門氏芪元顆粒的制備工藝研究

靳貝貝　郭鵬飛　梅桂馨　裴香萍　梁惠珍　門九章

【摘 要】 目的：建立門氏芪元顆粒的制備工藝方法。方法：以出膏率和顆粒中黃芪甲苷提出量為評價指標，影響因素分別為加水量、提取次數(shù)和提取時間，采用L9（34）正交設計試驗法優(yōu)選門氏芪元顆粒的最佳提取工藝。以顆粒的成型性、溶化性、吸濕性、堆密度和休止角的綜合評分為評價指標篩選輔料糊精、淀粉的比例確定最佳制備工藝。結(jié)果：10倍量水、每次0.5h、提取3次為最佳提取工藝;潤濕劑95%乙醇，藥粉：糊精：淀粉的比例為4∶1∶3為最佳制備工藝。結(jié)論：門氏芪元顆粒的提取工藝和制備工藝穩(wěn)定、可行，評價指標合理、可靠。

【關鍵詞】 門氏芪元顆粒;提取工藝;制備工藝;正交試驗法;黃芪甲苷

【中圖分類號】R283.3 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）12-0034-05

Study on Preparation Process of Mens Qiyuan Granules

JIN Beibei1 GUO Pengfei1 MEI Guixin1 PEI Xiangping1* LIANG Huizhen1 MEN Jiuzhang2

1.College of Traditional Chinese Medicine， Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Jinzhong 030619， China;

2.Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Jinzhong 030619， China

Abstract：Objective To establish the extraction and preparation process of Mens Qiyuan granules.Methods The extraction rate and the amount of astragaloside IV in the granules were used as the evaluation indexes. The water addition， extraction times and extraction time were the influencing factors. The best extraction process of Mens Qiyuan granules was optimized by L9（34） orthogonal design test method.The optimum preparation process was determined by screening the ratios of excipient dextrin and starch by using the comprehensive scores of the formability， solubility， hygroscopicity， bulk density and angle of repose of the particles as the evaluation index.Results The optimal extraction process was： 10 times the amount of water， each time 0.5h，extraction 3 times; the best preparation process was wetting agent 95% ethanol， powder： dextrin： the ratio of starch was 4∶1∶3.Conclusion The extraction process and preparation process of Mens Qiyuan granules are stable and feasible， and the evaluation indexes are reasonable and reliable.

Key words：Mens Qiyuan Granules;Extraction Process; Preparation Process; Orthogonal Test Method; Astragaloside IV

門氏芪元顆粒來源于山西名醫(yī)門九章教授的經(jīng)驗方門氏芪元湯，由黃芪、當歸、玄參、金銀花等中藥組成。門氏芪元湯臨床使用多年，具有益氣養(yǎng)陰，化瘀解毒的功效，用于氣陰兩虛證。方中的金銀花具有抗內(nèi)毒素、解熱、抗炎作用[1]，玄參、當歸含有多糖[2]、黃酮類化合物[3]、揮發(fā)油[4]等多種化學成分，具有抗腫瘤、抗氧化等生理活性[5-7]，黃芪主要有效成分為黃芪甲苷，具有免疫調(diào)節(jié)、降糖、抗病毒等藥理作用[8]。本方在臨床上療效明確，為滿足臨床用藥需求，將其由傳統(tǒng)湯劑研發(fā)成為醫(yī)院顆粒制劑。門氏芪元顆粒欲申報醫(yī)院制劑，中試生產(chǎn)已經(jīng)完成，質(zhì)量標準也已經(jīng)確定，本研究通過L9（34）正交設計試驗法優(yōu)選門氏芪元顆粒的最佳提取工藝，然后通過考察不同輔料配比、潤濕劑用量，以顆粒成型性、溶化性、吸濕率、堆密度及休止角為指標，篩選處方中加入輔料配比及最佳成型工藝，為門氏芪元顆粒的制備工藝研究提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters-e2695高效液相色譜儀及Waters-2424蒸發(fā)光散射檢測器（美國Waters公司）;BGZ-76型烘箱（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）;TDZ5-WS型離心機（湖南湘立科學儀器有限公司）;DiamonsilC18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）;微量進樣器（批號：113048;上海高鴿工貿(mào)有限公司）;SB-5200DTDN超聲清洗器（新芝生物科技股份有限公司）;AB-135型十萬分之一電子天平（瑞士METTLER公司）;FA2014型萬分之一天平（上?？萍加邢薰荆?FW100型萬能粉碎機（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）;定性濾紙（杭州富陽北木漿紙有限公司），蒸鍋，燒杯，量筒，砝碼，培養(yǎng)皿，蒸發(fā)皿，玻璃棒，漏斗，紗布，塑料布，藥匙，篩網(wǎng)，5mL離心管，分液漏斗，玻璃干燥器，稱量瓶。

