IL-23和IL-35在良惡性胸腔積液鑒別診斷中的意義

陳鈺 陳斌斌 郭萌

【摘 要】目的：通過觀察IL-23及IL-35在正常人群及良、惡性胸腔積液患者中的表達(dá)水平，以探討這兩項指標(biāo)在不同種類胸腔積液鑒別診斷中的意義。方法：選取2020年8月至2021年4月于我院就診的胸腔積液患者共60例，將其分為良性胸腔積液組和惡性胸腔積液組，用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）分別檢測病例組及正常對照組體內(nèi)的IL-23和IL-35的含量，通過組間及組內(nèi)數(shù)據(jù)進(jìn)行對比和相關(guān)性分析。結(jié)果：在血清中，與正常對照組相比，良、惡性胸腔積液組的IL-23含量均顯著升高（P<0.05），其中良性胸腔積液組升高的更為明顯（P<0.05）；而IL-35在良性組則表現(xiàn)為含量下降，在惡性組表達(dá)上調(diào)（P<0.05）；在胸腔積液中，兩種白介素的表達(dá)與血清中的水平一致，即IL-23含量在良性組升高的更為明顯，而IL-35在良性胸腔積液中含量下降，在惡性組含量升高；良惡性胸腔積液患者外周血和胸腔積液中IL-23水平呈正相關(guān)（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相關(guān)（r=0.784，P<0.01）。結(jié)論：檢測患者體內(nèi)IL-23及IL-35的含量對不同種類胸腔積液的鑒別診斷具有一定價值。不同種類胸腔積液中IL-23及IL-35的含量也有所不同，且其在良惡性胸腔積液中鑒別中具有一定意義。

【關(guān)鍵詞】IL-23；IL-35；胸腔積液

在我國良惡性胸腔積液的代表即結(jié)核性胸膜炎與癌性（主要是肺癌）胸腔積液。近幾年來，鑒別胸腔積液的生物學(xué)標(biāo)志物很多，但是文獻(xiàn)的相關(guān)報道不一，范圍波動大而且受地區(qū)的結(jié)合感染率影響較大[1]。因此，尋找直接或間接反映癌腫或結(jié)核菌引起炎癥反應(yīng)存在的指標(biāo)，以及探討聯(lián)合檢測的價值就成為近年研究熱點。

1 研究對象

選擇2018年8月至2019年4月于解放軍八一醫(yī)院就醫(yī)并確診的的良性胸腔積液30例，其中包括肺炎性胸腔積液14例，結(jié)核性胸腔積液16例；惡性腫瘤胸腔積液30例，均經(jīng)組織病理學(xué)證實。另選取于本院正常體檢病例30例，設(shè)立正常對照組。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集與預(yù)處理

各組受試者于清晨采取靜脈血5ml，3000rpm離心10min，取上清存于-20℃冰箱備用。良、惡性胸腔積液組分別于治療前采集胸腔積液5ml，3000rpm離心10min，取上清存于-20℃冰箱備用。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定IL-23、IL-35含量

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)孔10個，加入相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品。加樣：設(shè)空白孔一個及待測樣品孔若干，待測孔先加樣品稀釋液40uL，再加待測樣品10uL。溫育：封板膜封板，37℃水浴箱溫育30分鐘。洗滌：蒸餾水30倍稀釋濃縮洗滌液，撕去封板膜，甩干，洗滌液洗板5次，每次間隔30秒，拍干。加酶標(biāo)：每孔酶標(biāo)液50uL，空白孔除外。溫育：封膜溫育30分鐘。洗滌：稀釋洗滌液洗5次，拍干。顯色：每孔顯色A液50uL，B液50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。終止：每孔終止液50uL。測定：空白孔調(diào)零，450nm波長測量每孔吸光度（OD值）。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗，計量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 研究結(jié)果

3.1 血清中IL-23和IL-35的含量測定

實驗數(shù)據(jù)顯示，與正常對照組相比，良、惡性胸腔積液組的IL-23含量均顯著升高（P<0.05），其中良性胸腔積液組升高的更為明顯（P<0.05）；而IL-35在良性組則表現(xiàn)為含量下降，在惡性組表達(dá)上調(diào)（P<0.05），見表1。

3.2 胸腔積液中IL-23和IL-35含量對比

通過實驗發(fā)現(xiàn)，胸腔積液中兩種白介素的表達(dá)與血清中的水平一致，即IL-23含量在良性組升高的更為明顯（P<0.05），而IL-35在良性胸腔積液中含量下降，在惡性組含量升高（P<0.05），見表2。

3.3 良惡性胸腔積液患者外周血和胸水中IL-23/IL-35相關(guān)性分析

惡性胸腔積液患者外周血和胸水中IL-23水平呈正相關(guān)（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相關(guān)（r=0.784，P<0.01）。

4 討論

良性胸腔積液主要以結(jié)核性胸腔積液為主，通常屬于慢性疾病，其病因一般是胸膜下組織的破裂導(dǎo)致結(jié)核桿菌進(jìn)入胸腔，從而誘發(fā)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。惡性胸腔積液主要是由于腫瘤細(xì)胞侵犯了胸膜淋巴微孔和（或）縱隔淋巴結(jié)從而使局部淋巴回流受阻，導(dǎo)致正常胸腔內(nèi)液體的重吸收受阻，進(jìn)而導(dǎo)致胸腔積液的發(fā)生。雖然目前對于兩者的發(fā)病機(jī)制、鑒別診斷的研究越來越深入，但是由于兩者的臨床表現(xiàn)和實驗室檢驗結(jié)果不易區(qū)分，以及缺少病因?qū)W、病理學(xué)的依據(jù)，所以良惡性胸腔積液的鑒別仍是一大難題[2]。

