馬齒莧對(duì)非酒精性脂肪肝小鼠的肝臟保護(hù)作用及對(duì)脂代謝的影響

姚瑞強(qiáng)*

（山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院，山西 汾陽 032200）

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）臨床病理特征為肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積，發(fā)病機(jī)制尚未闡明，目前認(rèn)為NAFLD 發(fā)病與氧化應(yīng)激、脂代謝紊亂、炎性反應(yīng)失衡等相關(guān)[1]。NAFLD 可發(fā)展為嚴(yán)重肝臟疾病，甚至進(jìn)展為失代償期肝硬化，威脅患者生命健康，積極治療有必要性[2]。中西醫(yī)結(jié)合通過多途徑、多靶點(diǎn)治療NAFLD，可能達(dá)到較好療效[3]。馬齒莧是藥食同源的野生植物之一，具有清熱解毒、涼血止血等功效，富含黃酮類等化學(xué)成分，具有抗氧化應(yīng)激等功效，馬齒莧提取物在濕疹、炎癥性腸病等多種疾病治療中均有應(yīng)用[4]，且馬齒莧對(duì)于NAFLD 的治療雖有爭議也有一定功效[5]?；诖?，本研究就馬齒莧提取物對(duì)NAFLD 模型小鼠肝功能、脂代謝的影響展開分析，以評(píng)估馬齒莧在NAFLD 治療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

馬齒莧干樣粉碎，在70%乙醇中浸泡48 h，重復(fù)3 次，提取液減壓濃縮，經(jīng)D101 型大孔樹脂分離純化，得到馬齒莧提取液。

1.2 動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性小鼠，周齡6～8 周，體重18～20 g，購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK-（浙）2018-0012，動(dòng)物飼養(yǎng)于24±2℃、相對(duì)濕度43%～47%環(huán)境下，12 h 晝夜節(jié)律。本研究經(jīng)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審批。

1.3 方法

54 只小鼠按照體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組（12只）、模型組（12 只）、低劑量組（10 只）、中劑量組（10 只）、高劑量組（10 只），對(duì)照組僅給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組及低、中、高劑量組予以高脂飼料（60%脂肪+20%蛋白質(zhì)+20%碳水化合物）喂養(yǎng)；16 周末，隨機(jī)選取對(duì)照組及模型組各2 只小鼠處死，觀察NAFLD 形成情況，以肝組織病理切片示肝細(xì)胞腫脹、細(xì)胞內(nèi)存在脂滴空泡、伴明顯炎癥細(xì)胞浸潤為建模成功。建模成功后，低劑量組、中劑量組、高劑量組分別給予馬齒莧提取液0.18 g·kg-1、0.35 g·kg-1、0.70 g·kg-1灌胃，對(duì)照組及模型組給予等體積0.9%生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃4 w。末次灌胃后禁食12 h，不禁水，稱取動(dòng)物體重后麻醉后眼眶采血，經(jīng)3500 r·min-1離心10 min，取上層血清，使用全自動(dòng)血液分析儀檢測肝功能[谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）]及脂代謝指標(biāo)[總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）；并在麻醉狀態(tài)下取全肝，稱肝濕重，取肝左葉及肝右葉中部組織，石蠟包埋后，經(jīng)蘇木精-伊紅染色，觀察肝組織切片，參考《美國國立衛(wèi)生研究院NASH 臨床研究網(wǎng)病理工作組指南》[6]計(jì)算NAFLD 活動(dòng)度積分；提取肝組織50mg，在液氮中研磨，利用熒光定量聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測肝組織Keap1-核因子E2 相關(guān)因子2（Keap1-nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）mRNA，采用紫外光凝膠成像系統(tǒng)攝像及2-ΔΔCt 法記錄各基因相對(duì)表達(dá)量；并提取肝組織200 mg，加入9 倍體積的生理鹽水，制備成10%肝組織勻漿，經(jīng)2500 r·min-1離心10 min，取上層清液，采用酶聯(lián)免疫分析法測定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 小鼠肝濕重、NAFLD 活動(dòng)度及肝功能指標(biāo)比較

