)直腸癌根治術(shù)及術(shù)后含奧沙利鉑輔助化療方案治療者; ⑤ 臨床資料保存完整者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 術(shù)前有放化療等抗腫瘤治療史者; ② 合并有肝腎功能障礙、心腦血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病者; ③ 隨訪資料不完整者。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

術(shù)后化療方法: 70例患者術(shù)后均采用奧沙利鉑聯(lián)合卡培他濱(XELOX)輔助化療方案。第1天，奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，生產(chǎn)批號20151122)130 mg/m2, 靜脈滴注2 h; 第1～14天，卡培他濱(齊魯制藥有限公司，生產(chǎn)批號20151002)1 250 mg/m2, 2次/d, 口服。每3周重復(fù)1次。

COX-2檢測方法: 采用免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)直腸癌組織中COX-2表達(dá)情況。采用10%中性甲醛固定液將標(biāo)本固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋; 切成4 μm的連續(xù)切片; 烘干水分并脫蠟，標(biāo)本中均依次滴加對應(yīng)的兔抗人-COX-2抗體，過夜，蘇木素染色，中性樹膠封片。PBS代替一抗作為陰性對照。200倍顯微鏡下觀察SP法染色結(jié)果。

COX-2蛋白表達(dá)評分: 以染色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞占比作為最終記分判斷依據(jù), 0～1分提示陰性, 2分及以上判斷為陽性[10]。染色強(qiáng)度評分: 無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞占比積分: 以總數(shù)1 000個腫瘤細(xì)胞為準(zhǔn)，陽性表達(dá)率<10%為無陽性反應(yīng), 10%及以上提示陽性反應(yīng)并進(jìn)一步評分，其中陽性表達(dá)率≤5%為0分，陽性表達(dá)率為>5%～25%計1分，陽性表達(dá)率>25%～50%計2分，陽性表達(dá)率>50%計3分。

MSS判斷方法[11]: 根據(jù)hMLH1、hMSH2、hMSH6、PMS2這4個錯配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失情況判斷陽性, 4個錯配修復(fù)蛋白全部表達(dá)(染色均為陽性)判斷為MSS, 有1個或1個以上表達(dá)缺失則判斷為MSI。

隨訪方法: 每年通過電話或門診隨訪1次，每例患者隨訪需滿2年，隨訪時間截至2021年4月。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 一般資料

70例患者中，男39例，女31例; 年齡31～69歲，平均(50.45±12.24)歲; TNM分期為Ⅱ期39例, Ⅲ期31例; 結(jié)腸癌40例，直腸癌30例; COX-2和MSS陽性表達(dá)者34例(雙陽組), COX-2陽性表達(dá)者12例和MSS陽性表達(dá)者11例(單陽組), COX-2和MSS陰性表達(dá)者13例(雙陰組)。MSS、COX-2陽性表達(dá)的免疫組化染色圖見圖1。

A: MSS陽性表達(dá); B: COX-2陽性表達(dá)。

2.2 各組臨床病理及一般資料比較

雙陽組、單陽組和雙陰組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05); 雙陽組TNM分期Ⅲ期者占比高于單陽組、雙陰組，且單陽組高于雙陰組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組臨床病理及一般資料比較

2.3 各組無病生存時間比較

雙陽組中位無病生存期為14個月(95%CI為13.22～14.78), 短于單陽組的24個月(95%CI為21.53～26.47)和雙陰組的34個月(95%CI為27.35～40.65), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05); 單陽組和雙陰組的中位無病生存期比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見圖2。

2.4 多因素分析

將患者臨床病理指標(biāo)、COX-2、MSS表達(dá)作為自變量，進(jìn)展情況作為因變量，進(jìn)行Cox比例風(fēng)險回歸分析，結(jié)果顯示, TNM分期、COX-2、MSS表達(dá)是結(jié)直腸癌患者術(shù)后含奧沙利鉑化療方案預(yù)后的影響因素(HR=2.354、1.103、1.155,P<0.05)。

