食品中金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)方法分析

賀學(xué)俊

摘要：在所有食物中毒型病毒中，金黃色葡萄球菌腸毒素在其中最為常見。由于其在社會(huì)環(huán)境中無處不在，因此也深深影響著人們的飲食安全?；诖耍疚暮喴治鼋瘘S色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)方法，以期為相應(yīng)工作者有所啟發(fā)。

關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌;腸毒素;檢測(cè)方法

【中圖分類號(hào)】R512.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2107-2306（2020）01-149-02

食品中金黃色葡萄球菌腸毒素主要是食物被某些物質(zhì)污染后，經(jīng)過腐敗變質(zhì)而產(chǎn)生的。從一些資料文獻(xiàn)可以看出，引起金黃色葡萄球菌食物中毒，僅需18ug的腸毒素（SE），并且當(dāng)前已被確認(rèn)的SE已經(jīng)有10類，其分別為a、b、c、d、e、g、h、i、j、k。而在這之中c類因電點(diǎn)差異，有又可以分為三類（c，、c：，c），容易引發(fā)食物中毒的主要為a、d兩個(gè)類型[1]?；诖?，若在食物檢測(cè)時(shí)，沒有合理運(yùn)用相應(yīng)的檢測(cè)手法，會(huì)嚴(yán)重危害人們的飲食安全，甚至還有可能帶來嚴(yán)重的影響。因此，深入研究食品中金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(cè)方法具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

一、金黃色葡萄球菌菌腸毒素檢測(cè)方法

從檢測(cè)原理的角度出發(fā)，可以將金葡菌腸毒素檢測(cè)方式細(xì)分成五個(gè)角度：超抗原技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、免疫血清學(xué)方法、生物學(xué)檢測(cè)方法。其具體檢測(cè)方式如下：

（一）超抗原技術(shù)

當(dāng)前一些研究機(jī)構(gòu)經(jīng)實(shí)驗(yàn)分析認(rèn)為，可以利用SE中的超抗原（SAg），來進(jìn)行該類病原體的檢測(cè)。其主要是因?yàn)镾Ag的刺激能力較強(qiáng)，其能與MHc1分子結(jié)合，并且不需對(duì)其進(jìn)行加工，就能與T細(xì)胞抗原體上的TCRVβ，較好的結(jié)合在一起。因?yàn)樵赥CRVβ中，含有的基因有限，且擁有保守的核苷酸序列。所以，僅需在較低（甚至更低）的濃度下，大量的T細(xì)胞既可被SAg激活[2]?；诖?，一些研究機(jī)構(gòu)依據(jù)SE中的SAg分子，運(yùn)用流式細(xì)胞分析技術(shù)，觀測(cè)T細(xì)胞的實(shí)際情況，進(jìn)而將其中的SE篩選出來。固然此類方式能較好的檢查出食物中的SE，然而卻沒有相應(yīng)的特異性，無法對(duì)SAg類型作出精準(zhǔn)的判斷。所以，只能將其作為一個(gè)預(yù)選處理的手段。

（二）生物傳感技術(shù)

自進(jìn)入90年代以后，毒素檢測(cè)技術(shù)在生物技術(shù)持續(xù)發(fā)展的支撐下，得到了較好的發(fā)展——生物傳感技術(shù)。當(dāng)前，運(yùn)用生物傳感技術(shù)主要有三類用于食品毒素檢測(cè)：壓電晶體免疫傳感器、光學(xué)生物傳感器、電化學(xué)免疫傳感器。壓電晶體免疫傳感器，其主要將特異免疫反應(yīng)和壓電質(zhì)量傳感器（高靈敏度）兩者有機(jī)結(jié)合在一起，其在石英晶體阻尼的理論基礎(chǔ)上，能將要檢測(cè)的SEB在檢測(cè)液直接檢測(cè)出來，并且不用進(jìn)行任何的步驟分離和標(biāo)記，操作方便、簡單，但是其靈敏度較低;光學(xué)生活傳感器，其主要在換能器中運(yùn)用光敏元件，并依據(jù)光的相位、頻率、強(qiáng)度等在相應(yīng)界面中的變化原理，進(jìn)而檢測(cè)毒素在介質(zhì)中的含有量。該方式的有點(diǎn)為：較高的靈敏度;電化學(xué)免疫傳感器，其主要是將電化學(xué)技術(shù)和生活技術(shù)有機(jī)的結(jié)合在一起，其既能進(jìn)行化學(xué)放大（酶電極），又具備良好的識(shí)別功能（識(shí)別抗原體間分子）。

（三）聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

聚合酶鏈反應(yīng)技（PCR）術(shù)主要是指利用其的特異性和高敏性，檢測(cè)食物中的毒素基因，并且運(yùn)用該種方式能夠進(jìn)行直接檢測(cè)。一些研究學(xué)者運(yùn)用PCR檢測(cè)方式，在四小時(shí)內(nèi)完成對(duì)TST、SECL以及SEB等基因的檢測(cè)，甚至有些研究人員發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用該種方式甚至能對(duì)細(xì)菌的克隆進(jìn)行測(cè)量。同事，一些科學(xué)家在依據(jù)PCR的特性，延伸出多重PCR檢測(cè)方式，其能將金葡菌腸毒腸毒素中的SEA，SEB，SEC，SED，SEE六對(duì)引物基因較好的檢測(cè)出來[3]。此類方式較單一引物而言，更加有效、可靠、更具特具性。通過PCR檢測(cè)方式，進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)，不僅擁有較好的重復(fù)性、較強(qiáng)的特異性、較高的敏感性，還能及時(shí)的診斷出相應(yīng)的病原，但就目前而言，其無法進(jìn)行定量分析。此處應(yīng)注意的是，有些盡管有些菌株擁有產(chǎn)毒基因，但是其卻不會(huì)生產(chǎn)毒素，其有可能是該基因沒有被激活，無法進(jìn)行基因表達(dá)。所以，在運(yùn)用PCR檢測(cè)方式時(shí)，應(yīng)充分考慮各類因素，還未檢測(cè)到毒素的情況下，還應(yīng)運(yùn)用其它的檢測(cè)方式，進(jìn)而防止遺漏檢測(cè)的情況發(fā)生。

