雙螺桿擠出技術(shù)制備雙氯芬酸鈉腸溶制劑的研究

王艷，袁夢(mèng)，夏毓龍，曹杰，柯學(xué)（中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系江蘇省納米藥物制備與生物學(xué)評(píng)價(jià)公共服務(wù)中心，南京 210009）

雙螺桿擠出制粒（TSG）是在外加黏合劑或者潤(rùn)濕劑的條件下，利用雙螺桿擠出機(jī)對(duì)粉體進(jìn)行濕法制粒的工藝[1]。雙螺桿擠出機(jī)利用不同形狀的模塊元件進(jìn)行組裝，形成不同區(qū)域，可以實(shí)現(xiàn)物料的輸送、擠壓、捏合與剪切，從而制備出顆粒。TSG 的一般過(guò)程如圖1所示。首先，物料通過(guò)喂料口進(jìn)入輸送區(qū)，繞兩根螺桿呈螺旋“∞”形沿軸向向前輸送，蠕動(dòng)泵向C1 區(qū)泵入黏合劑/潤(rùn)濕劑，在此處形成結(jié)構(gòu)松散、粒徑較大的潤(rùn)濕團(tuán)塊[2]；團(tuán)塊被推進(jìn)到C2 區(qū)，此處的捏合塊對(duì)潤(rùn)濕團(tuán)塊進(jìn)行剪切、壓縮和反復(fù)捏合，形成粒徑較小、密度和硬度較大的顆粒[3-4]；隨后進(jìn)入C3 區(qū)，由于顆粒表面被黏合劑/潤(rùn)濕劑潤(rùn)濕[5]，故可以黏結(jié)少量細(xì)粉，顆粒粒徑增大。進(jìn)入C4 區(qū)域后，顆粒再次受到捏合塊的剪切、壓縮和捏合作用，顆粒粒徑變小、密度和硬度進(jìn)一步增大，最終經(jīng)過(guò)C5 區(qū)域的在線烘干后離開腔體。不同擠出機(jī)的模塊區(qū)域有所不同，一般過(guò)程大致如此。

與傳統(tǒng)的濕法制粒技術(shù)相比，該工藝具有可連續(xù)式生產(chǎn)、藥品質(zhì)量可控、提高處方靈活性、減少原料藥損耗以及利于產(chǎn)品放大生產(chǎn)等諸多優(yōu)點(diǎn)[3]。因此近年來(lái)愈發(fā)受到制藥企業(yè)的關(guān)注。

雙氯芬酸鈉是非甾體抗炎藥的典型代表藥物，常用于各類輕中度急慢性疼痛的治療[6]。其主要不良反應(yīng)發(fā)生在胃腸道，表現(xiàn)為惡心、腹瀉、腹痛、便秘、胃不適等，其中少數(shù)患者可出現(xiàn)胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃黏膜出血、穿孔等[7]。目前口服市售產(chǎn)品主要為腸溶片、腸溶膠囊、緩釋片、緩釋膠囊。其中腸溶制劑多數(shù)是通過(guò)片芯或微丸包腸衣的方式來(lái)降低藥物的不良反應(yīng)[8-10]，工藝復(fù)雜、成本較高。故本文以雙氯芬酸鈉為模型藥物，以Eudragit 腸溶性材料[11]為主要輔料，考察TSG 技術(shù)制備雙氯芬酸鈉顆粒的可行性，而后壓制成片，通過(guò)溶出和體內(nèi)藥效學(xué)分析自制制劑是否能實(shí)現(xiàn)在胃內(nèi)不溶、腸內(nèi)釋放的效果，以期在不進(jìn)行腸溶包衣的情況下實(shí)現(xiàn)藥物腸溶。

1 材料

1.1 試藥

雙氯芬酸鈉原料藥（純度≥99%，河南明哲生物科技有限公司）；雙氯芬酸鈉腸溶片（商品名：扶他林，規(guī)格：25 mg，批號(hào)：X1195，北京諾華制藥有限公司）；吲哚美辛（純度≥99.8%，大連美侖生物科技有限公司）；Eudragit L100-55、Eudragit L100（贏創(chuàng)德固賽中國(guó)投資有限公司）；乳糖（Granulac 200，德國(guó)美劑樂公司）；無(wú)水乙醇（上海泰坦科技股份有限公司）；微晶纖維素（VIVAPUR 101，德國(guó)JRS 公司）；磷酸二氫鉀（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；氫氧化鈉（西隴科學(xué)股份有限公司）；甲醇、乙腈（美國(guó)TEDIA 公司）；其余試劑均為市售分析純。