1.2 試藥 黃芪藥材（太谷縣廣源堂藥業(yè)有限公司，市售，1.0kg/袋，批號：1607001）;玄參藥材（河北全泰藥業(yè)有限公司，市售，1.0kg/袋，批號1608003）;當歸藥材（鄭州瑞龍制藥股份有限公司，市售，1.0kg/袋，16120102）;金銀花藥材（河北全泰藥業(yè)有限公司，市售，1.0kg/袋，批號：1608201）;糊精（天津市科密歐化學試劑有限公司，500g/瓶）;可溶性淀粉;氯化鈉。

2 方法與結(jié)果

2.1 門氏芪元顆粒提取工藝

2.1.1 單因素考察 分別對溶劑倍量、提取時間、提取次數(shù)進行了考察，結(jié)果表明溶劑倍量為14倍、提取次數(shù)為3次，每次1.0h時，綜合評分達到最大;提取次數(shù)不斷增加，綜合評分也隨之增加。

2.1.2 正交試驗設計 以出膏率、黃芪甲苷的提出量作為考察指標，以水為提取溶劑，進行L9（34）正交試驗[9]選擇三個影響因素分別為加水量（A），提取時間（B）和提取次數(shù)（D），確定提取的最佳條件。

2.1.3 按照處方稱取各藥材，共9份，按表1正交試驗設計方案進行提取，計算出膏率。

2.2 黃芪甲苷含量測定

2.2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱（200mm×4.6mm，5.0μm）;以乙腈-水（32∶68）為流動相，流速為1.00mL/min;柱溫：30℃;蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù);載氣流速2.1L/min，漂移管溫度為100℃。

2.2.2 對照品溶液的制備[10] 精密稱取黃芪甲苷對照品加甲醇制備0.314mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備[11] 精密稱取樣品干膏2.0g，置錐形瓶中并精密加入甲醇100mL，加熱回流1h，冷卻，過濾。用甲醇少量多次洗滌藥渣，合并濾液，蒸干，殘渣加水20mL使其溶解。加水飽和正丁醇液40mL，振搖提取3次，合并正丁醇液，加氨水40mL，洗滌3次。棄去氨液，蒸干正丁醇液，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.2.4 標準曲線的繪制 分別精密吸取黃芪甲苷對照品儲備溶液4、8、10、12、16、20μL，注入高效液相色譜儀，以黃芪甲苷進樣質(zhì)量的對數(shù)為橫坐標，峰面積的對數(shù)為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=1.6442X+5.3244，r=0.9999，在1.256～9.420μg范圍內(nèi)線性關系良好。結(jié)果見表2和圖1。

2.2.5 測定法 采用高效液相色譜法，精密吸取供試品溶液20μL，記錄峰面積，計算黃芪甲苷的提出量。

2.2.6 測定結(jié)果 見表3。

通過表3極差r可知，三個影響因素的影響大小是：D>A>B，即提取次數(shù)影響最大，而提取時間影響最小。直觀分析可得，較佳提取工藝條件為：A3B2D3，即14倍量水，提取3次，每次1.0 h。從表4方差分析可知，B和A因素沒有顯著性影響，D因素有顯著性影響。綜合考慮經(jīng)濟效益等因素，得出門氏芪元顆粒的最佳提取工藝為：A1B1D3，即10倍量水，提取3次，每次0.5h。

2.2.7 工藝驗證 按處方比例稱取藥材3份，按最佳提取工藝進行提取，按照供試品溶液的制備方法進行制備，記錄峰面積，計算出膏率和黃芪甲苷的提出量，結(jié)果見表5。

2.3 制劑成型工藝研究

2.3.1 制粒方法選擇 濕法制粒[12]是當前最為廣泛應用的制粒方法，在制粒之前將粘合劑或者濕潤劑等添加到藥粉中，將藥粉制成濕潤顆粒，其制粒效果較高。通過濕法制粒增強了顆粒的粘合性且顆粒容易成型。采用稠浸膏干燥，粉碎后以相應比例的輔料補足至處方量，混勻，制成顆粒。本制劑采用藥粉∶輔料=1∶1。

2.3.2 潤濕劑的選擇 本復方在經(jīng)過水煎煮濃縮后發(fā)現(xiàn)稠膏黏性較強，而且含糖量高。顆粒制劑過程中以一定濃度的乙醇為潤濕劑，降低粘性和吸濕性便于顆粒成型。以手捏成團，輕壓則散為原則篩選乙醇的濃度。結(jié)果見表6和圖2～4。

