丹參注射液與臨床常用輸液配伍的穩(wěn)定性研究

陳虹，郭昌貴，合雄，賴蕓，韓惟芳，孫榮飛，戴宇婷

1.云南省昭通市中醫(yī)醫(yī)院，云南昭通657000；2.云南省昭通市食品藥品檢驗(yàn)所，云南昭通657000

丹參注射液具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心功效，主要用于治療冠心病心絞痛[1-2]、腦損傷[3-4]的治療，對(duì)肝損傷[5]、糖尿病[6]等也有一定的作用，是臨床上應(yīng)用較廣泛的中藥注射液之一。用法用量為肌內(nèi)注射，2~4 mL/次，1~2次/d；靜脈注射，4 mL/次，用50%葡萄糖注射液20 mL稀釋后使用，1~2次/d；靜脈滴注，10~20 mL/次，用5%葡萄糖注射液100~500 mL稀釋后使用，1次/d。隨著丹參注射液在臨床的廣泛應(yīng)用，不良反應(yīng)也隨之增加，有文章提到藥品不良反應(yīng)的發(fā)生可能與藥品使用不得當(dāng)有關(guān)，其中就包括溶媒的選用[7]。因此該研究將考察丹參注射液與臨床常用輸液配伍后的穩(wěn)定性，分別從時(shí)間、溫度及光照對(duì)配伍液的外觀性狀、pH、不溶性微粒及對(duì)有效成分（丹參素鈉、原兒茶醛）含量的影響來(lái)探討丹參注射液的合理搭配與應(yīng)用，旨在為臨床安全、合理使用丹參注射液提供科學(xué)依據(jù)和用藥指導(dǎo)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1200型，安捷倫），電子天平（MS105 DU，瑞士梅特勒），超聲波清洗機(jī)（UC-7100S型，美瑞泰克），真空泵（AP-9925，天津奧特賽恩斯），雷磁pH計(jì)（PHS-3B型，上海精科），數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9246MBE型，上海博迅），冷藏展示柜（LG4-1000M3，廣州穗凌電器），微粒分析儀（GWF-8JA，天津天河醫(yī)療儀器），醫(yī)用凈化工作臺(tái)（YJ-1450DA，蘇州凈化設(shè)備廠）。

1.2 試藥

丹參注射液（四川升和藥業(yè)，19021051，10 mL/支），丹參素鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110855-201614，20 mg/支，含量以98.1%計(jì)），原兒茶醛對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110810-201608，20 mg/支，含量以99.3%計(jì)），5%GS（昆明南疆制藥，CD190205F，500 mL/瓶；AD190127C1，250 mL/瓶），0.9%NS（昆明南疆制藥，AD190208L2，250 mL/瓶），10%GS（昆 明 南 疆 制 藥，CD190203D，500 mL/瓶），5%GNS（昆 明 南 疆 制 藥，CD190407D，500 mL/瓶），轉(zhuǎn)化糖注射液（四川美大康佳樂(lè)藥業(yè)，18091232，250 mL/袋），果糖注射液（江蘇正大豐海能，1711181，250 mL/瓶），乙腈（MERCK，JA070530，4 L/瓶），娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse Plus C-18色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水-甲酸（12∶87∶1）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

1.3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，注入丹參素鈉、原兒茶醛的混合對(duì)照品溶液10 μl，記錄色譜圖1，丹參素鈉、原兒茶醛對(duì)照品的保留時(shí)間分別為4.094、8.101 min，理論塔板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

圖1 對(duì)照品色譜圖

1.3.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛對(duì)照品適量（41.59 mg，15.84 mg），分別置于50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，分別制得丹參素鈉對(duì)照品溶液（815.995 8 μg/mL）、原兒茶醛對(duì)照品溶液（314.582 4 μg/mL）。

1.3.4 供試品溶液的制備 精密量取丹參注射液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋并定容至刻度，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾即得供試品溶液。

1.3.5 方法學(xué)驗(yàn)證①專屬性試驗(yàn)。分別取空白對(duì)照溶劑、對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μL，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，結(jié)果供試品溶液在相應(yīng)對(duì)照品溶液出峰處未見(jiàn)其他峰干擾，專屬性良好，結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