（四）免疫血清學(xué)方法

從一些資料文獻(xiàn)可以看出，檢測(cè)腸毒素的有六類：既酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、免疫印跡技術(shù)（Immur～obloting）、固相放射兔疫技術(shù)（SPRLA）、反向乳膠凝集試驗(yàn)（RPLA）、反向間接血凝法（RPHA）以及免疫雙擴(kuò)法（DD）。當(dāng)前由于ELISA具有較高的的靈敏度，相對(duì)較為簡單的操作方式，據(jù)實(shí)驗(yàn)室大量數(shù)據(jù)表明，運(yùn)用ELISA進(jìn)行SE檢測(cè)，其靈敏度高達(dá)2.5ng/mL，所以這幾年該檢測(cè)方式為主流方式。在2002年，我國相關(guān)研究人員（李紅云），通過以SEB單抗1D2為包被抗體、生物素標(biāo)記的另一種SEB單抗2D1為標(biāo)記抗體，采用生物素一鏈親素系統(tǒng)放大的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附方法進(jìn)行測(cè)定血漿及組織中金黃色葡萄球菌腸毒素B，在0.078～10.00～g/L的濃度范圍內(nèi)，SEB標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度值線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為r=0.9906，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室反復(fù)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)該方式快速、簡單，具備較強(qiáng)的穩(wěn)定性，能定量測(cè)定動(dòng)物組織和其血漿中微量SEB，具有一定的推廣價(jià)值。此外，該方式相對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方式而言，其靈敏度最高，但在腸毒素型與型之間易發(fā)生交叉反應(yīng)，多用于直接從食品中檢出腸毒素，在腸毒素分型上應(yīng)用較少。其它的檢測(cè)方式，如免疫印跡和SPRIA等，盡管有較高的靈敏性，但是要么是儀器成本過高，具有一定的放射性污染，要么是操作過程過于復(fù)雜，特別是體重的DD檢測(cè)法，盡管其是最早檢測(cè)腸毒素的手段，但是由于其操作流程繁瑣，需要大量的標(biāo)本，并且靈敏度也不高，所以沒有被推廣。

（五）生物檢測(cè)技術(shù)

生物檢測(cè)技術(shù)，其主要是將分離的SA菌株培養(yǎng)液、染毒食品或患者的嘔吐物，注射到敏感動(dòng)物的皮膚中或?qū)ζ溥M(jìn)行喂飼實(shí)驗(yàn)，最后看實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的狀態(tài)反應(yīng)，進(jìn)而判斷SE是否存在于檢測(cè)物中。但是此類檢測(cè)手段沒有不是特別的理想，因?yàn)榕c人在中毒后（腸毒素）反應(yīng)類似的動(dòng)物，只有豚鼠和猴兩類。并且此類方式的靈敏度不高，要經(jīng)過非常繁瑣的操作流程，較難將實(shí)驗(yàn)中午配備齊全，較難推廣[4]。此后，在1997年，某個(gè)研究機(jī)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)運(yùn)用兔血T—細(xì)胞可以較好的彌補(bǔ)之前生物檢測(cè)技術(shù)中的缺陷問題。

二、結(jié)語

從上述的內(nèi)容中可以看出，當(dāng)前在SE的檢測(cè)方式上，既有利也有弊。從當(dāng)前對(duì)金黃葡萄球菌腸毒素在食物中的檢測(cè)，主要采用的是血清學(xué)檢測(cè)方式，而上述的其它類型檢測(cè)方式，在醫(yī)學(xué)檢測(cè)中運(yùn)用的較多。但是，就當(dāng)前的檢測(cè)方式而言，還存在一定的不足，因此，相應(yīng)的部門機(jī)構(gòu)還應(yīng)加深對(duì)SE檢測(cè)方式的研究，進(jìn)而推出更高靈敏度，更便捷的檢測(cè)方式，更高效的檢測(cè)流程等。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄭玉玲，歐陽譞，黃文華，劉鵬，孔德聰，姜永強(qiáng)，韓雪蓮，律清宇，江華.金黃色葡萄球菌腸毒素陣列ELISA檢測(cè)方法的建立及評(píng)價(jià)[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2019，35（08）：695-701.

[2]陳鏡如，梁惠，陳欣林，石明，黎誠耀，張玉明.金黃色葡萄球菌腸毒素C促進(jìn)異基因骨髓移植小鼠早期T細(xì)胞重建[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2019，35（15）：2365-2369.

[3]張彥斌，范鑫，朱葉青，張宏博.食品中金黃色葡萄球菌腸毒素分子檢測(cè)方法探索[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2019，6（54）：174.

[4]楊丹茹，趙燕英，唐俊妮.金黃色葡萄球菌腸毒素SEK的純化及DAS-ELISA檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].現(xiàn)代食品科技，2019，35（03）：225-233.

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