陰道彩色多普勒超聲參數(shù)與微血管密度、促血管生成素-2對卵巢癌的診斷價值

田麗娟 路 偉 岳 虹

卵巢癌是女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，早期發(fā)病無特殊癥狀，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)處于中晚期，錯過了治療的最佳時間，因此卵巢癌患者死亡率較高，預(yù)后較差[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)[3-6]，卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展與腫瘤的增殖、新生血管的侵襲、微血管密度(MVD)等均密切相關(guān)，因此，如果能早期發(fā)現(xiàn)新生血管增生情況對于早期診斷卵巢癌可能有一定的臨床意義。超聲影像學(xué)技術(shù)是臨床常用的輔助檢查方法，對于腹腔及盆腔臟器疾病均能在一定程度上早期發(fā)現(xiàn)，尤其是陰道超聲對女性生殖系統(tǒng)疾病分辨率高，可通過捕捉病灶血流及阻力等情況提高疾病的診斷率。臨床報道顯示，卵巢良惡性腫瘤在超聲影像學(xué)下表現(xiàn)并不相同[7-9]。同時，卵巢良惡性腫瘤的微血管密度分布也不相同，因此，本研究對陰道彩色多普勒超聲參數(shù)與微血管密度、促血管生成素-2(Ang-2)對卵巢癌的診斷價值進(jìn)行了進(jìn)一步研究，為卵巢癌的診斷提供參考，現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年8月期間在我院診治的52例卵巢癌患者為研究對象(卵巢癌組)，以1∶1比例隨機(jī)選取以上時間段內(nèi)52例卵巢良性腫瘤患者為對照(卵巢良性腫瘤組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均通過病理檢查證實(shí)為卵巢良性或惡性腫瘤。②在納入研究前尚未進(jìn)行任何抗腫瘤治療。③納入研究前無盆腔手術(shù)史。④患者均行手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肝、腎等其他重要臟器功能障礙。②合并有其他部位惡性腫瘤。③合并有精神或意識障礙性疾病，存在溝通障礙者。④預(yù)期生存時間<6個月者。卵巢癌組年齡45～76歲，平均(64.76±6.90)歲，病程1～4個月，平均(2.56±0.64)個月，體重指數(shù)19.21～25.96 kg/m2，平均(21.77±1.75)kg/m2，依據(jù)2017年NCCN《卵巢癌臨床實(shí)踐指南》分期[10]其中Ⅰ～Ⅱ期16例、Ⅲ～Ⅳ期36例；卵巢良性腫瘤組年齡40～81歲，平均(60.98±8.12)歲，病程1～7個月，平均(2.89±0.70)個月，體重指數(shù)19.29～25.91 kg/m2，平均(22.14±1.90)kg/m2。2組患者年齡、病程、體重指數(shù)等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審核通過，患者或家屬知情同意，簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 陰道彩色多普勒超聲檢查 患者在術(shù)前常規(guī)行陰道彩色多普勒超聲檢查，檢查儀器為美國GE公司生產(chǎn)，型號為DC-3/DC-3T，探頭頻率為7.5 MHz。在排空膀胱后取膀胱截石位下進(jìn)行檢查，將超聲陰道探頭置入陰道內(nèi)先在二維模式下觀察病灶所在位置、大小、形態(tài)、回聲等，隨后開啟彩色多普勒超聲模式，對病灶血流參數(shù)進(jìn)行觀察及測定，包括動脈血管搏動指數(shù)(PI)、阻力指數(shù)(RI)、舒張末期流速(EDV)、峰值流速(PSV)、平均流速(VM)，以上參數(shù)測定3個周期取平均值。

