ERRα、ERRβ蛋白在結直腸癌根治術患者中的表達水平及與病理的相關性

漫彥文 姚國良 張貝克

結直腸癌是下消化道常見的1種惡性腫瘤性疾病，是存在于結腸部位的腫瘤癌變，呈息肉狀和潰瘍性病灶。目前，對于結直腸癌的發(fā)病機制的研究也在不斷的深入，其發(fā)病機制具有復雜多樣性，多種生物特異性的細胞因子、生物標記蛋白等參與到結直腸癌患者的發(fā)病過程中[1]。雌激素相關受體α(estrogen related receptor alpha,ERRα)、雌激素相關受體β(estrogen related receptor β ERRβ)蛋白屬于核受體超家族中的兩個亞型，兩個亞型各自以不同的方式參與雌激素信號途徑。既往報道顯示[2]，ERR在控制細胞能量平衡、新陳代謝、生長和發(fā)育方面存在不同作用，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。在乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌及食管癌等癌癥腫瘤疾病中存在高表達，是多個癌癥腫瘤疾病的相關標志物。目前，關于ERRα、ERRβ在結直腸癌患者體內表達的研究相對較少[3]。為此，本研究中對結直腸癌患者的ERRα、ERRβ表達進行檢測，分析與患者臨床病理特征的關系，以期為結直腸癌的發(fā)病機制、診斷、病情評估、預后判斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

以2017年07至2020年07月期間河南科技大學第一附屬醫(yī)院收治的86例結直腸癌患者開展研究，納入標準：① 患者完善各項檢查后確診為結直腸癌，符合《結直腸癌肝轉移診斷和綜合治療指南》[4]中的相關診斷標準；② 患者均進行根治術治療，具有相應的手術治療指征；③ 均能獲得完整的癌組織和癌旁組織標本；④ 患者對研究內容知情并簽署書面協(xié)議書；⑤ 研究方案經河南科技大學第一附屬醫(yī)院倫理學委員會批準。排除標準：① 非結直腸癌惡性腫瘤疾?。虎?全身炎癥性疾?。虎?患者基礎資料、臨床檢測資料缺失或不完善的患者；④ 中途自愿退出本研究的患者。86例患者中男性47例、女性39例，年齡41～78歲，平均年齡(50.27±8.98)歲，腫瘤部位：結腸45例、直腸41例，病灶直徑3～9 cm，平均直徑(5.47±2.38)cm，病理分型：腫塊型29例、潰瘍型34例、浸潤型23例。

1.2 檢測方法

手術過程中采集患者的結直腸癌組織樣本、癌旁正常組織樣本約2～3 g，組織樣本經初步處理后以R2236A型多功能石蠟切片機(德國徠卡公司)進行切片，片厚5～10 μm，將切好的標本薄片置于DH-21型電熱恒溫鼓風培養(yǎng)箱(上海一恒科學儀器有限公司)中醫(yī)50 ℃～60 ℃進行烤片持續(xù)3～4 h，使其粘附在載玻片上?？酒瓿珊蠹尤肓姿釟涠c-磷酸二氫鈉緩沖液進行抗原修復處理后，并加入鼠抗人ERRα、ERRβ單克隆抗體后過夜。然后進行SP免疫組化分析檢測，參照SP試劑盒的說明書對各個組織標本進行免疫組化染色，SP試劑盒購自于上海撫生實業(yè)有限公司，應用Lumatas全自動免疫組化染色儀(福州邁新生物技術開發(fā)有限公司)觀察各組織標本的ERRα、ERRβ陽性率。陽性率判斷標準為：所觀察的視野中染色強度與陽性細胞數乘積分值作為標準，即按陽性細胞所占百分比<5%計為0分，5%～25%計為1分，26%～50%計為2分，51%～75%計為3分，>75%計為4分。按染色強度：無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項結果乘積大于3分判定為陽性表達[5]。將免疫組化分析儀設備調整為計數模式，對視野下的ERRα、ERRβ陽性細胞數進行計數統(tǒng)計，計算ERRα、ERRβ表達水平。

1.3 評價方法

統(tǒng)計對比患者結直腸癌及正常組織中的ERRα、ERRβ蛋白陽性表達率、表達水平。并對患者的臨床病理資料進行統(tǒng)計對比，分析探討ERRα、ERRβ蛋白表達與結直腸癌患者年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型、分期、淋巴結轉移、分化程度、血管浸潤狀態(tài)等臨床病理特征的關系。以Pearson檢驗對結直腸癌患者的ERRα與ERRβ蛋白表達水平的相關性進行分析。

1.4 數據分析

2 結果

2.1 癌組織和正常組織中ERRα、ERRβ陽性率比較

結直腸癌組織ERRα、ERRβ陽性率高于癌旁正常組織的陽性率分別為13.95%(12/86)、19.77%(17/86)，組間比較有顯著性差異(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織和正常組織中ERRα、ERRβ陽性率比較(例，%)