3 討 論

結(jié)直腸癌是起病較為隱匿的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，早期臨床癥狀并不明顯，大部分患者確診時已發(fā)展至中晚期，錯過手術(shù)最佳時期。晚期結(jié)直腸癌具有較強(qiáng)的擴(kuò)散性和轉(zhuǎn)移性，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，患者生存期往往較短。目前，手術(shù)切除仍是結(jié)直腸癌最有效的治療方式，為提高結(jié)直腸癌的治愈率和癥狀緩解率，結(jié)直腸癌患者術(shù)后常采用含奧沙利鉑的化療方案進(jìn)行輔助化療[12-13]。尋找可正確評估化療方案的療效和預(yù)后情況的血清標(biāo)志物，有利于化療方案的調(diào)整和優(yōu)化。因此，本研究重點分析了COX-2、MSS水平變化與結(jié)直腸癌預(yù)后情況的關(guān)系，并采用Cox線性回歸分析確定影響患者預(yù)后的危險因素。

DNA MSI在結(jié)直腸癌中具有獨特的病理特征，常發(fā)生于右半結(jié)腸，以黏液腺癌常見，研究[14]證實MSI與結(jié)直腸癌患者的無疾病生存時間、化療疾病控制率呈正相關(guān)，可有效評估患者預(yù)后情況。MSS是指hMLHl、hMSH2、hMSH6這3個參與復(fù)制錯配糾正過程的錯配修復(fù)蛋白的表達(dá)均無缺失，細(xì)胞增殖分化正常，存在其他的致癌分子機(jī)制[15-16]。目前，臨床研究大多通過分析結(jié)直腸癌組織中MSS水平與癌旁組織中的差異，進(jìn)而確定MSS在疾病診斷中的價值，但很少有研究報道MSS對結(jié)腸癌患者術(shù)后采用含奧沙利鉑方案化療的敏感性和有效性的影響。本研究結(jié)果顯示，雙陽組患者TNM分期Ⅲ期者占比高于單陽組和雙陰組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05); 雙陽組患者的中位無疾病生存時間短于單陽組和雙陰組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步行Cox比例風(fēng)險回歸分析結(jié)果顯示，MSS表達(dá)是結(jié)直腸癌患者術(shù)后采用含奧沙利鉑方案化療預(yù)后的影響因素。由此提示，MSS上調(diào)參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程，可作為預(yù)后評估的重要指標(biāo)。

COX-2是消化道腫瘤組織中高表達(dá)的一種誘導(dǎo)酶，通過表達(dá)前列腺素E2(PGE2)參與細(xì)胞凋亡過程，與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[17]。COX-2可分泌表達(dá)的PGE2是抑癌基因的上游調(diào)控者，具有促進(jìn)抑癌基因bcl-2表達(dá)下調(diào)的作用，可抑制細(xì)胞凋亡，從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展[18-19]。本研究結(jié)果顯示，雙陽組患者TNM分期Ⅲ期者占比高于單陽組和雙陰組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 說明COX-2參與大腸癌的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)，雙陽組患者生存期長于單陽和陰性表達(dá)患者，說明COX-2高表達(dá)不僅是惡性腫瘤發(fā)生的早期事件，而且與惡性腫瘤的TNM 分期及患者預(yù)后均有直接關(guān)系。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[20-21]結(jié)果，本研究進(jìn)行Cox比例風(fēng)險回歸分析確定COX-2、MSS表達(dá)是結(jié)直腸癌患者術(shù)后采用含奧沙利鉑方案化療預(yù)后的影響因素，表明COX-2可促進(jìn)癌細(xì)胞進(jìn)一步分化，其異常表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生有關(guān)。

綜上所述, COX-2、MSS陽性表達(dá)可影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后應(yīng)用含奧沙利鉑化療方案的效果，縮短無疾病生存時間。本研究綜合分析了COX-2、MSS水平異常與結(jié)直腸癌患者含奧沙利鉑化療方案化療效果及預(yù)后的關(guān)系，并采用Cox比例風(fēng)險回歸分析確定了影響化療效果和預(yù)后的危險因素，可為結(jié)直腸癌的臨床治療和預(yù)后評估提供依據(jù)，有利于優(yōu)化化療方案，提高化療效果，對改善患者預(yù)后具有重要意義。但本研究納入的樣本量較小，分析結(jié)果可靠性有限，故未來仍需進(jìn)一步加大樣本量來驗證結(jié)果。