1.2.2 微血管密度及促血管生成素-2的檢測 采用免疫組化SP法檢查，具體方法參考相關(guān)文獻(xiàn)[11-12]，SP試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)，DAB顯色試劑盒為北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)，鼠抗人 CD34 單克隆抗體為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，鼠抗人促血管生成素-2多克隆抗體為英國ABcam公司生產(chǎn)。將切除的病灶標(biāo)本用10%的甲醛液固定，石蠟包埋及常規(guī)切片、染色，應(yīng)用 Weidener 法計(jì)數(shù)對微血管密度進(jìn)行觀察及計(jì)數(shù)：在低倍鏡下選擇3個血管密集的部位作為觀察部位，再在高倍鏡下在以上每個部位區(qū)域內(nèi)選擇5個獨(dú)立視野，計(jì)算出被CD34標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞，對血管數(shù)量進(jìn)行計(jì)算，作為微血管密度，CD34陽性染色為棕褐色。促血管生成素-2染色為棕褐色或棕黃色，根據(jù)著色強(qiáng)度分別計(jì)分，無色、淡黃色、棕黃色、褐色分別為0分、1分、2分、3分，再根據(jù)顯色陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)算，≤10%為0分、>10%～30%為1分，>30%～50%為2分，>50%為3分，以上兩種計(jì)數(shù)分值相加得分為最終陽性表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者陰道彩色多普勒超聲參數(shù)比較

卵巢癌組PI、RI均低于卵巢良性腫瘤組，EDV、PSV、VM均高于卵巢良性腫瘤組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組患者陰道彩色多普勒超聲參數(shù)比較

2.2 卵巢癌患者不同分期患者陰道彩色多普勒超聲參數(shù)比較

卵巢癌組Ⅰ～Ⅱ期患者PI、RI均高于Ⅲ～Ⅳ期患者，EDV、PSV、VM均低于Ⅲ～Ⅳ期患者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 卵巢癌患者不同分期患者陰道彩色多普勒超聲參數(shù)比較

2.3 2組患者微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)情況比較

卵巢癌組微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)陽性率高于卵巢良性腫瘤組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 2組患者微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)情況比較

2.4 卵巢癌患者不同分期患者微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)情況比較

卵巢癌組Ⅰ～Ⅱ期患者微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)陽性率均低于Ⅲ～Ⅳ期患者，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 卵巢癌患者不同分期患者微血管密度及促血管生成素-2表達(dá)情況比較

2.5 2組患者陰道彩色多普勒超聲參數(shù)與微血管密度及促血管生成素-2的相關(guān)性

spearman相關(guān)分析顯示，卵巢癌組患者陰道彩色多普勒超聲下PI、RI與微血管密度、促血管生成素-2之間有負(fù)相關(guān)性，與EDV、PSV、VM之間有正相關(guān)性(P<0.05)，見表5。卵巢良性腫瘤組患者以上參數(shù)之間無相關(guān)性(P>0.05)，見表5。

表5 2組陰道彩色多普勒超聲參數(shù)與微血管密度及促血管生成素-2的相關(guān)性

3 討論

卵巢癌的發(fā)生與遺傳、環(huán)境等多種因素密切相關(guān)[3-6]，在國內(nèi)外卵巢癌的患病率均有增高趨勢[1-2，13-15]，已經(jīng)成為嚴(yán)重影響到女性身體健康的生殖道惡性腫瘤之一。同時由于卵巢癌的早期癥狀并不典型，因此通過婦科檢查等很難對其早期診斷，大部分臨床就診時病情已經(jīng)處于中晚期，生存時間明顯縮短，因此早期的診斷對于卵巢癌患者的預(yù)后意義重大。