圖2 專屬性空白對(duì)照色譜圖

圖3 專屬性對(duì)照品色譜圖A為丹參素鈉B為原兒茶醛

圖4 專屬性供試品色譜圖A丹參素鈉B原兒茶醛

②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。分別精密量取丹參素鈉和原兒茶醛對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL置于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，得系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液（丹參素鈉40.80、81.60、163.20、244.80、326.40、408.00 μg/mL、原兒茶醛15.73、31.46、62.92、94.38、125.84、157.30 μg/mL)。按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程丹參素鈉y=7.0792x-17.68（r=0.999 5），原兒茶醛y＝34.24x+54.786（r=0.999 6）。結(jié)果表明，丹參素鈉、原兒茶醛分別在質(zhì)量濃度范圍40.80~408.00 μg/mL、15.73~157.30 μg/mL內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

③精密度試驗(yàn)。取“1.2.3”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄各色譜峰的峰面積，計(jì)算丹參素鈉、原兒茶醛峰面積的RSD分別為0.079%、0.156%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

④重復(fù)性試驗(yàn)。取丹參注射液6支，各精密量取5 mL置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋定容至刻度，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后，注入高效液相色譜儀測(cè)定并計(jì)算各成分含量，結(jié)果丹參素鈉、原兒茶醛的平均含量分別為975.96、277.45 μg/mL，RSD分別為0.723%、0.754%，結(jié)果表明該色譜條件下的含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

⑤回收率試驗(yàn)。精密量取已知含量的丹參注射液2.5 mL置于25 mL容量瓶中，分別加入丹參素鈉對(duì)照品溶液3 mL和原兒茶醛對(duì)照品溶液2.2 mL，加流動(dòng)相定容至刻度，平行制備6份。按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算丹參素鈉、原兒茶醛的平均回收率，分別為92.64%、89.60%，RSD分別為1.520%、1.470%。

1.4 成品輸液配伍穩(wěn)定性考察

模擬臨床用藥，參照說(shuō)明書推薦溶媒和劑量，由同一操作人員在100級(jí)水平層流臺(tái)內(nèi)，取丹參注射液加入5%GS中配成供臨床使用的最高濃度（20 mL→100 mL）和最低濃度（10 mL→500 mL）成品輸液，依次標(biāo)記為樣1、樣2。另分別取丹參注射液20 mL溶于非說(shuō)明書推薦的溶媒（0.9%NS、10%GS、5%GNS、果糖注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液）250 mL中，配成常規(guī)濃度的成品輸液，依次標(biāo)記為樣3、樣4、樣5、樣6和樣7。每份成品輸液分為6組，每組5份，分別編號(hào)并標(biāo)記為A1～A5，B1～B5，C1～C5，D1～D5，E1～E5，F(xiàn)1～F5。其中A、B、C組采取遮光措施，D、E、F組則在光照條件下，分別將A、D組置于常溫（10～30℃），B、E組置于高溫（35～37℃），C、F組置于低溫（4～8℃），于0、1、2、4、6、8 h觀察各組成品輸液外觀性狀，測(cè)定pH值及有效成分含量，于0、0.5、1、2、5、8 h進(jìn)行不溶性微粒檢測(cè)，并以隨行考察條件下相應(yīng)的輸液作空白對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 外觀與pH

分別取各組不同條件下的成品輸液適量，于0、1、2、4、6、8 h觀察上述成品輸液的澄明度、顏色及有無(wú)可見(jiàn)異物，并測(cè)定pH。結(jié)果顯示除5%GS高濃度配伍液的外觀呈棕色外，其余溶媒的成品輸液外觀呈淺棕色，溶液澄清，無(wú)可見(jiàn)異物?？瞻兹苊絧H值：5%GS（250 mL）4.28、5%GS(500 mL)4.53、0.9%NS 5.76、10%GS 3.73、5%GNS 4.12、轉(zhuǎn)化糖注射液4.12、果糖注射液3.66。所有組別成品輸液8 h內(nèi)pH的RSD≤1%，說(shuō)明時(shí)間、溫度及光照對(duì)丹參成品輸液pH的影響無(wú)明顯差別，具體pH變化范圍，見(jiàn)表1。

