我國寵物用病毒類生物制品質(zhì)量情況分析與建議

吳華偉，秦義嫻，陳曉春，高金源，孫 淼，薛青紅，陳 建，陳延飛，高月異，李 嶺

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

為了解我國寵物類病毒類制品的質(zhì)量情況，本文匯總了2008-2020年承擔(dān)的所有類別(包括注冊檢驗(yàn)、復(fù)核檢驗(yàn)和監(jiān)督檢驗(yàn))的寵物用病毒類生物制品檢驗(yàn)情況，對檢測出的不合格批次及檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，提出了做好寵物用病毒類制品質(zhì)量控制和重點(diǎn)品種研發(fā)的建議。

1 我國寵物用病毒類生物制品基本現(xiàn)狀

1.1 制品主要種類 目前，我國寵物用生物制品主要有4類。疫苗類：包括活疫苗(傳統(tǒng)弱毒活疫苗)、滅活疫苗(全病毒滅活疫苗)以及細(xì)菌(如鉤端螺旋體)和病毒多聯(lián)多價(jià)苗?？贵w類：包括免疫球蛋白、單克隆抗體類。診斷制品類：抗體檢測試劑或試劑盒(如ELISA試劑盒)以及抗原或核酸檢測試劑或試劑盒(如ELISA試劑盒、膠體金試紙條、RT-PCR試劑盒等)。其他類：白蛋白注射液、干擾素等。

1.2 目前已批準(zhǔn)制品情況 截至2020年，我國已批準(zhǔn)約47個(gè)寵物類生物制品(表1-表4、圖1)，包含一類新獸藥2個(gè)(占比4.3%)，二類新獸藥10個(gè)(占比21.2%)，三類新獸藥25個(gè)(占比53.2%)，進(jìn)口新獸藥10個(gè)(占比21.3%)。從制品種類看(圖2)，疫苗類制品共28個(gè)(占比60%)，檢測試劑盒(試紙條)14個(gè)(占比約30%)，抗體類制品3個(gè)(占比約6%，其中單克隆抗體2個(gè)，免疫球蛋白1個(gè))，犬血白蛋白注射液和重組犬α干擾素各1個(gè)。從疫苗使用對象看，犬用疫苗25個(gè)(占比89%)，貓用疫苗3個(gè)(占比11%)，其中狂犬病疫苗(含聯(lián)苗)共16個(gè)(表2)，占比57%。已批準(zhǔn)寵物用診斷試劑14個(gè)，其中犬用診斷試劑12個(gè)(占比86%)，貓用診斷試劑2個(gè)(占比14%)，所有診斷試劑中狂犬用診斷試劑6個(gè)，占比43%。從產(chǎn)品來源看，國產(chǎn)疫苗和進(jìn)口疫苗各占一半(均為14個(gè))，診斷試劑均為國產(chǎn)。綜合已批準(zhǔn)的所有寵物類制品，狂犬病相關(guān)生物制品為主要品種，共批準(zhǔn)22個(gè)(表2、表3)，其中疫苗16個(gè)，診斷制品6個(gè)，約占寵物類生物制品的47%。

表1 我國已批準(zhǔn)的一類和二類寵物用病毒類生物制品

表2 已批準(zhǔn)的獸用狂犬病疫苗

表3 已批準(zhǔn)的狂犬病診斷制品

表4 狂犬病疫苗和診斷劑以外的其它寵物用病毒類生物制品(三類或其他)

圖1 已批準(zhǔn)的不同等級(jí)寵物用病毒類生物制品

圖2 已批準(zhǔn)的不同類型寵物用病毒類生物制品

2 2008-2020年我國寵物用病毒類生物制品質(zhì)量檢驗(yàn)情況分析

2.1 寵物用病毒類生物制品不合格批次及主要不合格項(xiàng)目情況 由圖3-圖5可知，2008-2020年共檢出不合格寵物用病毒類制品68批，年均不合格批數(shù)約為5批，不合格項(xiàng)目主要集中在效力、支原體、無菌、剩余水分等4個(gè)參數(shù)，占比分別為49%、21%、13%、9%，合計(jì)占所有不合格項(xiàng)目的比例為92%；性狀和鑒別合計(jì)約占8%。從主要不合格項(xiàng)目逐年分布情況看(圖6)，效力檢驗(yàn)不合格是近五年各類檢驗(yàn)最突出問題，純凈性檢驗(yàn)(支原體和無菌)是需要持續(xù)關(guān)注的項(xiàng)目，而剩余水分、性狀和鑒別檢驗(yàn)不合格僅為不同年份個(gè)別產(chǎn)品出現(xiàn)的問題。