16 周末見模型組小鼠均與對(duì)照組相比，建模成功，各組病理圖片見圖1。與模型組相比，各劑量組小鼠肝濕重、NAFLD 活動(dòng)度及血清ALT、AST 水平均降低，其中高劑量組更為顯著（P＜0.05），見圖2。

圖1 各組病理圖片（×200）

圖2 5 組小鼠肝濕重、NAFLD 活動(dòng)度及肝功能指標(biāo)比較()

2.2 小鼠脂代謝指標(biāo)比較

與模型組相比，各劑量組小鼠血清TC、TG、LDL-C 水平均降低，其中高劑量組更為顯著（P＜0.05）。見圖3。

圖3 5 組小鼠脂代謝指標(biāo)比較()

2.3 5 組小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

與對(duì)照組相比，造模成功。與模型組相比，各劑量組小鼠肝組織Nrf2 mRNA 相對(duì)表達(dá)量及肝組織勻漿SOD 水平升高，其中高劑量組更為顯著（P＜0.05）；各劑量組小鼠肝組織勻漿MDA 水平降低，其中高劑量組更為顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 5 組小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較()

表1 5 組小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較()

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與低劑量組比較，△P＜0.05；與中劑量組比較，○P＜0.05。

3 討論

長期高脂飲食可引起脂代謝紊亂，脂代謝紊亂是NAFLD 重要的發(fā)病基礎(chǔ)，肝細(xì)胞脂肪堆積是NAFLD 主要病理學(xué)特征[7]。本研究中，模型組及各劑量組小鼠血清各種脂代謝相關(guān)指標(biāo)均顯著高于對(duì)照組，且病理圖片也顯示模型組肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重且大量脂質(zhì)堆積，提示本研究建模成功。病理圖片可見，相較于模型組，高劑量組肝細(xì)胞損傷及脂質(zhì)堆積情況明顯減輕，而高劑量組小鼠血清TC、TG、LDL-C 水平顯著低于模型組，小鼠肝濕重、NAFLD 活動(dòng)度及血清ALT、AST 均明顯改善，提示馬齒莧對(duì)調(diào)節(jié)NAFLD 脂代謝有利，能減輕肝細(xì)胞脂質(zhì)堆積，控制病情發(fā)展。閆長虹[8]等發(fā)現(xiàn)，脂代謝紊亂的糾正是治療NAFLD的關(guān)鍵，肝細(xì)胞脂質(zhì)堆積減少，肝損傷方可減輕，NAFLD 病理進(jìn)程才能得到抑制。馬齒莧具有顯著抗氧化及調(diào)脂作用，可減輕肝細(xì)胞炎癥，使胞質(zhì)內(nèi)脂滴縮小，對(duì)減輕肝組織損傷有利；馬齒莧富含大量維生素E，可加速TC 吸收，促進(jìn)脂質(zhì)排泄，發(fā)揮降脂作用；馬齒莧中的主要成分—黃酮也能抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少脂質(zhì)堆積，達(dá)到降脂效果[9,10]；這可能是馬齒莧在NAFLD 治療中發(fā)揮調(diào)脂作用的理論基礎(chǔ)。

脂質(zhì)堆積可激活氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激由能刺激炎癥增強(qiáng)，促進(jìn)肝損傷，加劇NAFLD 病變，由氧化應(yīng)激引起的肝臟炎性狀態(tài)，是NAFLD 病理改變的重要環(huán)節(jié)[11]。在調(diào)脂的同時(shí)，控制氧化應(yīng)激，也是治療NAFLD 的關(guān)鍵。有研究同樣表明，馬齒莧中富含的黃酮可發(fā)揮較強(qiáng)的抗氧化作用，能清除自由基，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)[12]。本研究證實(shí)，高劑量組肝組織Nrf2 mRNA 相對(duì)表達(dá)量及肝組織勻漿SOD 高于模型組，肝組織勻漿MDA 水平顯著低于模型組，提示馬齒莧提取液在本實(shí)驗(yàn)中能發(fā)揮抗氧化作用，小鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)得到有效控制。

綜上所述，馬齒莧可控制NAFLD 病理進(jìn)程，其可能的作用機(jī)制為調(diào)節(jié)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)、調(diào)控脂代謝紊亂，減輕肝損傷。