表1 丹參注射液與不同溶媒配伍后在不同條件下pH的變化范圍

2.2 不溶性微粒檢查

分別取各組不同考察條件下的成品輸液適量，于0、0.5、1、2、5、8 h時(shí)，按中國(guó)藥典2015年版四部規(guī)定的不溶性微粒檢測(cè)法中的光阻法測(cè)定每毫升成品輸液中≥10 μm和≥25 μm的不溶性微粒數(shù)，藥典規(guī)定標(biāo)示裝量為100 mL或100 mL以上的靜脈用注射液除另有規(guī)定外，每1 mL中含10 μm及10 μm以上的微粒數(shù)不得過(guò)25粒，含25 μm及25 μm以上的微粒數(shù)不得過(guò)3粒。結(jié)果顯示0 h時(shí)樣1～樣7中≥10 μm的微粒數(shù)分別為55.4、14.7、30.3、15.0、12.2、17.8、48.9；≥25 μm的不溶性微粒數(shù)分別為3.0、0.5、2.2、1.0、1.9、1.5、5.3。丹參注射液與5%GS的高濃度配伍液及與0.9%NS、轉(zhuǎn)化糖注射液的配伍液8 h內(nèi)的不溶性微粒均超標(biāo)；與5%GS配伍的低濃度配伍液低溫光照2 h時(shí)不溶性微粒超標(biāo)；與果糖的配伍液8 h內(nèi)的不溶性微粒均符合規(guī)定；與10%GS配伍的成品輸液常溫光照8 h的不溶性微粒超標(biāo)；與5%GNS配伍的成品輸液，高溫光照下2 h后不溶性微粒超標(biāo)，低溫條件下無(wú)論避光與否，0.5 h后不溶性微粒均超標(biāo)。雖然光照、溫度在不同溶媒中對(duì)成品輸液的影響無(wú)規(guī)律性，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在高溫、低溫條件下存放的成品輸液不溶性微粒更容易超出藥典規(guī)定。見(jiàn)表2。

表2 丹參注射液與不同溶媒配伍后8 h內(nèi)不溶性微粒的變化（個(gè)/mL）

2.3 丹參素鈉與原兒茶醛在成品輸液中的含量變化

取“1.3”項(xiàng)下各組成品輸液于0、1、2、4、6、8 h按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定丹參素鈉、原兒茶醛在各組成品輸液中的峰面積，分別以0 h的含量為100%換算其他時(shí)間點(diǎn)的含量。

結(jié)果表明：丹參注射液與6種溶媒配伍后8 h內(nèi)各條件下的丹參素鈉含量變化均較小，與5%GS配成的高濃度配伍液中原兒茶醛在常溫和高溫條件下含量下降較大，特別在高溫光照條件下8 h時(shí)原兒茶醛的含量下降了13.95%；低濃度丹參5%GS成品輸液及與其他溶媒配成的成品輸液8 h內(nèi)丹參素鈉、原兒茶醛的含量變化均在2%以內(nèi)。由此可推斷丹參注射液與5%GS的配伍液放置8 h，藥物濃度較高時(shí)，溫度和光照可能會(huì)對(duì)有效成分含量產(chǎn)生一定影響，而藥物濃度較低時(shí)則無(wú)明顯影響，樣1、樣2結(jié)果，見(jiàn)表3。