圖3 2008-2020年寵物用病毒類生物制品不合格批次逐年分布

圖4 2008-2020年各類寵物用病毒類生物制品不合格批次匯總情況

圖5 2008-2020年各類寵物用病毒類生物制品不合格項(xiàng)目所占比例情況

圖6 2008-2020年寵物用病毒類生物制品主要不合格項(xiàng)目逐年分布情況

2.2 寵物用病毒類生物制品不合格風(fēng)險(xiǎn)較大產(chǎn)品

從2008-2020年寵物用病毒類生物制品檢驗(yàn)情況看，狂犬病滅活疫苗、狂犬病活疫苗(已停止使用)、犬細(xì)小病毒活疫苗(進(jìn)口)、犬狂犬病、犬瘟熱、副流感、腺病毒和細(xì)小病毒病五聯(lián)活疫苗和犬瘟熱、腺病毒病、細(xì)小病毒病、副流感四聯(lián)活疫苗-犬鉤端螺旋體病(犬型、黃疸出血型)二價(jià)滅活疫苗(進(jìn)口)以及抗CDV、CPV免疫球蛋白為主要不合格產(chǎn)品。對于狂犬病滅活疫苗，其主要不合格項(xiàng)目為效力、無菌和性狀，其中效力不合格占該制品不合格批次的比例為82%(圖7)，需特別關(guān)注。寵物類診斷試劑(盒)未檢出不合格產(chǎn)品，說明產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

圖7 2008-2020年狂犬病滅活疫苗主要不合格項(xiàng)目所占比例

2.3 寵物用病毒類生物制品不合格批次在各類檢驗(yàn)中的逐年分布情況 從寵物用病毒類生物制品不合格批次在各類檢驗(yàn)中的逐年分布情況看(圖8)，2009、2014-2015不合格批次主要為監(jiān)督檢驗(yàn)樣品，2010-2015年(除個(gè)別年份外)不合格批次主要集中在注冊檢驗(yàn)樣品，2008年、2012年以及2017年以來不合格批次主要為文號(hào)復(fù)核檢驗(yàn)樣品，提醒必須加強(qiáng)已批準(zhǔn)制品的生產(chǎn)和檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制。

圖8 2008-2020年寵物用病毒類生物制品不合格批次在各類檢驗(yàn)中的逐年分布情況

2.4 寵物用病毒類生物制品各類檢驗(yàn)的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn) 從寵物用病毒類生物制品不合格項(xiàng)目在各類檢驗(yàn)中的分布情況看(圖9)，效力檢驗(yàn)和支原體檢驗(yàn)是各類檢驗(yàn)都應(yīng)密切關(guān)注的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，效力檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)和性狀是監(jiān)督檢驗(yàn)需重點(diǎn)關(guān)注的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，效力檢驗(yàn)和支原體檢驗(yàn)是文號(hào)復(fù)核檢驗(yàn)的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。對于注冊檢驗(yàn)，不同產(chǎn)品存在不同的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，需從研發(fā)和檢驗(yàn)各環(huán)節(jié)統(tǒng)籌把控。