因此，選擇95%的乙醇做為潤濕劑進行制粒。

2.3.3 吸收劑淀粉、糊精用量的選擇 選擇糊精和可溶性淀粉作為輔料進行處方篩選。結(jié)果見表7。

2.3.4 顆粒成型性比較 將干浸膏粉按表表六中方法與相應輔料混勻，95%乙醇制粒。以篩分法[13]對顆粒進行測定，取平均值。結(jié)果見表8。

成型率=（過篩后顆粒的質(zhì)量/過篩前顆粒的質(zhì)量）×100% 。

2.3.5 顆粒溶化性比較 精密稱定的顆粒0.2g，加入干燥恒重的5mL離心管中，精密加入沸水5mL，振蕩5min，3000r/min離心15min，棄去上清液，80℃進行干燥，精密稱定重量，計算溶化率。結(jié)果見表9。

溶化率=溶化顆粒質(zhì)量/顆粒質(zhì)量×100%。

2.3.6 顆粒吸濕率的比較 在玻璃干燥器裝入過飽和室溫氯化鈉溶液，置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱24h，干燥器內(nèi)部相對濕度為75%，在已恒重的稱量瓶底部放入各處方顆粒，準確稱重后置于裝有過飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內(nèi)（稱量瓶蓋打開），放于25℃恒溫培養(yǎng)箱，72h后稱定重量，計算顆粒吸濕百分率[14]。結(jié)果見表10。

吸濕百分率（%）=（吸濕后顆粒質(zhì)量-吸濕前顆粒質(zhì)量）/吸濕前顆粒質(zhì)量×100%。

2.3.7 堆密度的測定 將過篩后的質(zhì)量作為M（g）并裝入干燥的量筒中，輕輕振動，記錄體積（V），兩者的比值即為堆密度。結(jié)果見表11。

堆密度=M/V。

2.3.8 休止角的測定 采用固定漏斗法，計算休止角tga=H/R.重復做5次，計算平均值。結(jié)果見表12。

2.3.9 綜合評分 根據(jù)表中綜合評分可知，處方3號92.23分為最高分，故篩選最優(yōu)原輔料配比為浸膏粉∶糊精∶淀粉=4∶1∶3，95%的乙醇進行制粒。見表13。

2.4 門氏芪元顆粒樣品 見圖5。

3 討論

提取工藝的確定 采用正交試驗和高效液相色譜法，以出膏率和黃芪甲苷在復方中的提出量為評價指標進行評價。最后確定的提取工藝為：10倍量水，提取3次，每次0.5h。

顆粒成型工藝的確定 按最優(yōu)原輔料配比，即處方浸膏粉∶糊精∶可溶性淀粉=4∶1∶3，以95%乙醇為潤濕劑制粒。

門氏芪元顆粒來源于名老中醫(yī)門九章經(jīng)驗方門氏芪元湯，臨床效果良好，中藥湯劑作為中醫(yī)臨床用藥的主要劑型，可以隨證加減、靈活組方，但攜帶、煎煮不便，湯液味苦量大，不易被接受。中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑相比不需要煎煮，服用時溫開水配成沖劑即可，便于攜帶、保存方便;解決了傳統(tǒng)中藥保質(zhì)期短、中藥飲片易潮易蟲蛀的缺點。

本方為復方，所含成分較多，若使用紫外檢測波長檢測雜質(zhì)對色譜峰的干擾較大。而ELSD檢測器作為一種通用型的的檢測器，可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，不需要樣品含有發(fā)色基團。基線穩(wěn)定僅對不揮發(fā)性物質(zhì)顆粒進行檢測，不存在紫外末端吸收的問題，流動相低溫霧化和蒸發(fā)，對熱不穩(wěn)定和揮發(fā)性化合物亦有較高靈敏度，對溫度變化不敏感，即使在梯度洗脫時基線也很平穩(wěn)，所以本文最終確定了用 HPLC-ELSD方法對門氏芪元顆粒中的黃芪甲苷進行含量測定。

中藥顆粒劑是以中藥湯劑為原料，經(jīng)過提取、分離、制粒、干燥、制粒過程完成，且成分較為復雜，為充分發(fā)揮中藥的各種成分，提高中藥顆粒的療效，在中藥顆粒劑提取、純化分離、制粒過程中需認真仔細，中藥顆粒劑發(fā)展迅速，可取代傳統(tǒng)中藥湯劑，滿足人們用藥治病的需求。

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