2.2 癌組織和正常組織ERRα、ERRβ表達水平比較

結直腸癌組織的ERRα、ERRβ的表達水平均高于癌旁正常組織的表達水平(P<0.05)，見表2。

表2 癌組織和正常組織ERRα、ERRβ表達水平比較個/LP)

2.3 ERRα、ERRβ表達與患者臨床病理特征的關系

ERRα、ERRβ表達與患者年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型等無關，而與患者分期、淋巴結轉移、分化程度、血管浸潤等有關(P<0.05)，見表3。

表3 ERRα、ERRβ表達與患者臨床病理特征的關系(例，%))

2.4 ERRα與ERRβ蛋白相關性分析

經Pearson檢驗分析，ERRα與ERRβ蛋白表達水平呈正相關性(γ=0.507,P=0.000)。

3 討論

隨著社會工作壓力的增加，不良生活習慣的增多，臨床結腸癌的診斷發(fā)病率逐年升高，有著龐大的發(fā)病人群，對社會危害性進一步加大。使得臨床對于結腸癌患者的治療研究的關注度在不斷提高，由于結腸癌患者在發(fā)病早期缺乏典型的癥狀，未能引起患者的高度重視，造成患者的早期確診難度較大，而隨著病情的進展多數患者確診時已處于結直腸癌的中晚期，對于患者的治療及病情緩解帶來不利影響。并且結直腸癌的發(fā)病隱匿，初期診斷難度大，確診時多處于中晚期，不利于患者后續(xù)治療過程中的開展[6-7]。目前關于結直腸癌的發(fā)生機制尚未得到系統(tǒng)的闡述，仍然未十分明確。對于結直腸癌在發(fā)病過程的機制研究也在不斷的深入進行，既往的報道中顯示多種生物學活性標記成分在結直腸癌患者病情進展中呈現(xiàn)異常表達，并且這種異常表達與患者癌癥病情的程度、病情進展及惡化結果有意者一定的關聯(lián)性。

在本研究中結合既往的臨床報道及本院的臨床研究實踐，對結直腸癌患者的ERRα、ERRβ蛋白表達情況進行檢測。結果顯示在結直腸癌患者中，癌組織中的ERRα、ERRβ蛋白陽性表達率、表達水平均高于癌旁正常組織。初步表明ERRα、ERRβ蛋白參與到結直腸癌的發(fā)病過程中，這與既往的Liang等[8]的臨床報道結果基本一致，進一步證實了ERRα、ERRβ蛋白參與了結直腸癌的病情進展過程。這是因為ERRα、ERRβ蛋白是雌激素受體，同時也是機體重要的轉錄因子，可參與機體的多種生物學過程。作為一種位點特異性轉錄調節(jié)因子，被證明通過直接蛋白質-蛋白質接觸與雌激素相互作用。ERRα、ERRβ蛋白的高表達導致雌激素信號通路的正常轉錄過程受到影響，并且還會上調機體的炎性反應狀態(tài)，使得機體的激素平衡和免疫功能的穩(wěn)態(tài)被打破，進而可能參與到結直腸癌的病情發(fā)生過程[9-10]。在進一步的ERRα、ERRβ表達與患者臨床病理特征的關系探討中，ERRα、ERRβ的表達率與患者的年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型等無關，而與患者的分期、淋巴結轉移、分化程度、血管浸潤等有關，表明ERRα、ERRβ蛋白的表達參與了結直腸癌的病情進展、分期、浸潤、轉移過程，是結直腸癌患者病情惡化的重要參與因素[11-12]。這可能與ERRα、ERRβ的高表，破壞正常的轉錄過程，使得腫瘤細胞的損傷DNA被修復，并能夠降低機體自身的免疫能力對癌細胞的清除作用，進而使得患者的結直腸癌細胞免遭巨噬細胞、T淋巴細胞、自然殺傷性細胞等免疫系統(tǒng)的清除，促進患者的癌癥病情加重，分期、浸潤和淋巴結轉移不斷惡化[13-14]。在ERRα與ERRβ蛋白相關性分析中，兩者間存在明顯的正相關性，初步表明ERRα、ERRβ蛋白在結直腸癌患者病情進展過程中協(xié)同發(fā)揮作用。

綜上所述，ERRα、ERRβ蛋白在結直腸癌患者中呈現(xiàn)高表達，并與患者的腫瘤病灶組織的浸潤、轉移、分期等不良預后臨床病理特征有相關性，兩者可能協(xié)同參與結直腸癌病情惡化的調控。通過對ERRα、ERRβ蛋白水平的檢測，可對結直腸癌患者的疾病診斷、病情評估、預后效果判斷提供參考。