抗瓜氨酸化α 烯醇化酶多肽1 抗體在初治類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中的表達(dá)及其臨床價(jià)值研究

賈浩楠，王麗茹，張辰蔚，董霞，彭靜，許興路

1.黑龍江省醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，黑龍江哈爾濱 150036；2.黑龍江省醫(yī)院放射免疫特檢科，黑龍江哈爾濱 150036

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性、炎癥性自身免疫病，以滑膜炎為病理特征，主要累及雙側(cè)對(duì)稱小關(guān)節(jié)，RA 患者如未早期發(fā)現(xiàn)、早期診治，會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失[1-2]。因此，在疾病發(fā)作時(shí)，早期識(shí)別預(yù)后不良標(biāo)志物有助于臨床醫(yī)生預(yù)測(cè)病情，從而進(jìn)行周密的隨訪與有效及時(shí)的治療。自身抗體的研究，有助于RA 患者早期診斷，進(jìn)而早期干預(yù)，延緩疾病進(jìn)展，改善預(yù)后。多個(gè)研究表明，RA 患者體內(nèi)自身抗體的產(chǎn)生早于患者出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的時(shí)間[3-4]。目前，抗環(huán)瓜氨酸蛋白（cCCP）抗體和類風(fēng)濕因子（RF）廣泛應(yīng)用于臨床[5-6]。由于RA是一種復(fù)雜的疾病，異質(zhì)性強(qiáng)，CCP 是人工合成的瓜氨酸化多肽，不是自身抗原，并且其來(lái)源聚絲蛋白在RA關(guān)節(jié)中無(wú)表達(dá)，無(wú)法解釋RA 病因，因此發(fā)現(xiàn)一種新的特異性較強(qiáng)的自身抗體有著重要作用[7]。近年來(lái)研究人員發(fā)現(xiàn)，抗瓜氨酸化α 烯醇化酶多肽1（CEP-1）抗體對(duì)于RA 的聯(lián)合診斷或在血清學(xué)陰性RA 的輔助診斷中具有較好意義[8]。該研究回顧性收集2019 年4 月—2020 年5 月院內(nèi)50 例病例進(jìn)行分析，通過(guò)對(duì)初治RA患者血清中抗CEP-1 抗體水平的檢測(cè)，進(jìn)一步探討其在RA 診斷、判斷病情活動(dòng)及預(yù)后中的臨床價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析于該院行相關(guān)檢查的50 例初治RA 患者，30 名健康體檢者臨床資料，將RA 患者納入RA組，將健康體檢者納入健康對(duì)照組。根據(jù)抗CEP-1 抗體陽(yáng)性與否將初治RA 患者分為陽(yáng)性組33 例和陰性組17 例。RA 組女43 例，男7 例；年齡為20～55 歲，平均（32.25±5.67）歲；病程為2 個(gè)月～3 年，平均（1.86±0.34）年。診斷均符合2010 年的RA 分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，且所有RA 患者在入選前均未接受過(guò)激素、免疫抑制劑或生物制劑等藥物治療。對(duì)照組女20 名，男10 名；年齡22～58歲，平均（35.68±6.14）歲；均為同期來(lái)自該院體檢中心的健康體檢人員，無(wú)自身免疫性疾病、無(wú)關(guān)節(jié)痛病史。兩組一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。該研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

采集禁食水8 h 以上的空腹外周靜脈血3～4 mL，離心后取上層血清，置于-20℃冰箱保存，以備統(tǒng)一進(jìn)行抗CEP-1 抗體檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定抗CEP-1 抗體，檢測(cè)具體步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，抗CEP-1 抗體以20 RU/mL 為陽(yáng)性臨界值。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄各組觀察對(duì)象抗CEP-1 抗體表達(dá)情況。記錄兩組RA 患者DAS28、改良Sharp 評(píng)分，采用Spearman相關(guān)性分析法分析初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)與DAS28、改良Sharp 評(píng)分的相關(guān)性，采用Logistic 多元回歸分析法分析初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。

1.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

28 個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分（DAS28）用于評(píng)估患者疾病活動(dòng)度[10]，分值越高表示疾病活動(dòng)度越高。改良Sharp 評(píng)分用于評(píng)估患者骨侵蝕、破壞程度[11]，主要從其手部X 線片變化入手，對(duì)關(guān)節(jié)侵蝕、間隙狹窄情況進(jìn)行評(píng)判，分值越高表示其結(jié)構(gòu)性病變程度越嚴(yán)重。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料的表達(dá)方式為（），采用t 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，計(jì)數(shù)資料的表達(dá)方式為[n（%）]，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)模型，獨(dú)立危險(xiǎn)因素采用Logistic 多元回歸分析評(píng)估，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CEP-1 抗體表達(dá)情況比較

RA 組抗CEP-1 抗體陽(yáng)性率為66%（33/50），顯著高于健康對(duì)照組的0%（0/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組DAS28、改良Sharp 評(píng)分比較

初治RA 患者中，陽(yáng)性組DAS28、改良Sharp 評(píng)分顯著高于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.548、6.008，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組DAS28、改良Sharp 評(píng)分比較[（），分]

表1 兩組DAS28、改良Sharp 評(píng)分比較[（），分]

2.3 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)與DAS28、改良Sharp 評(píng)分的相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)分析結(jié)果表明，初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)與DAS28、改良Sharp 評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)與DAS28、改良Sharp 評(píng)分的相關(guān)性分析