1.2 儀器

BSM-2200.2 電子天平（百分之一，上海卓精電子科技有限公司）；BSA124S-CW 電子天平（萬(wàn)分之一，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；HBD-30 料斗混合機(jī)（創(chuàng)志機(jī)電科技發(fā)展股份有限公司）；熱熔擠出機(jī)（南京科爾克擠出裝備有限公司）；HL-2S 恒流泵（上海滬西分析儀器廠有限公司）；DHG 9240A 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；UV1800 紫外可見分光光度計(jì)、全自動(dòng)溶出儀（SNTR-8400A 溶出度儀、SSAS-6000 自動(dòng)取樣器）、高效液相色譜儀（LC-20AT 高壓泵、SPD-20A 紫外檢測(cè)器，日本島津公司）；pB-10 型pH 計(jì)（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；XW-80A 渦旋混合器（上海醫(yī)大儀器有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

新西蘭白兔6 只（約1.5 kg/只），雄性，普通級(jí)[南京市江寧區(qū)青龍區(qū)動(dòng)物繁殖場(chǎng)，許可證號(hào)：SCXK（蘇）2017-0011，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合動(dòng)物倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)]。

2 方法與結(jié)果[12-15]

2.1 雙螺桿擠出制備腸溶顆粒的工藝篩選

將雙氯芬酸鈉、腸溶材料和填充劑分別過(guò)60目篩，按照一定的質(zhì)量比混合均勻。將上述混合物加入飼粉料斗中，設(shè)定飼粉螺桿轉(zhuǎn)速和擠出螺桿轉(zhuǎn)速后，開始擠出操作。待物料從出料口流出后，開啟蠕動(dòng)泵，以一定速率將潤(rùn)濕劑乙醇泵入粉體中，開始制粒。棄去前3 min 的擠出物，開始收集，并過(guò)20 目篩濕整粒，濕顆粒放入烘箱60 ℃干燥。待顆粒烘干后，用20 目篩干整粒，即得雙氯芬酸鈉腸溶顆粒。

以顆粒外觀、粉體流動(dòng)性（休止角、堆密度和振實(shí)密度、Carr’s 指數(shù)和Hausner 比）、粒徑分布（將大于100 目篩的粉體定義為顆粒，小于100 目篩的粉體定義為粉末）為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.1.1 潤(rùn)濕劑加入速度篩選 固定擠出螺桿轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，飼粉螺桿轉(zhuǎn)速為2 r·min－1，考察潤(rùn)濕劑加入速度（15、20、25、30、35 r·min－1）。

粒徑分布結(jié)果見圖2A，結(jié)果顯示隨著潤(rùn)濕劑乙醇加入速度逐漸提高，顆粒量逐漸增加、細(xì)粉量逐漸減少，但片狀顆粒會(huì)增加；當(dāng)轉(zhuǎn)速為15和20 r·min－1時(shí)，部分粉末未被充分潤(rùn)濕，導(dǎo)致細(xì)粉量增多，即使粉末被潤(rùn)濕，外觀也較為疏松；當(dāng)轉(zhuǎn)速為25 r·min－1時(shí)，顆粒大都為類圓形，大小適中且分布較為均勻；當(dāng)轉(zhuǎn)速增加至35 r·min－1時(shí)出現(xiàn)過(guò)度潤(rùn)濕，幾乎均為片狀顆粒，且硬度大難以過(guò)篩整粒。

同時(shí)，隨著潤(rùn)濕劑加入速度不斷提高，顆粒的各項(xiàng)流動(dòng)性逐漸改善。當(dāng)潤(rùn)濕劑加入速度提高到25 r·min－1時(shí)，Carr’s 指數(shù)小于16%，Hausner 比小于1.2，且休止角小于40°，表明粉體流動(dòng)性良好。綜合各指標(biāo)評(píng)價(jià)結(jié)果，25 r·min－1是較為適宜的潤(rùn)濕劑加入速度。

2.1.2 擠出螺桿轉(zhuǎn)速 按照“2.1”項(xiàng)下工藝進(jìn)行操作，固定潤(rùn)濕劑加入速度為25 r·min－1，飼粉螺桿轉(zhuǎn)速為2 r·min－1，考察擠出螺桿轉(zhuǎn)速（25、50、100、150 r·min－1）。