圖9 2008-2020年寵物用病毒類生物制品不合格項(xiàng)目在各類檢驗(yàn)中的分布

3 關(guān)于加強(qiáng)寵物用病毒類制品質(zhì)量控制和研究的建議

3.1 完善獸用狂犬病滅活疫苗效力檢驗(yàn)通用方法

狂犬病相關(guān)制品約占我國寵物類病毒制品的47%(22/47)，狂犬病疫苗占已批準(zhǔn)寵物疫苗的57%(16/28)，其中狂犬病滅活疫苗占已批狂犬病疫苗(或聯(lián)苗)的81.3%(13/16)，是企業(yè)申報(bào)最多的品種以及國家監(jiān)督抽檢的重點(diǎn)產(chǎn)品。從2008-2020年寵物類生物制品各類檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，狂犬病滅活疫苗是主要的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)制品之一，且效力檢驗(yàn)為主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)(約占該制品不合格參數(shù)的82%)。與美國和歐盟均采用統(tǒng)一的NIH標(biāo)準(zhǔn)方法不同，《中國獸藥典》(2020年版)才發(fā)布我獸用狂犬病滅活疫苗NIH法，但已批準(zhǔn)不同廠家的該制品的效力檢驗(yàn)NIH方法在免疫程序、攻毒毒株、參考疫苗、計(jì)算公式以及使用的小鼠的品系、樣品稀釋比例、攻毒后觀察天數(shù)等差異較大，難以比較其質(zhì)量優(yōu)劣。與美國和歐盟的方法相比[1-3](表5)，2020年《中國獸藥典》新增的NIH法僅作為附錄推薦方法，還未作為已批準(zhǔn)狂犬病滅活疫苗的統(tǒng)一方法，且在標(biāo)準(zhǔn)的可操作性方面仍有進(jìn)一步完善的空間：如尚未明確使用的小鼠品系、性別和體重，未統(tǒng)一參考疫苗供應(yīng)機(jī)構(gòu)以及效力計(jì)算方法，也未基于動(dòng)物福利考慮將美國9CFR和《歐洲藥典》NIH法均推薦采用5個(gè)階段的終點(diǎn)代替方法(表6)作為攻毒后結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。此外，歐洲藥典已推薦將小鼠免疫中和抗體測定法作為NIH法的替代方法[2]，建議我國可以借鑒國際經(jīng)驗(yàn)，盡快統(tǒng)一已批準(zhǔn)狂犬病滅活疫苗的效力檢驗(yàn)方法，并積極針對疫苗的體外抗原定量方法或免疫后血清的定量方法開展研究。

表5 不同國家(地區(qū))獸用狂犬病滅活疫苗NIH方法比較

表6 5階段的終點(diǎn)替代法[1-2]

3.2 加強(qiáng)寵物用制品純凈性檢驗(yàn)方法的研究 無菌、支原體、外源病毒是獸用生物制品純凈性控制的主要內(nèi)容。目前，我國寵物用病毒制品純凈性檢驗(yàn)不合格占比為34%(外源病毒檢驗(yàn)未檢出)，也是僅次于效力檢驗(yàn)的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。對于無菌檢驗(yàn)，除應(yīng)嚴(yán)格按照GMP要求組織生產(chǎn)和檢驗(yàn)外，應(yīng)將“處處防污染”理念貫徹始終，重點(diǎn)從原輔料檢驗(yàn)、半成品檢驗(yàn)、成品檢驗(yàn)三個(gè)環(huán)節(jié)加強(qiáng)控制，建議應(yīng)采用來源明確且質(zhì)控合格的培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)和判定。對于支原體檢驗(yàn)，應(yīng)聚焦細(xì)胞(細(xì)胞系)、種毒和牛血清等獸用生物制品支原體污染主要源頭，牢固樹立“預(yù)防為主”方針，嚴(yán)把細(xì)胞、種毒和血清等原輔材料“入口關(guān)”，嚴(yán)格執(zhí)行種毒種子批制度、細(xì)胞種子庫制度和原輔材料進(jìn)廠檢驗(yàn)制度，從穿衣戴帽戴口罩做起嚴(yán)防人員污染和物料交叉污染，嚴(yán)格生產(chǎn)車間和實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境控制和操作控制，規(guī)范制定和執(zhí)行支原體檢驗(yàn)SOP以及定期抽檢查驗(yàn)制度，在現(xiàn)行《中國獸藥典》支原體檢驗(yàn)方法基礎(chǔ)上，增加DNA熒光染色法作為法定方法之一，同時(shí)建立更敏感的PCR方法作為企業(yè)內(nèi)控方法[4]，以解決目前獸用疫苗支原體污染問題。對于外源病毒檢驗(yàn)，盡管近年來未檢出不合格制品，但BVDV、PIV5污染風(fēng)險(xiǎn)持續(xù)存在[5]，且與美國、歐盟等國家(地區(qū))藥典相比，即將實(shí)施的《中國獸藥典》2020年版的寵物用細(xì)胞及其制品的外源病毒檢驗(yàn)方法仍有進(jìn)一步完善空間，如《中國獸藥典》2020年版對于犬貓用細(xì)胞及其制品，采用熒光方法檢測僅檢測牛病毒性腹瀉病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病病毒等3種特定病毒[3]，而美國9CFR§113.47規(guī)定除以上3種特定病毒外，犬源細(xì)胞和種毒還應(yīng)檢測呼腸孤病毒、犬冠狀病毒、犬瘟熱病毒等特定病毒，貓?jiān)醇?xì)胞和種毒還應(yīng)至少檢測呼腸孤病毒、貓傳染性腹膜炎病毒和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒等特定病毒[1]。建議應(yīng)盡快開展我國寵物用病毒類生物制品外源病毒污染風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測結(jié)果并借鑒國際上同類制品外源病毒控制要求，不斷完善我國寵物類外源病毒檢驗(yàn)方法。