研究發(fā)現(xiàn)[16-18]，腫瘤的生長和浸潤與血管的生成密切相關(guān)，尤其是惡性腫瘤典型的特點(diǎn)之一就是有大量的新生血管生成，同時伴隨著新生血管生長，腫瘤也隨之快速生長及轉(zhuǎn)移。新生血管的特點(diǎn)是管壁較薄，無平滑肌，僅為內(nèi)皮細(xì)胞組成，因此彈性較差，分布也較為紊亂，管腔相對增粗，因此如果在病灶內(nèi)發(fā)現(xiàn)存在大量的新生血管，往往提示病灶為惡性。超聲目前是惡性腫瘤常用的篩查方法，通過超聲多普勒檢查可觀察到腫瘤內(nèi)血管的分布狀況，而且還能通過包塊有無包膜等特點(diǎn)綜合判斷包塊的性質(zhì)，惡性腫瘤包塊在彩色多普勒下主要會表現(xiàn)為大量的新生血管，新生血管血流有低阻力和高流速的特征，往往同時伴有走形異常及動靜脈瘺，因此觀察新生血管情況可判斷腫瘤的良惡性。本研究中卵巢癌患者陰道彩色多普勒觀察到PI、RI均低于卵巢良性腫瘤組，EDV、PSV、VM均高于卵巢良性腫瘤組，而且卵巢癌組Ⅰ～Ⅱ期患者PI、RI均高于Ⅲ～Ⅳ期患者，EDV、PSV、VM均低于Ⅲ～Ⅳ期患者，研究結(jié)果與臨床報道的結(jié)果是一致的，表明陰道彩色多普勒超聲有助于卵巢良惡性腫瘤的鑒別，而且對卵巢癌的進(jìn)展分期判斷也有一定臨床價值。

目前微血管密度被認(rèn)為是反映腫瘤血管生成的主要標(biāo)志[19-21]，CD34能特異性的對血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，因此常用于微血管密度的檢測。被CD34標(biāo)記的血管內(nèi)皮會呈現(xiàn)棕褐色，通過對切除的卵巢腫瘤組織進(jìn)行免疫組化SP法檢查，觀察微血管密度的表達(dá)，結(jié)果顯示卵巢癌組織內(nèi)微血管密度表達(dá)率明顯高于良性卵巢腫瘤組織，同時隨著卵巢癌的分期增加微血管密度分布隨之增加，研究結(jié)果與臨床報道的結(jié)果一致[22-23]，說明微血管密度能反映卵巢癌的生長及浸潤速度，微血管密度越高表明卵巢癌具有更高的轉(zhuǎn)移和惡化進(jìn)展趨勢。促血管生成素-2是特異性的血管生成刺激因子，是作用于內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，是有進(jìn)行血管重構(gòu)的組織中活化的內(nèi)皮細(xì)胞分泌的，能破壞血管的完整性，影響到細(xì)胞之間的連接，可拮抗促血管生成素-1從而促使新生血管的生成，促血管生成素-2在惡性腫瘤組織中表達(dá)明顯，但是在正常組織中則表達(dá)有限，因此臨床上可通過檢測促血管生成素-2的表達(dá)來判定腫瘤的良惡性及腫瘤的惡性程度。本研究結(jié)果顯示卵巢癌組織中促血管生成素-2表達(dá)陽性率明顯高于卵巢良性組織，而且隨著卵巢癌的分期進(jìn)展促血管生成素-2表達(dá)率也隨之增加，進(jìn)一步說明促血管生成素-2可用于良惡性腫瘤的判斷及卵巢癌的病情嚴(yán)重程度輔助診斷[24-26]。

綜上所述，陰道彩色多普勒血流顯像血流參數(shù)、微血管密度、促血管生成素-2均與卵巢癌及其病情進(jìn)展程度密切相關(guān)，對卵巢癌的輔助診斷有較高的臨床價值。本研究結(jié)果spearman相關(guān)分析顯示卵巢癌組患者陰道彩色多普勒超聲下PI、RI與微血管密度、促血管生成素-2之間有負(fù)相關(guān)性，與EDV、PSV、VM之間有正相關(guān)性，卵巢良性腫瘤組患者以上參數(shù)之間無相關(guān)性，表明通過陰道彩色多普勒超聲觀察卵巢腫瘤的血流參數(shù)在一定程度上可對腫瘤性質(zhì)進(jìn)行判斷，彩色多普勒超聲下的血管參數(shù)在一定程度上可反映出腫瘤的新生血管情況。