粒徑分布結(jié)果見圖2B，當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速為25 r·min－1時(shí)，物料輸送速度很慢，且捏合塊對(duì)粉體的捏合、壓縮、剪切作用很弱，乙醇不能充分與粉體結(jié)合，出現(xiàn)部分粉體過(guò)度潤(rùn)濕、部分粉體仍為細(xì)粉的不均勻情況。當(dāng)轉(zhuǎn)速提高到50 r·min－1，粒徑分布不均的現(xiàn)象有所改善，但仍明顯觀察到大顆粒與小顆粒。在轉(zhuǎn)速達(dá)到100 r·min－1時(shí)，捏合塊的剪切捏合作用明顯加強(qiáng)，基本實(shí)現(xiàn)了乙醇與粉體間的充分混合，所制得的顆粒粒度較為適宜。但當(dāng)轉(zhuǎn)速進(jìn)一步提高到150 r·min－1，捏合塊的捏合擠壓作用過(guò)于強(qiáng)烈，被乙醇潤(rùn)濕后誘發(fā)了黏性的粉體在捏合區(qū)域內(nèi)被反復(fù)剪切、壓縮、捏合，發(fā)生過(guò)度制粒，形成大粒徑、高硬度的顆粒團(tuán)塊。綜合考慮，較優(yōu)的擠出螺桿轉(zhuǎn)速為100 r·min－1。

2.1.3 飼粉螺桿轉(zhuǎn)速 按照“2.1”項(xiàng)下工藝進(jìn)行操作，固定潤(rùn)濕劑加入速度為25 r·min－1，擠出螺桿轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，考察飼粉螺桿轉(zhuǎn)速（1、2、3 和4 r·min－1）。

粒徑分布結(jié)果見圖2C，當(dāng)轉(zhuǎn)速為1 r·min－1時(shí)，飼粉速度慢，生產(chǎn)效率低，同時(shí)粉末被乙醇充分潤(rùn)濕，顆粒粒徑大，并有大顆粒及片狀顆粒產(chǎn)生；當(dāng)轉(zhuǎn)速為2 和3 r·min－1時(shí)，粉體與乙醇混勻混合，顆粒粒徑減小，細(xì)粉量少，粒徑分布基本相似；飼粉螺桿轉(zhuǎn)速提高為4 r·min－1時(shí)，單位體積內(nèi)粉末量較大，部分粉末未被潤(rùn)濕直接流出，導(dǎo)致細(xì)粉過(guò)多，并在出料口處出現(xiàn)靜電吸附現(xiàn)象。即轉(zhuǎn)速在2、3 r·min－1時(shí)，可生產(chǎn)出較為適宜的顆粒。這兩組轉(zhuǎn)速下顆粒的Carr’s 指數(shù)均小于16%、Hausner 比值均不超過(guò)1.2、休止角均小于40°，綜合考慮，確定飼粉螺桿的最優(yōu)轉(zhuǎn)速為2 r·min－1。

圖2 不同因素對(duì)腸溶顆粒粒徑分布的影響Fig 2 Effect of different factors on particle size of enteric coated granules

2.2 腸溶制劑處方篩選

2.2.1 溶出度檢測(cè)方法 參考《中國(guó)藥典》2015年版四部雙氯芬酸鈉腸溶制劑溶出度測(cè)定方法[12]并改進(jìn)，建立溶出度檢測(cè)方法如下：

取本品（相當(dāng)于雙氯芬酸鈉25 mg），照溶出度與釋放度測(cè)定法（通則0931 第一法），以0.1 mol·L－1鹽酸溶液750 mL 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r·min－1，溫度為（37±0.5）℃，依法操作，分別于10、20、30、45、60、90 和120 min時(shí)，取溶液10 mL，并向杯內(nèi)補(bǔ)充等量同溫的0.1 mol·L－1鹽酸溶液。取出的液體經(jīng)0.45 μm 水系濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為各供試品溶液。酸中溶出2 h 后，立即加入預(yù)熱至（37±0.5）℃的0.2 mol·L－1磷酸鈉溶液250 mL，混勻（必要時(shí)用2 mol·L－1的氫氧化鈉溶液或2 mol·L－1的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至6.8），轉(zhuǎn)速不變，分別于繼續(xù)溶出后的5、10、15、20、30、45、60 min 時(shí)，取溶液10 mL，經(jīng)0.45 μm 水系濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，同時(shí)向溶出杯內(nèi)補(bǔ)充等量同溫的pH 6.8 緩沖溶液（0.1 mol·L－1鹽酸溶液和0.2 mol·L－1磷酸鈉溶液，按3∶1 混合均勻，必要時(shí)用2 mol·L－1的氫氧化鈉溶液或2 mol·L－1的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至6.8）。

