不同提取方法對二翅六道木嫩葉凝膠提取率的研究

牛 睿，方歡樂，韓慧恩，何煥煥，羅 航

（西安培華學院醫(yī)學院，陜西西安 610116）

二翅六道木為忍冬科植物六道木屬落葉灌木，主產(chǎn)于陜西、湖北等地。葉子卵形，頂端漸尖，底部楔形或鈍形，葉子邊緣是稀疏鋸齒狀，花為紅色的花冠，生于側(cè)小枝頂部的葉腋處[1]。根據(jù)陜西商洛《山陽縣志》記載，陜西商洛將此葉作為“神仙粉”食用已有上百年歷史[2]。研究發(fā)現(xiàn)，二翅六道木嫩葉中的蛋白質(zhì)、脂肪、粗多糖、果膠、鉀、鈣、鐵、鋅、硒、泛酸、β-胡蘿卜素、煙酸含量均較高[3]。其中，鋅和硒有助于提高人體免疫力及增強記憶力。二翅六道木的嫩葉當中含有多種氨基酸，其中以谷氨酸含量最高，具有較高的營養(yǎng)價值[4]。

本文研究水提醇沉法和超聲波輔助提取法對二翅六道木嫩葉凝膠提取率的影響，通過檢測其果膠含量，對比分析最適宜的提取方法，為二翅六道木的葉的應(yīng)用，提供一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

二翅六道木嫩葉、D-半乳糖醛酸、咔唑、95%乙醇、無水乙醇、濃硫酸、鹽酸、30%過氧化氫、水楊酸、焦性沒食子酸、硫酸亞鐵。

1.2 試驗儀器

電熱恒溫干燥箱（H2674，北京科偉永興儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-1，金壇市華峰儀器有限公司）；超聲波萃取機隔音箱（Xinyi-2400C，寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）；電子天平（JA1003，上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；多功能粉碎機（SL-250，浙江省永康市松青五金廠）；循環(huán)水式多用真真空泵（SHB-III，上海瑞智儀器有限公司）；紫外可見分光光度計（UV-2102C，上海科曉科學儀器有限公司）；臺式高速離心機（TGL-16C，上海利鑫堅離心機公司）；冷凍干燥機（LGJ-40G，四川福瑞儀器科技發(fā)展有限公司）；酸度計（PHS-25，上海儀電科學儀器股份有限公司）

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

用粉碎機將二翅六道木的嫩葉粉碎成粉末，用100目細篩篩過后，將其粉末混合均勻，于50 ℃烘干備用。

1.3.2 水提醇沉法

取10.0 g二翅六道木干燥嫩葉粉，用1 000 mL熱水于90 ℃恒溫水浴鍋中攪拌均勻，提取90 min，用紗布過濾，濾液中加入1.5 g活性炭，將濾液放在恒溫水浴鍋中攪拌提取90 min，脫色10 min，趁熱用濾紙過濾。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行減壓濃縮至100 mL，向濃縮液中加入100 mL的95%乙醇，濃縮液呈凝膠狀，使其沉淀完全，然后用濾紙過濾，將凝膠沉淀物用95%乙醇洗滌3次,洗滌后的凝膠放在烘箱中烘干，稱其凝膠物質(zhì)量，計算凝膠物提取率[5]。

提取率=凝膠物質(zhì)量/10×100%

1.3.3 超聲波提取法

稱取10.0 g預處理后的二翅六道木干燥嫩葉粉末，按照1∶20的料液比，加入pH為1～2的鹽酸溶液中，于40 ℃下超聲萃取15 min，超聲功率設(shè)為1 200 W，萃取后趁熱抽濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在65 ℃條件下減壓蒸餾，使得濾液濃縮至30 mL為止。向濾液中緩慢加入50 mL的95%乙醇溶液，可見絮凝物析出，靜置4 h后抽濾，收集沉淀。用95%的乙醇溶液洗滌沉淀物，將沉淀物冷凍干燥72 h，取出后稱取凝膠物質(zhì)量，計算凝膠物提取率。

