高效液相色譜法測定三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量*

李 莎，楊 柳，吳紅洋，蒲道俊，余春梅，范能全△

（1.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶401121；2.西南藥業(yè)股份有限公司，重慶400038）

藥用包裝材料塑料制品如三層共擠輸液用管等在藥品行業(yè)應用十分廣泛，由于塑料的分子結構及靜電積累、物質擴散和貼合形成真空等，塑料薄膜在生產和使用過程中存在開口性差等問題，加入爽滑劑可減少該現(xiàn)象的發(fā)生[1]。爽滑劑芥酸酰胺能提高聚烯烴薄膜的開口性能[2]，具有優(yōu)異的光滑度和耐黏著力，常作為薄膜的加工助劑[3]。芥酸酰胺能使小鼠行動變緩，認知能力下降，易水解為芥酸，引起皮膚損傷[4－6]。藥品包裝中的芥酸酰胺通過溶解和分子熱運動遷移出來，其降解產物直接或間接促進有色化合物和有害物質形成[7]，給藥品帶來安全風險。目前，芥酸酰胺的檢測方法主要有氣相色譜(GC)法[8]、氣相色譜－質譜（GC－MS）法[9]、紅外光譜法[10]、高效液相色譜（HPLC）法[11]、液相色譜－質譜法[12－13]等。由于HPLC法檢測芥酸酰胺具有良好的穩(wěn)定性和靈敏度[14]，故本研究中建立了測定三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的HPLC法?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260型液相色譜儀（日本Agilent公司）；XSE205型天平（瑞士梅特勒－托利多公司，精度為十萬分之一）；ZM200型均質器（德國萊馳公司）；HHS－21－8型水浴鍋（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）；Milli－Q Advantage A10型超純水機（法國默克密理博公司）。

1.2 試藥

三層共擠輸液用管（企業(yè)A，批號分別為836LA，836LD，836LF）；芥酸酰胺對照品（CATO公司，CAS號為112－84－5，批號為CCHM700539－1811，規(guī)格為25 g，純度為87.4%）；乙腈（色譜級，安徽時聯(lián)特種溶劑股份有限公司）；異丙醇（色譜級，成都市科隆化學品有限公司）；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈；流速：1.0 mL／min；柱溫：60℃；檢測波長：200 nm；進樣量10 μL。在該色譜條件下，空白樣品溶液和樣品基質對芥酸酰胺的測定均無干擾，芥酸酰胺在6.706 min能得到較好分離，表明專屬性較好。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.erucamideA.Reference solution B.Spiked sample solution C.Blank sample solutionFig.1 HPLC chromatograms

2.2 溶液制備

取芥酸酰胺對照品0.058 57 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加異丙醇溶解并定容，得質量濃度為500μg／mL的對照品貯備液。臨用前用異丙醇稀釋成所需濃度的對照品溶液。取粉碎后的三層共擠輸液用管2.5 g，精密稱定，加25.0 mL異丙醇，用回流裝置回流煮沸2 h，冷卻至室溫，用0.45 μm有機濾膜濾過，即得供試品溶液。同法制備缺三層共擠輸液用管的空白樣品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察與檢測限、定量限確定：分別吸取2.2項下對照品貯備液0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，2.00，3.00 mL，置10 mL容量瓶中，加異丙醇配制成質量 濃 度 分 別 為5.12，10.24，20.48，51.19，102.38，204.76，307.14 μg／mL的系列對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，以峰面積（Y）為縱坐標、芥酸酰胺質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝6.658 62X－3.482 26，R2＝1.000（n＝7）。結果表明，芥酸酰胺的質量濃度在5.12～307.14 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。將上述對照品溶液逐級稀釋，按2.1項下色譜條件進樣測定，以信噪比(S／N)為3時的質量濃度為檢測限，以S／N為10時的質量濃度為定量限。結果檢測限為0.16 μg／mL，定量限為0.50 μg／mL。

精密度試驗：取線性關系考察項下質量濃度為51.19 μg／mL的對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果芥酸酰胺峰面積的RSD為0.19%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取線性關系考察項下質量濃度為102.38 μg／mL的對照品溶液10 μL，分別于0 h和11 h時進樣測定，記錄峰面積。結果芥酸酰胺峰面積的變化率為5.03%，表明對照品溶液在11 h內穩(wěn)定。

重復性試驗：取樣品（批號為836LA）適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，共6份，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算樣品含量。結果芥酸酰胺含量的RSD為0.93%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品（批號為836LA）2.5 g，精密稱定，共9份，依法制備供試品溶液，分別精密加入混合對照品溶液（質量濃度為1 023.80 μg／mL）2.0，2.5，3.0 mL，平行3份，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算回收率。結果見表1。

表1 三層共擠輸液用管中芥酸酰胺加樣回收試驗結果（n＝9）Tab.1 Results of the recovery test of erucamide in three－layer co－extrusion infusion tube（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取樣品（批號分別為836LA，836LD，836LF），依法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算含量。結果三層共擠輸液用管中芥酸酰胺的含量分別為0.14%，0.09%，0.11%。

3 討論

試驗結果發(fā)現(xiàn)，所測三層共擠輸液用管提取液中均檢測出芥酸酰胺，含量為0.09%～0.14%，提示藥品生產企業(yè)應對三層共擠輸液用管藥包材中的芥酸酰胺進行監(jiān)控，綜合考慮選擇適宜的藥品包裝材料。本研究中建立的HPLC法符合三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的分析要求，為藥品與藥包材相容性研究中芥酸酰胺的分析提供了參考，也對芥酸酰胺國內檢測標準的制訂有一定參考價值。該方法操作簡便，結果準確，重復性好，可用于三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的測定。