另配制雙氯芬酸鈉在0.1 mol·L－1鹽酸溶液和pH 6.8 PBS 緩沖溶液中的對(duì)照品溶液，質(zhì)量濃度均為10 μg·mL－1。取各供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在276 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量各溶液的吸光度，并計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度。

2.2.2 處方組成 固定腸溶顆粒中雙氯芬酸鈉的含藥量為25%，對(duì)主藥與腸溶材料的比例、腸溶材料的型號(hào)、填充劑的類型與比例進(jìn)行考察。腸溶顆粒的處方組成見表1。其中腸溶材料分別選擇丙烯酸樹脂Eudragit L100-55 和Eudragit L100，填充劑分別選擇乳糖（Lac）、微晶纖維素（MCC）及其混合物，采用“2.1”項(xiàng)下方法制備雙氯芬酸鈉腸溶顆粒。

表1 雙氯芬酸鈉腸溶顆粒處方組成(%)Tab 1 Composition of diclofenac sodium enteric granules (%)

將各處方所得到的腸溶顆粒與片劑常用輔料（如填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑和助流劑等，不含腸溶性材料）混合均勻，采用8 mm 沖頭壓片，片重220 mg，得到規(guī)格為25 mg 的雙氯芬酸鈉片。采用“2.2.1”項(xiàng)下方法考察片劑的溶出行為，結(jié)果見圖3。

2.2.3 主藥與腸溶材料的比例 調(diào)整主藥與腸溶材料Eudragit L100-55 的質(zhì)量比分別為3∶1、2∶1 和1∶1（即處方R1、R2 和R3），所制備片劑的溶出度測(cè)定結(jié)果見圖3A，在0.1 mol·L－1鹽酸溶液120 min 內(nèi)，觀察到3 種片劑體積膨脹但不崩解，片劑表層的部分顆粒漂浮在介質(zhì)中幾乎不溶解，溶出度均未超過(guò)2%。而在pH 6.8 PBS 溶液中，漂浮的顆粒首先溶解，片劑逐漸溶蝕。其中R1 溶出最快，30 min 時(shí)累積溶出度接近100%；R2 在45 min 溶出超過(guò)85%，60 min 時(shí)藥物基本完全溶出；R3 溶出最慢，60 min 時(shí)累積溶出度僅為80%，說(shuō)明隨Eudragit L100-55 用量增加，雙氯芬酸鈉的釋放速度明顯降低。

2.2.4 腸溶材料的型號(hào) 腸溶材料分別選擇Eudragit L100-55 和Eudragit L100（即處方R2 和R4），所制備片劑的溶出度測(cè)定結(jié)果見圖3B。在0.1 mol·L－1鹽酸溶液120 min 內(nèi)，2 種片劑的溶出度均未超過(guò)2%；而在pH 6.8 PBS 溶液中，R2 片劑的釋放略高于R4。由于Eudragit L100-55 在pH 5.5 以上溶解；Eudragit L100 則在pH 6.0 以上溶解，因此在pH 6.8 PBS 溶液中Eudragit L100-55 更快溶解，出現(xiàn)微小差異。

2.2.5 填充劑篩選 分別選擇乳糖、微晶纖維素及兩者1∶1 的混合物（即處方中R2、R5 和R6）制備腸溶顆粒，所得片劑的溶出度測(cè)定結(jié)果見圖3C。3 種片劑在酸性介質(zhì)中120 min 的溶出度均未超過(guò)2%；但在pH 6.8 PBS 介質(zhì)中的溶出度差異較為明顯，R2 的溶出度明顯高于R5 和R6，45 min 時(shí)累積溶出度接近100%，而R6 僅為55%左右，R5 不超過(guò)25%，說(shuō)明疏水性微晶纖維素會(huì)阻礙雙氯芬酸鈉腸溶顆粒的溶出。

