ERRα、ERRβ蛋白在結(jié)直腸癌根治術(shù)患者中的表達(dá)水平及與病理的相關(guān)性

漫彥文 姚國良 張貝克

結(jié)直腸癌是下消化道常見的1種惡性腫瘤性疾病，是存在于結(jié)腸部位的腫瘤癌變，呈息肉狀和潰瘍性病灶。目前，對于結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制的研究也在不斷的深入，其發(fā)病機(jī)制具有復(fù)雜多樣性，多種生物特異性的細(xì)胞因子、生物標(biāo)記蛋白等參與到結(jié)直腸癌患者的發(fā)病過程中[1]。雌激素相關(guān)受體α(estrogen related receptor alpha,ERRα)、雌激素相關(guān)受體β(estrogen related receptor β ERRβ)蛋白屬于核受體超家族中的兩個(gè)亞型，兩個(gè)亞型各自以不同的方式參與雌激素信號途徑。既往報(bào)道顯示[2]，ERR在控制細(xì)胞能量平衡、新陳代謝、生長和發(fā)育方面存在不同作用，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌及食管癌等癌癥腫瘤疾病中存在高表達(dá)，是多個(gè)癌癥腫瘤疾病的相關(guān)標(biāo)志物。目前，關(guān)于ERRα、ERRβ在結(jié)直腸癌患者體內(nèi)表達(dá)的研究相對較少[3]。為此，本研究中對結(jié)直腸癌患者的ERRα、ERRβ表達(dá)進(jìn)行檢測，分析與患者臨床病理特征的關(guān)系，以期為結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制、診斷、病情評估、預(yù)后判斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

以2017年07至2020年07月期間河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的86例結(jié)直腸癌患者開展研究，納入標(biāo)準(zhǔn)：① 患者完善各項(xiàng)檢查后確診為結(jié)直腸癌，符合《結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移診斷和綜合治療指南》[4]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；② 患者均進(jìn)行根治術(shù)治療，具有相應(yīng)的手術(shù)治療指征；③ 均能獲得完整的癌組織和癌旁組織標(biāo)本；④ 患者對研究內(nèi)容知情并簽署書面協(xié)議書；⑤ 研究方案經(jīng)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 非結(jié)直腸癌惡性腫瘤疾??；② 全身炎癥性疾??；③ 患者基礎(chǔ)資料、臨床檢測資料缺失或不完善的患者；④ 中途自愿退出本研究的患者。86例患者中男性47例、女性39例，年齡41～78歲，平均年齡(50.27±8.98)歲，腫瘤部位：結(jié)腸45例、直腸41例，病灶直徑3～9 cm，平均直徑(5.47±2.38)cm，病理分型：腫塊型29例、潰瘍型34例、浸潤型23例。

1.2 檢測方法

手術(shù)過程中采集患者的結(jié)直腸癌組織樣本、癌旁正常組織樣本約2～3 g，組織樣本經(jīng)初步處理后以R2236A型多功能石蠟切片機(jī)(德國徠卡公司)進(jìn)行切片，片厚5～10 μm，將切好的標(biāo)本薄片置于DH-21型電熱恒溫鼓風(fēng)培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)中醫(yī)50 ℃～60 ℃進(jìn)行烤片持續(xù)3～4 h，使其粘附在載玻片上?？酒瓿珊蠹尤肓姿釟涠c-磷酸二氫鈉緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)處理后，并加入鼠抗人ERRα、ERRβ單克隆抗體后過夜。然后進(jìn)行SP免疫組化分析檢測，參照SP試劑盒的說明書對各個(gè)組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，SP試劑盒購自于上海撫生實(shí)業(yè)有限公司，應(yīng)用Lumatas全自動(dòng)免疫組化染色儀(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)觀察各組織標(biāo)本的ERRα、ERRβ陽性率。陽性率判斷標(biāo)準(zhǔn)為：所觀察的視野中染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞數(shù)乘積分值作為標(biāo)準(zhǔn)，即按陽性細(xì)胞所占百分比<5%計(jì)為0分，5%～25%計(jì)為1分，26%～50%計(jì)為2分，51%～75%計(jì)為3分，>75%計(jì)為4分。按染色強(qiáng)度：無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)結(jié)果乘積大于3分判定為陽性表達(dá)[5]。將免疫組化分析儀設(shè)備調(diào)整為計(jì)數(shù)模式，對視野下的ERRα、ERRβ陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)算ERRα、ERRβ表達(dá)水平。

1.3 評價(jià)方法

統(tǒng)計(jì)對比患者結(jié)直腸癌及正常組織中的ERRα、ERRβ蛋白陽性表達(dá)率、表達(dá)水平。并對患者的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對比，分析探討ERRα、ERRβ蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、血管浸潤狀態(tài)等臨床病理特征的關(guān)系。以Pearson檢驗(yàn)對結(jié)直腸癌患者的ERRα與ERRβ蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 癌組織和正常組織中ERRα、ERRβ陽性率比較

結(jié)直腸癌組織ERRα、ERRβ陽性率高于癌旁正常組織的陽性率分別為13.95%(12/86)、19.77%(17/86)，組間比較有顯著性差異(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織和正常組織中ERRα、ERRβ陽性率比較(例，%)