提取率=凝膠物質(zhì)量/10×100%

1.3.4 半乳糖醛酸的鑒定

稱取0.05 g二翅六道木嫩葉凝膠提取物于容量瓶中，加5 mL水攪拌使其溶脹，用稀鹽酸調(diào)整溶液pH值為2，于95 ℃恒溫水浴中攪拌水解60 min，之后1 500 r/min離心l5 min，取部分上清液與咔唑試劑反應(yīng)，若生成紫紅色化合物，則說明水解液中含有半乳糖醛酸。

1.3.5 半乳糖醛酸標準曲線的繪制

精準稱取半乳糖醛酸10 mg于燒杯中，用少量蒸餾水使其充分溶解，再用蒸餾水將其定容到10 mL的容量瓶中，搖勻，得到1 mg/mL的半乳糖醛酸標準液。使用1 mL的吸量管分別吸取配制好的半乳糖醛酸標準溶液0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL和0.9 mL，分別用蒸餾水將吸取不同含量的半乳糖醛酸標準液定容至10 mL，搖勻，得到一組濃度依次為0～0.9 mg/mL的半乳糖醛酸標準溶液。

分別吸取不同濃度的標準溶液1 mL于試管中，每個試管分別加入6 mL的濃硫酸，充分混合，隨即將試管放進冰浴中冷卻，使溫度降至室溫。然后在水浴鍋中70 ℃水浴加熱10 min，迅速用流動水冷卻至室溫。每個試管中加入現(xiàn)配的0.5 mL的0.15%的咔唑試劑，充分混勻，放置室溫下30 min后，將待測液于530 nm處對其進行比色，測定其吸光度，得到一組不同濃度待測液的吸光度。以半乳糖醛酸含量（μg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到半乳糖醛酸的標準曲線。

1.3.6 樣品的測定

準確移取1.00 mL濃度為0.1 mg/mL的果膠溶液于試管中，向試管中加入6 mL濃硫酸，充分混合，將試管放在冰塊中，使其溫度降至室溫后，于85 ℃的水浴鍋中水浴加熱10 min，迅速用流動水將每個試管冷卻至室溫。然后分別向試管中加入現(xiàn)配制好的0.5 mL 0.15%的咔唑試劑，混合均勻，在室溫下放置30 min，將待測液于530 nm處測定其吸光度，對照半乳糖醛酸的標準曲線圖，計算出樣品中的半乳糖醛酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 半乳糖醛酸的標準曲線

由1可知，其回歸方程為y=0.008 7x＋0.011，相關(guān)系數(shù)R2=0.995 9.

圖1 半乳糖醛酸的標準曲線

2.2 樣品的測定

由表1可知，在相同條件下，超聲波提取法的凝膠提取率為20.4%，水提醇沉提取法凝膠提取率為17.3%。二翅六道木嫩葉凝膠提取用超聲波輔助提取方法更好。咔唑硫酸法測定兩種提取方法中樣品的半乳糖醛酸含量也不同，超聲波提取樣品中的半乳糖醛酸含量高于水溶醇沉提取的半乳糖醛酸含量，其測定的半乳糖醛酸含量為41.2%。因此，與水提醇沉提取方法相比，超聲波提取法提取的凝膠提取率和樣品中的半乳糖醛酸含量均顯著增高。

表1 不同提取方法的二翅六道木嫩葉凝膠測定結(jié)果

3 討論

根據(jù)食品化學試驗研究中記載，測定食品中果膠含量常選用半乳糖醛酸進行檢測。將果膠水解，得到的半乳糖醛酸可在強酸環(huán)境中與咔唑試劑產(chǎn)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色化合物，其呈色深淺與半乳糖醛酸含量成正比，由此可進行比色定量測定果膠的含量。選擇530 nm作為吸收波長，選用紫外可見分光光度法測定其吸光度，進而得到果膠的含量。

經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，在相同條件下，超聲波輔助提取法能顯著提高二翅六道木嫩葉當中的凝膠成分的提取率及半乳糖醛酸含量，差異明顯。超聲波提取法可以使提取凝膠的時間降低、提高凝膠的提取率、節(jié)約成本、提高效益。且超聲波提取法能夠有效控制提取溫度，降低高溫對果膠成分的碳化改變。研究發(fā)現(xiàn)，二翅六道木果膠具有較強的抗氧化活性，可以開發(fā)成天然抗氧化食品進行推廣，提高當?shù)胤N植，給社會發(fā)展帶來更多的經(jīng)濟效益。