這可能是因?yàn)殡S著腸溶材料Eudragit L100-55的溶解，顆粒中的藥物向外釋放，此時(shí)，水溶性乳糖比疏水性微晶纖維素更快溶解[13-14]，在顆粒中產(chǎn)生較多孔隙，加快了水分的滲入，因此藥物的溶出速度明顯加快，溶出程度隨之增強(qiáng)；而疏水性微晶纖維素則更可能在顆粒中膨脹，有可能阻礙Eudragit L100-55 的溶解，導(dǎo)致溶出速度和溶出程度的下降。

2.2.6 硬度篩選 基于前述已經(jīng)確定的處方，對(duì)壓片硬度進(jìn)行考察，分別選擇30～50 N、50～70 N 和70～90 N 3 種硬度進(jìn)行壓片，考察各組片劑的片重差異、脆碎度和溶出情況。

根據(jù)表2可知，在3 種硬度條件下，片重差異限度均符合藥典規(guī)定；且脆碎度均未超過(guò)1%，亦無(wú)斷裂、龜裂及粉碎的片劑，表明在篩選的片劑硬度范圍內(nèi)，硬度對(duì)雙氯芬酸鈉腸溶片的片重差異和脆碎度不產(chǎn)生影響。

表2 不同硬度自制片片重差異及脆碎度Tab 2 Weight difference and brittleness of self-made tablets with different hardness

由圖3D 可知，在酸性介質(zhì)中，硬度越低，藥物的釋放量逐漸升高，但即使如此，3 種片劑120 min 時(shí)溶出仍未超過(guò)10%；在pH 6.8 中，低硬度組（30～50 N）5 min 時(shí)累積溶出度高達(dá)65%，25 min 藥物即完全釋放；中硬度組（50～70 N）呈現(xiàn)緩慢釋藥的趨勢(shì)，45 min 時(shí)累積溶出度超過(guò)90%，60 min 時(shí)藥物基本釋放完全；而高硬度組（70～90 N）溶出速度最慢，45 min 時(shí)溶出尚未達(dá)到75%。由此可見，硬度對(duì)片劑溶出結(jié)果影響較為顯著，低硬度條件下，在酸性介質(zhì)中，片劑崩解后有較多顆粒漂浮在介質(zhì)表面，增加了顆粒與介質(zhì)之間的接觸面積，從而提高了酸中藥物的累積溶出度，同時(shí)當(dāng)溶出介質(zhì)向堿性條件過(guò)渡時(shí)，有大量藥物被溶解；而高硬度條件下，片劑崩解慢，溶出結(jié)果偏低。為避免酸中溶出偏高，并防止藥物在堿中釋放不全，綜合考慮，選擇50～70 N 作為雙氯芬酸鈉腸溶片的硬度。

圖3 不同因素對(duì)雙氯芬酸鈉腸溶制劑溶出行為的影響Fig 3 Effect of different factors on dissolution behaviors of diclofenac sodium enteric-coated preparation

2.2.7 溶出度對(duì)比 綜上，確定自制雙氯芬酸鈉腸溶顆粒的處方為：雙氯芬酸鈉、Eudragit L100-55 和乳糖質(zhì)量比為25∶12.5∶62.5。三者分別過(guò)60 目篩，混合均勻，以乙醇為潤(rùn)濕劑，先在最優(yōu)工藝下制備腸溶顆粒，再添加適宜的片劑輔料進(jìn)行混合，采用8 mm 沖頭壓片，控制硬度范圍在50～70 N，即得雙氯芬酸鈉腸溶片劑。并以市售雙氯芬酸鈉腸溶片和雙氯芬酸鈉原料作為參比，探討自研制劑的溶出行為，結(jié)果見圖3E。

在酸性介質(zhì)中，雙氯芬酸鈉原料藥5 min 時(shí)約10%的藥物開始溶解，在隨后的120 min 內(nèi)累積溶出度幾乎無(wú)變化；進(jìn)入pH 6.8 PBS 介質(zhì)后，藥物開始時(shí)溶解較為迅速，然后逐漸減慢，60 min 時(shí)累積溶出度約為90%。參比制劑在酸性介質(zhì)中幾乎無(wú)藥物釋放；進(jìn)入pH 6.8 PBS 溶液后，初始5 min 仍然無(wú)藥物釋放，但到15 min 時(shí)累積溶出度已接近90%，20 min 時(shí)完全溶出。自研制劑在酸性介質(zhì)中幾乎無(wú)藥物釋放；進(jìn)入pH 6.8 PBS 溶液后，45 min 時(shí)溶出達(dá)到90%，60 min 時(shí)藥物完全釋放。