3 討論

丹參注射液的說(shuō)明書推薦溶媒為5%GS，有研究分析近年來(lái)國(guó)內(nèi)醫(yī)藥期刊公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)，總結(jié)發(fā)現(xiàn)丹參注射液可選10%GS、0.9%NS、5%GS做溶媒[8]。也有文獻(xiàn)稱丹參注射液合理配伍的條件為25℃、劑量20 mL與100 mL 0.9%NS配伍放置2 h，此條件下配伍液穩(wěn)定性較好，該實(shí)驗(yàn)中對(duì)丹參注射液與溶媒配伍后分別放置于4℃、25℃、35℃條件下4 h內(nèi)的有效成分含量進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)4 h時(shí)6個(gè)樣品的丹參素鈉標(biāo)示百分含量之和分別為598.43、594.49和588.26（P＜0.01），原兒茶醛含量分別為594.00、596.04和586.87（P＜0.05），結(jié)果表明：導(dǎo)致丹參素鈉、原兒茶醛含量降低的是35℃以上溫度，25℃以下溫度對(duì)其幾乎無(wú)影響[9]。

該研究中丹參注射液20 mL與5%GS 100 mL配成高濃度的成品輸液后，不溶性微粒數(shù)超藥典標(biāo)準(zhǔn)，而且在高溫光照條件下（36℃）放置時(shí)，高溫光照組8 h原兒茶醛含量下降最大約14%，實(shí)驗(yàn)表明有效成分原兒茶醛的含量受高溫光照、常溫光照及低溫光照的影響由強(qiáng)至弱，而與其他溶媒的常規(guī)濃度、低濃度成品輸液中的原兒茶醛含量最大下降不超過(guò)3%，較穩(wěn)定，丹參素鈉含量幾乎無(wú)變化。由此可看出，高溫光照對(duì)丹參5%GS高濃度成品輸液有效成分含量有影響，推斷高溫和藥物濃度是影響丹參注射液中原兒茶醛含量的因素。對(duì)此，有研究對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析后建議在不影響療效的情況下，使用丹參注射液應(yīng)盡量選用0.048%(丹參藥材：g/mL)及以下的稀釋濃度，以免藥物濃度過(guò)大，發(fā)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)增加[10]。

該研究中丹參注射液20 mL與250 mL 0.9%NS、轉(zhuǎn)化糖注射液配伍后不溶性微粒超過(guò)藥典標(biāo)準(zhǔn)；丹參注射液20 mL與250 mL果糖注射液配伍后外觀和pH無(wú)明顯變化、不溶性微粒在藥典規(guī)定范圍內(nèi)、主要成分含量與0 h比較無(wú)明顯變化，配伍較穩(wěn)定。但有作者觀察到10 mL丹參注射液加入250 mL果糖注射液中，外觀、pH、不溶性微粒變化較小，而配伍2 h后紫外最大吸收波長(zhǎng)變化顯著，穩(wěn)定性變差[11]。因此配伍時(shí)，溶媒選擇應(yīng)慎重。最后，丹參注射液與5%GS配伍的低濃度成品輸液不溶性微粒在藥典范圍內(nèi)，而高濃度成品輸液的不溶性微粒超標(biāo)，說(shuō)明不溶性微?？赡芘c丹參注射液的用量或藥物濃度有關(guān)。文中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與相關(guān)研究有相通之處，即藥物與溶媒配伍的不同濃度對(duì)不溶性微粒的變化有一定影響，藥物配伍不當(dāng)也會(huì)導(dǎo)致輸液中不溶性微粒的增加[12-14]。

綜上所述，在臨床實(shí)際應(yīng)用丹參注射液時(shí)，不可隨意更改說(shuō)明書推薦的溶媒或劑量，調(diào)配好的成品輸液應(yīng)盡量避免放置在高溫條件下，并應(yīng)注意遮光或避免日光直射，同時(shí)還應(yīng)注意避免因成品輸液藥物濃度過(guò)高、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而導(dǎo)致成品輸液中的有效成分降低而無(wú)法達(dá)到預(yù)期療效或?qū)е滤幬锊涣挤磻?yīng)的發(fā)生。另外，成品輸液質(zhì)量中不溶性微粒是質(zhì)量評(píng)估的重要指標(biāo)，不溶性微粒與調(diào)配環(huán)節(jié)中的輸液配伍、輸液操作、配置環(huán)境有關(guān)，因此建議有條件的醫(yī)院將中藥注射劑等藥物在靜配中心集中調(diào)配后下送到臨床科室，以期輸液質(zhì)量能夠得到提升，保證患者用藥安全。