缺血性腦卒中神經功能缺損與血小板內皮聚集受體1和前列腺素內過氧化物合酶1基因多態(tài)性的關聯(lián)分析

吳慧，繆陽，陳迎平，祁峰，卞海林

近年來，隨著經濟的發(fā)展和生活方式的改變， 腦卒中發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢，且已成為我國的頭號死因，其中缺血性腦卒中占我國腦卒中的69.6%～70.8%。腦血管狹窄或粥樣硬化等原因可導致缺血性腦卒中病人出現(xiàn)不同程度的神經功能缺損。阿司匹林具有抗血小板聚集的作用，在缺血性腦卒中的預防和治療中發(fā)揮著舉足重輕的作用。研究顯示，阿司匹林能夠有效減輕卒中的初始嚴重程度并改善出院時的預后。然而，約有5%～65%病人可發(fā)生不同程度的阿司匹林抵抗，導致阿司匹林療效降低，在應用阿司匹林進行二級預防的病人中，兩年后血管事件復發(fā)的風險可高達18%。阿司匹林抵抗的影響因素眾多，其中相關基因多態(tài)性被認為是導致這一現(xiàn)象的重要原因，如環(huán)氧合酶（COX-1/COX-2）基因的多態(tài)性、血小板糖蛋白Ⅰa/Ⅱa受體（GPⅠa/Ⅱa）基因多態(tài)性、血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）基因多態(tài)性、二磷酸腺苷（ADP）受體P2Y1、P2Y12基因多態(tài)性等。因此，本研究考察阿司匹林抵抗相關基因血小板內皮聚集受體1（PEAR1）和前列腺素內過氧化物合酶1（PTGS1）多態(tài)性與缺血性腦卒中神經功能缺損之間是否存在關聯(lián)，以期為臨床抗血小板治療方案制定與調整提供參考，減少缺血性腦卒中發(fā)生及復發(fā)的風險，并在一定程度上預測缺血性腦卒中的神經功能缺損。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年10月至2019年12月鹽城市第一人民醫(yī)院收治的缺血性腦卒中病人的臨床資料，按照納入標準和排除標準，入組病人147例。納入標準：①入組病例經影像學檢查（CT或MR）確診為缺血性腦卒中；②血小板計數(shù)100×10/L～400×10/L之間。排除標準：①短暫性腦缺血發(fā)作；②對阿司匹林過敏；③凝血功能異常；④近期手術者；⑤惡性腫瘤或血液系統(tǒng)疾??；⑥嚴重肝腎功能不全病人。入組病人入院時采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分進行病人神經功能缺損程度的評定。根據(jù)病人的NIHSS評分分為輕癥組和中重癥組；輕癥組病人65例，NIHSS評分0～4分，中重癥組病人82例，NIHSS評分5～40分，兩組病人基線情況差異無統(tǒng)計學意義（

P

＞0.05），具有可比性，詳見表1。病人或其近親屬對本研究知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 儀器與試劑

儀器：全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)（型號SLAN-96S，上海宏石醫(yī)療科技有限公司）。試劑：測序反應通用試劑盒—阿司匹林用藥相關基因檢測（西安天隆科技有限公司）。

1.3 基因檢測方法

采集兩組病人外周靜脈血2～3 mL，置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，應用實時熒光定量PCR檢測系統(tǒng)進行檢測。將待測樣本渦旋混勻后，取10 μL加入通用稀釋液中。取2 μL稀釋好的待測樣本、陽性質控品、陰性質控品，分別加入反應管中，37℃溫浴3 min后立即6 000 rpm離心40 s，再次渦旋混勻后6 000 rpm離心5 s，并移至檢測區(qū)進行檢測。

2 結果

2.1 病人一般資料

納入研究147例，輕癥組65例，中重癥組82例，兩組性別、體質量指數(shù)（BMI）、是否飲酒、高血壓患病率差異無統(tǒng)計學意義（

P

＞0.05），提示性別、BMI、是否飲酒、有無高血壓等不影響缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度；兩組年齡、吸煙史、糖尿病患病率差異有統(tǒng)計學意義（

P

＜0.05），提示病人年齡、吸煙、糖尿病對缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度存在影響。見表1。

表1 缺血性腦卒中147例一般資料

2.2 兩組病人檢驗指標比較

通過對兩組病人的相關檢驗指標進行比較發(fā)現(xiàn)，兩組病人總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血小板計數(shù)、同型半胱氨酸等指標差異無統(tǒng)計學意義（

P

＞0.05），而空腹血糖、D-二聚體等指標差異有統(tǒng)計學意義（

P

＜0.05），提示空腹血糖、D-二聚體等指標可影響缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度，詳見表2。

表2 缺血性腦卒中147例檢驗指標

2.3 阿司匹林抵抗相關基因位點多態(tài)性分布及Hardy-Weinberg平衡檢驗

147例病人中，PEAR1（G＞A）基因野生型（GG）58例，突變雜合型（GA）71例，突變純合型（AA）18例，PEAR1 A等位基因頻率為36.39%。PTGS1（A＞G）基因野生型（AA）57例，突變雜合型（AG）74例，突變純合型（GG）16例，PTGS1 G等位基因頻率為36.05%，PEAR1（G＞A）和PTGS1（A＞G）等位基因頻率符合Hardy-Weinberg平衡，提示所選樣本具有群體代表性，詳見表3。