與參比制劑相比，自研制劑也表現(xiàn)出明顯的腸溶特征，但兩者在腸道的釋放情況有所不同。參比制劑表現(xiàn)為迅速崩解，并在較短的時(shí)間內(nèi)釋放出大量的藥物；而自研片劑則表現(xiàn)為溶蝕型溶出的特征，藥物逐漸釋放，但在45 min 時(shí)也達(dá)到90%的溶出。這可能與制備原理密切相關(guān)，參比制劑采用常規(guī)的濕法制粒、壓片、包腸溶衣，在進(jìn)入腸道環(huán)境后，衣膜迅速溶解剝落，其后片芯快速釋放藥物。而自研制劑中的腸溶顆粒則是利用乙醇誘發(fā)出腸溶材料的黏性進(jìn)行濕法制粒，從而表現(xiàn)出溶蝕釋藥的特性。

2.3 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Sepax GP-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動(dòng)相： 磷酸鹽緩沖液-甲醇（36∶64，V/V）；柱溫：40℃；流速：1 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：263 nm[15]。

2.3.2 血漿處理方法 取凍存的兔血漿，室溫放置至完全融化。精密移取解凍血漿200 μL 置于離心管內(nèi)，加入10 μg·mL－1的吲哚美辛甲醇溶液200 μL 作為內(nèi)標(biāo)溶液，加入乙腈600 μL 作為蛋白沉淀劑，渦旋混合振蕩3 min，隨后3500 r·min－1離心10 min。精密移取全部上清液至另一個(gè)離心管中，待有機(jī)溶劑揮干后，加入200 μL 流動(dòng)相復(fù)溶，渦旋混合振蕩3 min，3500 r·min－1離心10 min，取上清液20 μL 注入高效液相色譜儀，檢測(cè)血漿中的藥物含量。

2.3.3 給藥及取樣 取新西蘭白兔6 只，隨機(jī)分為A、B 兩組，每組3 只，分別給予參比制劑和自制雙氯芬酸鈉腸溶片，并于給藥前禁食12 h，自由飲水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，將兔固定于兔盒中，將片劑完整塞入兔的會(huì)咽部，使其自動(dòng)吞咽，同時(shí)灌入適量清水，以防藥片黏附在食道膜壁上，整個(gè)過(guò)程要避免兔將藥片嚼碎。分別于給藥前和給藥 后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12 和24 h 耳緣靜脈采血1 mL，置于預(yù)先浸潤(rùn)肝素鈉的離心管中，3500 r·min－1離心10 min，取上層血漿，放置于－20 ℃冰箱中冷凍保存。按照“2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定。

2.3.4 藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，并采用PK Solver 藥動(dòng)學(xué)軟件分析，繪制藥-時(shí)曲線，結(jié)果見圖4，對(duì)主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，結(jié)果見表3。

由圖4、表3可知，從藥時(shí)曲線下面積來(lái)看，與參與制劑相比，自制制劑在家兔體內(nèi)的平均滯留時(shí)間（MRT）和達(dá)峰時(shí)間（Cmax）均有所延長(zhǎng)，但達(dá)峰濃度比參比制劑的低；自制制劑的AUC0～t、AUC0～∞略低，說(shuō)明其生物利用度比參比制劑略低；但其達(dá)峰時(shí)間與參比制劑相似。從藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果可知，以Eudragit L100-55 作為腸溶材料后進(jìn)行TSG，隨后壓片得到的自制制劑在兔體內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)藥物腸溶；雖然自制制劑與參比制劑的處方及工藝不同，但自制制劑簡(jiǎn)化了包腸溶衣膜的工藝；同時(shí)，自制制劑在兔體內(nèi)表現(xiàn)出了一定的緩釋效果，降低了參比制劑中由于藥物在腸道中快速釋放產(chǎn)生的局部藥物濃度過(guò)高而可能引起的腸道不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。

圖4 兔子口服給藥雙氯芬酸鈉后平均血藥濃-時(shí)間變化曲線Fig 4 Mean plasma concentration-time profiles of diclofenac sodium in rabbits after the oral administration