2.4 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)的多因素分析

經(jīng)Logistic 多元回歸分析法分析得出，DAS28、改良Sharp 評(píng)分均可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)的獨(dú)立影響（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)的Logistic 多因素分析

3 討論

RA 屬于一類慢性免疫系統(tǒng)疾病，患者常見(jiàn)的病理學(xué)特征為滑膜炎，發(fā)病后可對(duì)稱性地侵襲身體不同關(guān)節(jié)[12]，若此類患未得到有效的早期診斷、治療，其關(guān)節(jié)可能出現(xiàn)不可逆畸形，使其正常功能發(fā)生障礙或完全喪失。目前臨床研究認(rèn)為，該病發(fā)生發(fā)展與諸多自身抗體表達(dá)有關(guān)，主要包括RF、抗CEP-1 抗體及ACPA 抗體等。

α-烯醇化酶（α-ENO）作為一類糖酵解酶，其與RA患者慢性炎癥、丙酮酸合成均存在密切關(guān)聯(lián)，屬于類型較新的一種表面蛋白，雖無(wú)法進(jìn)行表面轉(zhuǎn)運(yùn)，但可經(jīng)某種未知途徑進(jìn)行細(xì)胞表面運(yùn)輸，并以纖溶酶原受體的形式在諸多上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞表面存活，可與機(jī)體纖溶系統(tǒng)及血管內(nèi)部發(fā)揮一定作用。近年來(lái)，有關(guān)α-ENO 報(bào)道指出，其以自身抗原的形式在諸多侵襲性、系統(tǒng)性的免疫疾病中活躍表達(dá)，尤其當(dāng)RA患者機(jī)體出現(xiàn)感染、炎癥時(shí)表現(xiàn)更為活躍[13]。而亦有研究指出，抗CEP-1 抗體陽(yáng)性表達(dá)與否與患者關(guān)節(jié)內(nèi)抗原表達(dá)水平具有顯著相關(guān)性[14]，前者陽(yáng)性表達(dá)伴隨患者較為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步印證α-ENO 在RA 患者炎癥反應(yīng)誘發(fā)中的作用[15]。該次研究中，RA 患者抗CEP-1 抗體陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于其他對(duì)照組，與相關(guān)研究背景符合，而RA 患者中抗CEP-1 抗體陽(yáng)性組DAS28 較陰性組更高，且其表達(dá)與DAS28 呈正相關(guān)，均提示RA患者抗CEP-1 抗體陽(yáng)性表達(dá)后關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度可顯著上升，猜測(cè)其原因在于抗CEP-1 抗體陽(yáng)性表達(dá)與患者慢性炎癥反應(yīng)發(fā)生后α-ENO 水平的上升有關(guān)，而隨著炎癥反應(yīng)的進(jìn)展，患者疾病活動(dòng)度可進(jìn)一步受到影響，使其DAS28 明顯升高。Logistic 回歸分析得出，DAS28可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)的獨(dú)立影響，原因在于抗CEP-1 抗體表達(dá)的陽(yáng)性與否直接關(guān)系到患者炎癥發(fā)生情況，對(duì)其疾病活動(dòng)度的影響亦極為顯著，其可借助p38 絲裂原作用將蛋白激酶（MAPK）活化，并通過(guò)對(duì)單核巨噬細(xì)胞的刺激增加促炎介質(zhì)的分泌產(chǎn)生，亦可刺激α-ENO 在關(guān)節(jié)組織的表達(dá)[16]，使RA 患者炎癥效應(yīng)期中參與的炎性介質(zhì)水平更高，影響到關(guān)節(jié)活動(dòng)度，這與楊夢(mèng)溪等[16]研究結(jié)果中關(guān)于炎癥機(jī)制解釋部分較為相似，且該文中RA 患者抗CEP-1 抗體陽(yáng)性率為66%，與其研究結(jié)果64.3%較為相近。

骨破壞作為RA 患者關(guān)節(jié)病變的重要表現(xiàn)，因其具有不可逆性，臨床應(yīng)對(duì)措施以早診斷、早預(yù)防為主，對(duì)RA 患者的治療不僅需納入對(duì)其具體癥狀的考慮，還需以關(guān)節(jié)影像檢查為重要觀察點(diǎn)。該次研究中，RA 患者中抗CEP-1 抗體陽(yáng)性組改良Sharp 評(píng)分較陰性組更高，且該抗體表達(dá)與改良Sharp 評(píng)分具有正相關(guān)性，而在羅采南等[17]研究中，發(fā)現(xiàn)此類患者抗CEP-1 抗體表達(dá)與骨破壞存在顯著相關(guān)性（r=0.673，P＜0.05），均提示抗CEP-1 抗體陽(yáng)性RA 患者骨破壞程度更嚴(yán)重，其原因在于此類患者炎癥反應(yīng)程度較重，長(zhǎng)期持續(xù)可因炎性物質(zhì)侵襲加重患者骨破壞程度，導(dǎo)致其改良Sharp 評(píng)分明顯升高。而經(jīng)Logistic 回歸分析可發(fā)現(xiàn)，改良Sharp 評(píng)分可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達(dá)的獨(dú)立影響，其亦證實(shí)了此類患者發(fā)生骨破壞與其自身炎癥有關(guān)。

綜上所述，RA 患者大多表現(xiàn)為抗CEP-1 抗體陽(yáng)性，其表達(dá)與其疾病活動(dòng)度、骨破壞程度關(guān)系密切，可為臨床早期診療提供一定作用。