miR-93在胃癌患者血清中的表達及與生存期的相關性探討

張海波，黃宏春，王秀敏，王少芳

（安陽市人民醫(yī)院1.消化內科；2.呼吸內科，河南 安陽 455000）

2018年全球癌癥統(tǒng)計報告顯示，全球胃癌發(fā)病率為5.70%、死亡率為8.20%，而我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，胃癌發(fā)病率為10.60%、死亡率為13.60%，是威脅我國居民健康的惡性腫瘤之一[1]。因胃癌早期缺乏特異性表現，大部分患者確診時已處于中晚期，五年生存率不足20%[2]。因此，尋找胃癌發(fā)生發(fā)展的標志物，對于早期胃癌的防治及預后的改善均具有重大意義。微小核糖核酸（miRNA）是一類內源性非編碼單鏈RNA，研究證實，miRNA的失調與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[3]。另有研究證實，miR-93的生理作用機制與“癌基因”相似，在胃癌組織中miR-93的表達上調與惡性進展和較差的預后有關[4]。本研究探討miR-93在胃癌患者血清中的表達及與生存期的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6 月-2017年7 月收治的胃癌患者100例為胃癌組，納入標準：均為首診，且經胃鏡檢查及病理組織學確診；未接受過放化療、免疫治療。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；合并心肝腎肺功能異常、炎癥內分泌代謝疾病者；有精神或神經系統(tǒng)疾病者；病例資料及隨訪資料不全者。其中男72例，女28例；年齡42～79 歲，平均60.45±5.18 歲。另選取同期健康體檢者126例為健康組，其中男91例，女35例；年齡40～78 歲，平均60.39±5.16 歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），有可比性。

1.2 血清miR-93表達含量測定方法 抽取外周靜脈血5ml，以2000r/min 離心10min 取血清，采用Trizol 試劑提取細胞總RNA、合成cDNA，進行RTPCR 檢測。miR-93 引物序列：上游引物5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，下游引物5’-AC GUGACACGUUCGGAGAAATT-3’，U6 引物序列：上游引物5’-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3’,下游引物5’-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’。反應條件：95℃10min，95℃10min，60℃1min，共擴增45 個循環(huán)。將U6 作為內參照，miR-93的相對表達量采用2-△△Ct方法計算，其中△△Ct=△Ct（樣本）-△Ct（內參）。實驗重復3 次。

1.3 隨訪 隨訪方式為電話或者門診，每隔3 個月進行一次，隨訪截至時間為2020年7 月31 日，統(tǒng)計3年生存率。

1.4 統(tǒng)計學分析 本次研究所得數據使用SPSS 25.0 統(tǒng)計學軟件分析，計量資料以（）表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-93表達含量對胃癌的早期診斷價值；采用Kaplan-Meier 法進行生存分析；生存期影響因素的多因素分析采用Cox 比例風險模型，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 胃癌患者血清miR-93表達含量 胃癌組血清中miR-93 相對表達含量為（4.31±0.38），高于健康組（1.00±0.11），差異有統(tǒng)計學意義（t=93.034,P<0.05）。

2.2 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達含量比較 TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸潤深度T3～T4、有淋巴結轉移者血清miR-93表達含量均分別高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸潤深度T1～T2、無淋巴結轉移者,差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度者血清miR-93表達含量比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達含量比較（）

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達含量比較（）

2.3 血清miR-93 診斷胃癌的效能 ROC 曲線結果顯示，miR-93 診斷早期胃癌的ROC 曲線下面積為0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值為2.310時，靈敏度為96.74%，特異度為87.50%，見圖1。

圖1 血清miR-93對早期胃癌診斷的ROC 曲線圖

2.4 血清miR-93與胃癌患者生存期的相關性 以血清miR-93=2.310 為界，將100例患者分為高表達組（n=47）與低表達組（n=53），血清miR-93 高表達組3年總生存率為63.83%,低于低表達組的83.02%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.767，P=0.029<0.05），見圖2。

圖2 胃癌患者不同血清miR-93表達組生存曲線圖

2.5 胃癌患者生存期影響因素分析 以生存時間和是否因胃癌死亡為因變量，以血清miR-93表達含量、TNM 分期、局部浸潤深度、淋巴結轉移作為自變量進行多因素Cox 比例風險模型分析，結果顯示，血清miR-93 高表達（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸潤深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴結轉移（HR=3.718）的胃癌患者生存期較短，見表2。

表2 胃癌患者生存期影響因素多因素Cox 比例風險模型分析

3 討論

胃癌為臨床上常見的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率近年來呈升高及年輕化趨勢，且發(fā)病與遺傳、環(huán)境、飲食、身體質量指數（BMI）、營養(yǎng)因素以及慢性感染等相關[5,6]。因胃癌早期缺乏特異性癥狀表現，待確診時往往發(fā)展至中晚期，預后較差[7,8]。當前，無有效的早期無創(chuàng)篩查和診斷胃癌的方法是胃癌死亡率較高的一項重要原因，雖然我國逐漸重視胃癌的篩查及早期診斷，其中胃鏡檢查為早期診斷胃癌的主要手段，但其為有創(chuàng)操作，難以普及，且臨床上常用的癌胚抗原（CEA）、糖類抗原（CA）199、CA125 等腫瘤標志物在胃癌的篩查中靈敏度、特異度較低[9,10]。因此探尋新的非侵入性胃癌診斷及預測預后的分子標志物具有重要意義。

miRNA 能與目的信使RNA（mRNA）的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）結合,導致mRNA的降解或抑制其翻譯，影響其蛋白表達，以此發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用[11-14]。本研究結果顯示，胃癌組血清中miR-93 相對表達含量高于健康組,且TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸潤深度T3～T4、有淋巴結轉移者血清miR-93表達含量均分別高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸潤深度T1～T2、無淋巴結轉移者,表明，miR-93在胃癌組織中存在高水平表達,且其表達隨胃癌病理學分期的演進而上升，miR-93在胃癌中可能發(fā)揮癌基因的作用，即意味著血清miR-93水平越高則患者的病情可能越嚴重。馬志軍等[15]進行的體外實驗研究結果表明，轉染miR-93 后48、72、96 h，胃癌細胞株AGS的增殖、遷移和侵襲能力顯著增強，即促腫瘤行為能力明顯增強，發(fā)揮癌基因的作用。本研究結果另顯示，miR-93 診斷胃癌的ROC 曲線下面積為0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值為2.310 時，靈敏度為96.74%，特異度為87.50%，表明，miR-93對胃癌的早期診斷效能，診斷靈敏度、特異度均較高，具有較高的診斷價值。本研究結果還顯示，血清miR-93 高表達組3年總生存率為63.83%，低于低表達組的83.02%，且多因素Cox 比例風險模型分析結果顯示，血清miR-93 高表達（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸潤深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴結轉移（HR=3.718）的胃癌患者生存期較短，表明，血清miR-93 高表達與胃癌患者生存期密切相關，是胃癌患者生存期的危險因素。

綜上所述，miR-93在胃癌患者血清中呈高表達，且與臨床病理特征及生存期存在相關性，可作為診斷胃癌及判斷預后的生物學標志物。