本研究結(jié)果顯示，與正常對照組相比，IL-23含量在良惡性胸腔積液患者的血清及胸水中均明顯升高（P<0.05），但在良性胸腔積液中升高更為顯著（P<0.05）。血清組也呈現(xiàn)正相關(guān)性，表明可以通過測量IL-23和IL-35在血清中的含量，為判斷受試者是否患有良惡性胸腔積液提供一定依據(jù)。

在本實驗中，收集的良性胸腔積液可能CD4+T細(xì)胞含量升高，從而導(dǎo)致IL-23分泌增多。因此我們猜測良性胸腔積液產(chǎn)生過程中的機(jī)制可能為：機(jī)體在炎癥刺激下激活CD4+T，使其在體內(nèi)表達(dá)水平升高，活化之后的抗原提呈因子分泌IL-23增多，IL-23與受體結(jié)合后一方面促進(jìn)Th17細(xì)胞增殖分泌IL-17、IL-22等促炎因子，另一方面IL-23通過自分泌的方式作用于樹突狀細(xì)胞和吞噬細(xì)胞進(jìn)一步分泌IL-1、IL-6等促炎因子，放大局部炎癥效應(yīng)[3]。這與本實驗中良性胸腔積液中IL-23含量升高的結(jié)果相符。

由于良性胸腔積液中促炎因子和趨化因子表達(dá)更為顯著，因此本實驗結(jié)果顯示IL-23在良性胸腔積液中的含量上高更為明顯。

在本研究中，IL-35含量在良性胸腔積液中降低，而在惡性胸腔積液中升高。在良性胸腔積液的免疫損傷和炎癥反應(yīng)中，Th17細(xì)胞和IL-17發(fā)揮著重要作用。由于IL-35具有抑制Th17細(xì)胞的發(fā)育、增殖，抑制干擾素γ、IL-17分泌的功能，所以在良性胸腔積液的形成中發(fā)揮炎性抑制作用，因此IL-35在良性胸腔積液中的表達(dá)程度降低，這與本實驗結(jié)果相符。在惡性胸腔積液中，CD4+CD25+Treg的含量顯著高于良性胸腔積液，其可以抑制自身細(xì)胞免疫，并且Treg細(xì)胞非常容易被趨化到積液中，并在其中大量堆積，最終導(dǎo)致胸腔積液的形成。Treg為CD4+T細(xì)胞中的一個亞群，抑制抗腫瘤免疫的產(chǎn)生[4]。由此可以得出在惡性胸腔積液中，Treg細(xì)胞含量較高，一定程度上可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。本實驗中IL-35在惡性胸腔積液中含量明顯增高，表明Treg細(xì)胞和IL-35的分泌互相影響，并且二者共同作用從而促進(jìn)腫瘤的生長與浸潤。

在臨床上，良惡性胸腔積液由于臨床和實驗室檢查結(jié)果類似，鑒別困難，因此尋找可以有效鑒別此類疾病的相關(guān)指標(biāo)顯得尤為重要。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-23在不同種類胸腔積液患者體內(nèi)都有所升高，但在良性胸腔積液中升高的程度更為顯著，而IL-35在二類疾病中的表現(xiàn)則恰為相反，而與血清結(jié)果呈一致。綜上所述，我們推測可以通過大批量檢測二指標(biāo)在胸腔積液中的表達(dá)程度，建立合適的參考區(qū)間，檢測受試者血清中二指標(biāo)可以為良惡性胸腔積液的鑒別診斷提供一定依據(jù)。

本次實驗依舊存在一些不足。首先，實驗采集的標(biāo)本量較少，并不能很好地佐證實驗結(jié)論，今后需要擴(kuò)大樣本量從而進(jìn)一步驗證IL-23和IL-35在良惡性胸腔積液鑒別診斷中的價值，以便于更好地服務(wù)臨床。其次，實驗分組不夠細(xì)致，僅僅研究了良、惡性胸腔積液標(biāo)本里面IL-23和IL-35的含量，然而采集的良性胸腔積液中還分為結(jié)核性和肺炎性胸腔積液。今后可以將分組更加細(xì)致化，將肺炎性和結(jié)核性胸腔積液單獨作研究，以探討IL-23和IL-35兩種指標(biāo)在其鑒別診斷中是否也存在一定的意義。最后，本實驗的采用的是ELISA的研究方法。今后可以采用分子實驗的方法再次進(jìn)行測量，以提高實驗的準(zhǔn)確度和特異度。

參考文獻(xiàn)

[1] Oppmann B，Lesley R，Blom B，et al.Novel p19 protein engages IL-12p40 t o form a cytokine，IL-23，with biological activities similar as well as distinct from IL-12.Immunity，2000，13（5）：715.

[2] 杜國盛，石炳毅.白介素23的生物活性與免疫調(diào)節(jié)[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2009，34（3）：360-362.

[3] Wang Z，Liu JQ，Liu Z，et a1.Tumor·derived IL-35 promotes tumor growth by enhancing myeloid c e l l a c c u m u l a t i o n a n d a n S i o - g e n e s i s . J Immunol，2013，190（5）：2415-2423.

[4] 李翔云，李薇，張澤明.結(jié)核性、惡性胸腔積液的鑒別診斷的研究進(jìn)展[J].臨床診療進(jìn)展，2018，10（11）：109-112.