2.2 癌組織和正常組織ERRα、ERRβ表達(dá)水平比較

結(jié)直腸癌組織的ERRα、ERRβ的表達(dá)水平均高于癌旁正常組織的表達(dá)水平(P<0.05)，見表2。

表2 癌組織和正常組織ERRα、ERRβ表達(dá)水平比較個(gè)/LP)

2.3 ERRα、ERRβ表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

ERRα、ERRβ表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型等無關(guān)，而與患者分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、血管浸潤等有關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 ERRα、ERRβ表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(例，%))

2.4 ERRα與ERRβ蛋白相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson檢驗(yàn)分析，ERRα與ERRβ蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)性(γ=0.507,P=0.000)。

3 討論

隨著社會工作壓力的增加，不良生活習(xí)慣的增多，臨床結(jié)腸癌的診斷發(fā)病率逐年升高，有著龐大的發(fā)病人群，對社會危害性進(jìn)一步加大。使得臨床對于結(jié)腸癌患者的治療研究的關(guān)注度在不斷提高，由于結(jié)腸癌患者在發(fā)病早期缺乏典型的癥狀，未能引起患者的高度重視，造成患者的早期確診難度較大，而隨著病情的進(jìn)展多數(shù)患者確診時(shí)已處于結(jié)直腸癌的中晚期，對于患者的治療及病情緩解帶來不利影響。并且結(jié)直腸癌的發(fā)病隱匿，初期診斷難度大，確診時(shí)多處于中晚期，不利于患者后續(xù)治療過程中的開展[6-7]。目前關(guān)于結(jié)直腸癌的發(fā)生機(jī)制尚未得到系統(tǒng)的闡述，仍然未十分明確。對于結(jié)直腸癌在發(fā)病過程的機(jī)制研究也在不斷的深入進(jìn)行，既往的報(bào)道中顯示多種生物學(xué)活性標(biāo)記成分在結(jié)直腸癌患者病情進(jìn)展中呈現(xiàn)異常表達(dá)，并且這種異常表達(dá)與患者癌癥病情的程度、病情進(jìn)展及惡化結(jié)果有意者一定的關(guān)聯(lián)性。

在本研究中結(jié)合既往的臨床報(bào)道及本院的臨床研究實(shí)踐，對結(jié)直腸癌患者的ERRα、ERRβ蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示在結(jié)直腸癌患者中，癌組織中的ERRα、ERRβ蛋白陽性表達(dá)率、表達(dá)水平均高于癌旁正常組織。初步表明ERRα、ERRβ蛋白參與到結(jié)直腸癌的發(fā)病過程中，這與既往的Liang等[8]的臨床報(bào)道結(jié)果基本一致，進(jìn)一步證實(shí)了ERRα、ERRβ蛋白參與了結(jié)直腸癌的病情進(jìn)展過程。這是因?yàn)镋RRα、ERRβ蛋白是雌激素受體，同時(shí)也是機(jī)體重要的轉(zhuǎn)錄因子，可參與機(jī)體的多種生物學(xué)過程。作為一種位點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，被證明通過直接蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)接觸與雌激素相互作用。ERRα、ERRβ蛋白的高表達(dá)導(dǎo)致雌激素信號通路的正常轉(zhuǎn)錄過程受到影響，并且還會上調(diào)機(jī)體的炎性反應(yīng)狀態(tài)，使得機(jī)體的激素平衡和免疫功能的穩(wěn)態(tài)被打破，進(jìn)而可能參與到結(jié)直腸癌的病情發(fā)生過程[9-10]。在進(jìn)一步的ERRα、ERRβ表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系探討中，ERRα、ERRβ的表達(dá)率與患者的年齡、性別、腫瘤位置、病灶直徑、病理分型等無關(guān)，而與患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、血管浸潤等有關(guān)，表明ERRα、ERRβ蛋白的表達(dá)參與了結(jié)直腸癌的病情進(jìn)展、分期、浸潤、轉(zhuǎn)移過程，是結(jié)直腸癌患者病情惡化的重要參與因素[11-12]。這可能與ERRα、ERRβ的高表，破壞正常的轉(zhuǎn)錄過程，使得腫瘤細(xì)胞的損傷DNA被修復(fù)，并能夠降低機(jī)體自身的免疫能力對癌細(xì)胞的清除作用，進(jìn)而使得患者的結(jié)直腸癌細(xì)胞免遭巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞等免疫系統(tǒng)的清除，促進(jìn)患者的癌癥病情加重，分期、浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不斷惡化[13-14]。在ERRα與ERRβ蛋白相關(guān)性分析中，兩者間存在明顯的正相關(guān)性，初步表明ERRα、ERRβ蛋白在結(jié)直腸癌患者病情進(jìn)展過程中協(xié)同發(fā)揮作用。

綜上所述，ERRα、ERRβ蛋白在結(jié)直腸癌患者中呈現(xiàn)高表達(dá)，并與患者的腫瘤病灶組織的浸潤、轉(zhuǎn)移、分期等不良預(yù)后臨床病理特征有相關(guān)性，兩者可能協(xié)同參與結(jié)直腸癌病情惡化的調(diào)控。通過對ERRα、ERRβ蛋白水平的檢測，可對結(jié)直腸癌患者的疾病診斷、病情評估、預(yù)后效果判斷提供參考。