表3 各制劑在家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(Mean±SD，n ＝3)Tab 3 Pharmacokinetic parameters of each preparation in rabbits(Mean±SD，n ＝3)

3 討論

雖然原料藥的溶出曲線與腸溶顆粒的溶出曲線相似，將原料藥直接灌裝腸溶膠囊可以達(dá)到同樣的目的，但將原料藥直接灌裝腸溶膠囊存在以下缺點(diǎn)：

① 從溶出曲線可知原料藥在酸中2 h 約有10%的溶出，而腸溶顆粒僅有2%左右的溶出，直接罐裝膠囊可能會(huì)因?yàn)榫植繚舛冗^(guò)高而對(duì)胃造成一定的刺激，產(chǎn)生相應(yīng)的不良反應(yīng)。

② 雙氯芬酸鈉的溶解度隨pH 的升高而逐漸提高，會(huì)因?yàn)樵趬A中迅速崩解，并在較短的時(shí)間內(nèi)釋放出大量的藥物，造成局部濃度過(guò)高而對(duì)腸道黏膜造成強(qiáng)烈的刺激，從而引起腸道的不良反應(yīng)。

③ 雙氯芬酸鈉原料藥為白色或類白色粉末，易吸潮，直接罐裝因?yàn)榉勰┑牧鲃?dòng)性差，分散性、附著性、團(tuán)聚性等現(xiàn)象比較明顯，易存在裝量差異較大、吸潮等問(wèn)題；且如果不加其他輔料，不能確保用藥的安全性。因此不建議原料藥直接罐裝腸溶膠囊。而通過(guò)TSG 技術(shù)將其制備成腸溶顆粒后流動(dòng)性增加，上述分散性，附著性等現(xiàn)象明顯減少，可以使顆粒具有一定的防潮性、緩釋性和腸溶性等，而且腸溶顆?？勺鳛橹虚g體，將其制備成片劑、膠囊劑等其他劑型，從而保證用藥的安全性，降低對(duì)胃腸道的刺激。

本文首先通過(guò)雙螺桿濕法制粒技術(shù)制備雙氯芬酸鈉腸溶顆粒，而后壓制成片，與參比制劑相比，在pH 6.8 PBS 溶液表現(xiàn)出溶蝕型的釋放特征，可能是由于雙螺桿擠出捏合塊的作用較強(qiáng)，明顯強(qiáng)于通常的濕法制粒，形成的小顆粒比較致密，孔隙率低，隨著表層致密的Eudragit L100-55 的逐漸溶解以及內(nèi)部乳糖的溶蝕，藥物才逐漸釋放出來(lái)。且在制粒過(guò)程中形成無(wú)數(shù)個(gè)類似的表面被Eudragit L100-55 溶液潤(rùn)濕的小顆粒；已溶解的Eudragit L100-55 溶液作為黏合劑被均勻分散在整個(gè)顆粒內(nèi)部，但實(shí)際上本制備方式下的Eudragit L100-55 溶液黏度很高，均勻分散需要一定的時(shí)間，而此時(shí)由于擠壓受熱且加入量很少，部分乙醇可能已經(jīng)揮發(fā)，溶解的Eudragit L100-55重新在表面析出，形成較為致密的一層。在顆粒表面的這一層Eudragit L100-55 可能就是阻止顆粒在胃液中溶解的主要原因。

與參比制劑相比，從溶出結(jié)果和藥效學(xué)結(jié)果來(lái)看，自制的雙氯芬酸鈉腸溶片劑可以實(shí)現(xiàn)在酸中不溶、堿中釋放的腸溶特性，且在家兔體內(nèi)的釋放略慢，達(dá)峰濃度下降，有利于減少不良反應(yīng)的發(fā)生。與傳統(tǒng)的濕法制粒（如流化制粒[16]、高剪切制粒[17]）相比，TSG 技術(shù)具有工藝簡(jiǎn)單、操作易行、可實(shí)現(xiàn)顆粒連續(xù)式生產(chǎn)等諸多優(yōu)點(diǎn)，在連續(xù)制造生產(chǎn)模式中顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)和潛力。本研究將其用于制備腸溶型制劑是一個(gè)新的嘗試，所得到的腸溶顆?？蛇M(jìn)一步制成片劑和膠囊，有望成為一種新的腸溶制劑生產(chǎn)方式。