表3 缺血性腦卒中147例阿司匹林抵抗相關基因位點多態(tài)性分布及Hardy-Weinberg平衡檢驗

2.4 兩組病人PEAR1、PTGS1基因多態(tài)性比較

中重癥組PEAR1基因突變率高于輕癥組（

P

＜0.05），PEAR1基因攜帶A等位基因頻率分別為28.46%、42.68%，差異有統(tǒng)計學意義（

P

＜0.05），提示PEAR1基因攜帶A等位基因可影響缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度。兩組的PTGS1基因攜帶A等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義（

P

＞0.05）。見表4。

表4 缺血性腦卒中147例PEAR1、PTGS1基因多態(tài)性比較/例（%）

2.5 logistic回歸分析

將上述研究中差異有統(tǒng)計學意義的影響因素，如年齡、吸煙、糖尿病、空腹血糖、D-二聚體、PEAR1基因A等位基因納入logistic回歸方程。通過多因素分析發(fā)現(xiàn)，年齡、吸煙、空腹血糖、PEAR1基因攜帶A等位基因是缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度的危險因素，詳見表5。上述研究結果提示，缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度與PEAR1基因攜帶A等位基因存在相關性。

表5 缺血性腦卒中147例神經缺損嚴重程度的多因素回歸分析

3 討論

阿司匹林廣泛用于心腦血管疾病的一級預防和二級預防，在各國指南中均占據(jù)著重要地位。阿司匹林是缺血性腦卒中的二級預防的基石用藥，它能夠有效降低高危病人發(fā)生缺血性腦卒中事件的風險和缺血性腦卒中病人再發(fā)卒中事件的風險。然而，有一部分病人存在阿司匹林抵抗，致使阿司匹林的效應減弱。研究顯示，阿司匹林抵抗病人發(fā)生缺血性腦卒中的死亡率、腦血管事件再發(fā)風險均高于阿司匹林敏感病人。Oh等研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林抵抗與缺血性腦卒中嚴重程度及梗死體積相關。導致阿司匹林抵抗的影響因素眾多，如病人依從性、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、基因多態(tài)性、藥物相互作用等，其中基因多態(tài)性是一項重要因素。目前，研究較多的基因包括環(huán)氧合酶-1（COX-1）、環(huán)氧合酶-2（COX-2）、血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）、血小板糖蛋白Ⅰa/Ⅱa（GPⅠa/Ⅱa）膠原受體、P2Y1和P2Y12基因多態(tài)性等。本研究中考察PEAR1、PTGS1基因多態(tài)性與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度之間是否存在關聯(lián)。

既往研究顯示，PEAR1基因多態(tài)性與阿司匹林抵抗存在相關性，Würtz等研究發(fā)現(xiàn)，PEAR1基因攜帶A等位基因的病人血小板聚集能力下降、血小板活化增加，發(fā)生心血管終點事件的風險更高。Xu等研究發(fā)現(xiàn)，在中國人群中PEAR1基因多態(tài)性可增加心血管不良事件的發(fā)生風險。有研究顯示，PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中病人阿司匹林抵抗密切相關。Zhao等研究發(fā)現(xiàn)，在中國人群中PEAR1基因多態(tài)性與缺血性腦卒中復發(fā)獨立相關。研究顯示，中國人群中PEAR1基因A等位基因突變頻率為0.376，本研究中，PEAR1基因A等位基因突變頻率為0.364，與既往研究結論一致。本研究發(fā)現(xiàn)，兩組病人PEAR1基因型分布差異存在統(tǒng)計學意義（

P

＜0.05），且PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關（

P

＜0.05）。這可能與A等位基因致血小板活化增強有關；此外，PEAR1多表達于內皮，其基因多態(tài)性影響內皮功能相關。有研究認為PTGS1基因多態(tài)性與阿司匹林抵抗相關，但尚存在爭議。本研究中未發(fā)現(xiàn)PTGS1基因多態(tài)性與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關（

P

＞0.05）。本研究中，單因素分析發(fā)現(xiàn)年齡、吸煙、糖尿病、空腹血糖、D-二聚體、PEAR1基因A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關。經logistic回歸分析后，年齡、吸煙、空腹血糖、PEAR1基因攜帶A等位基因為缺血性腦卒中神經功能缺損的危險因素（

P

＜0.05），而糖尿病、D-二聚體則被排除。研究表明，年齡是缺血性腦卒中不良預后的危險因素。隨著病人年齡增長，生理功能減退，多合并高血壓、糖尿病等基礎疾病，動脈粥樣硬化發(fā)生率高均可增加缺血性腦卒中神經功能缺損的風險。無論有無糖尿病史，高血糖在缺血性腦卒中病人中均較常見。高血糖可導致血管內皮功能損傷，加重缺血后的腦組織損傷，致使缺血性腦卒中梗死體積較大和神經功能缺損。糖尿病、D-二聚體等因素被排除可能與本研究樣本量偏少有關。

綜上，本研究提示PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關。本研究的局限性在于樣本量有限，尚需大樣本多中心研究進一步證實。