3.3 推動(dòng)建立以單抗為基礎(chǔ)的寵物用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)庫

盡管我國已批準(zhǔn)犬瘟熱單克隆抗體和犬細(xì)小病毒單克隆抗體等2個(gè)單抗制品作為治療性生物制品使用，但國家寵物用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)幾乎空白，亟待開展相關(guān)研究。對于寵物疫苗而言，多聯(lián)或多價(jià)疫苗已成為已批準(zhǔn)制品常態(tài)和研發(fā)趨勢，采用常規(guī)方法制備的多克隆抗體存在試驗(yàn)動(dòng)物篩選困難且特異性難以保證的問題，而單克隆抗體應(yīng)該是一種較好選擇。目前，單克隆抗體作為中和用陽性血清已廣泛應(yīng)用于已批準(zhǔn)的寵物用進(jìn)口多聯(lián)多價(jià)活疫苗的鑒別檢驗(yàn)和外源病毒檢驗(yàn)，采用單抗作為一抗或單抗標(biāo)記的熒光抗體也用于制品病毒含量測定以及外源病毒檢測。建議由中監(jiān)所牽頭組織攻關(guān)，盡快建立單克隆抗體為基礎(chǔ)的寵物用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)庫，不斷夯實(shí)寵物用疫苗和診斷試劑研制基礎(chǔ)。

3.4 強(qiáng)化寵物用疫苗及診斷制品重點(diǎn)品種研制

寵物用生物制品已成為行業(yè)研究熱點(diǎn)。從已批準(zhǔn)的寵物用制品看，犬用疫苗和診斷試劑為主要申報(bào)品種，分別占已批寵物類疫苗和診斷試劑的89%和86%，而貓用疫苗和診斷試劑僅占11%和14%。從產(chǎn)品品種看，犬用疫苗已涵蓋狂犬病、犬瘟熱、犬細(xì)小病毒病、犬副流感、犬腺病毒、犬冠狀病毒病以及犬鉤端螺旋體(犬型、黃疸出血型)等7種主要疾病，犬用診斷試劑基本與疫苗病原一致，其中狂犬病病原和抗體診斷試劑數(shù)量和品種最多，約占已批診斷試劑的43%(6/14)。貓用疫苗主要為狂犬病、貓鼻氣管炎、嵌杯病毒病、泛白細(xì)胞減少癥等4種疫病且均為進(jìn)口制品，診斷試劑僅有貓杯狀病毒膠體金試制條和貓泛白細(xì)胞減少癥膠體金試紙條2種，研發(fā)空間均很大。從研發(fā)角度看，基于國內(nèi)犬貓流行毒株的多聯(lián)多價(jià)疫苗、弓形蟲等人畜共患寄生蟲疫苗和檢測試劑、貓用疫苗的國產(chǎn)化疫苗、野生動(dòng)物用狂犬病口服標(biāo)記活疫苗、狂犬病滅活疫苗體外抗原含量檢測試劑盒和免疫后血清的定量檢測試劑盒以及貓用疫病診斷試劑可作為今后一個(gè)時(shí)期的研發(fā)重點(diǎn)。