C反應(yīng)蛋白基因單核苷酸多態(tài)性與家族遺傳性抑郁癥發(fā)病的關(guān)系研究

王士良 鐘華 陸梅娟 宋國(guó)華 章曉梅 林敏 楊勝良 錢(qián)敏才

C反應(yīng)蛋白（CRP）是一種廣泛存在于脊椎動(dòng)物體內(nèi)的保守蛋白，其表達(dá)水平與炎癥反應(yīng)有關(guān)[1]。在非炎癥情況下，人體內(nèi)正常的血清CRP水平極低，很難檢測(cè)出；但是在炎癥最初的24～48h內(nèi)，肝臟會(huì)大量產(chǎn)生CRP并分泌至血液循環(huán)中，使血清CRP水平提高2 000倍。近期研究表明，在慢性炎癥條件下，人體內(nèi)CRP水平會(huì)輕微增高，并維持在3～10mg/L[2]。研究人員已發(fā)現(xiàn)慢性炎癥可能參與了抑郁癥的發(fā)生過(guò)程，目前關(guān)于慢性炎癥與抑郁癥關(guān)系的假說(shuō)主要有2個(gè)[3]：一是慢性炎癥所導(dǎo)致的神經(jīng)病理變化可能誘導(dǎo)了抑郁癥的發(fā)生，而血清CRP水平上調(diào)與抑郁癥發(fā)病并無(wú)直接因果關(guān)系；二是慢性炎癥所導(dǎo)致的CRP水平上調(diào)，通過(guò)不明機(jī)制，最終導(dǎo)致了抑郁癥的發(fā)生。盡管目前學(xué)術(shù)界投入了大量精力去試圖精確描述抑郁癥與CRP水平的關(guān)系以及相關(guān)機(jī)制，但由于抑郁癥患者個(gè)體差異過(guò)大，仍無(wú)法得出統(tǒng)一結(jié)論。有研究發(fā)現(xiàn)，CRP基因單核苷酸多態(tài)性（SNPs）變異率和家族遺傳性抑郁癥（familial inheritance depression，fDEP）的發(fā)病率都大約為40%[4]。此外，在對(duì)同卵雙胞胎的研究中發(fā)現(xiàn)CRP會(huì)影響抑郁癥發(fā)病的基因通路[5]。并有研究發(fā)現(xiàn)特定的CRP SNPs可能會(huì)影響血清CRP水平[6]。筆者通過(guò)研究fDEP患者的CRP SNPs來(lái)進(jìn)一步探討CRP與抑郁癥發(fā)病的關(guān)系。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2015年7月至2016年7月我院精神科確診為抑郁癥的男性患者60例作為fDEP組，年齡（45.09 ±8.12）歲；BMI（25.31± 5.01）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合國(guó)際疾病分類(lèi)（ICD-10）中抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）漢密爾頓抑郁量表（HAMD-17）評(píng)分＞17分；（3）一級(jí)親屬中至少有1名家族成員有抑郁癥病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有慢性肝病、腎病、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神分裂癥及其它慢性炎癥性疾病。（2）長(zhǎng)期使用胰島素、糖皮質(zhì)激素或者減肥藥。另選取同期我院健康體檢男性60例作為健康對(duì)照組，年齡（47.85±7.23）歲；BMI（26.64±4.22）kg/m2。兩組間年齡、BMI等一般資料比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。所有納入者均簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 CRP單抗包被的聚苯乙烯珠子（日本W(wǎng)oko公司）；DNA分離提純?cè)噭┖校绹?guó)QIAGEN 公司，Cat No./ID：69504）；高通量分析儀器（美國(guó)羅氏公司，LightCycler 480）；化學(xué)分析儀（美國(guó)Abbott公司，Architect c16000）。

1.2.2 標(biāo)本采集 兩組受試者禁食8h，且在無(wú)大量運(yùn)動(dòng)12h以及無(wú)酒精攝入24h后抽取肘靜脈血40ml，分置2根試管。第1管20ml血樣用于檢測(cè)相關(guān)血清生化指標(biāo)。第2管20ml冷凍后進(jìn)行DNA分離提純。

1.2.3 血清生化指標(biāo)水平檢測(cè) 采用化學(xué)分析儀檢測(cè)兩組受試者各項(xiàng)血清生化指標(biāo)，檢測(cè)CRP時(shí)將CRP單抗包被在聚苯乙烯珠子上，使得CRP抗原富集并增強(qiáng)檢測(cè)靈敏度[7]（可以檢測(cè)0.175～1 100mg/ml的CRP）。檢測(cè)結(jié)果以對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化形式進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

1.2.4 DNA提取和基因多態(tài)性檢測(cè) 按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)，分離并提取冷凍血樣標(biāo)本中的DNA。CRP基因定位于1號(hào)染色體上（1q21-23），包含2段外顯子。通過(guò)使用Tagger algorithm和HapMap genotype（中國(guó)）的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析預(yù)測(cè)，本研究選定了5個(gè)中國(guó)漢族人群常見(jiàn)的CRP SNPs多態(tài)性位點(diǎn)，包括rs3093059、rs1417938、rs1800947、rs1130864和rs1205位點(diǎn)，見(jiàn)圖1。所有受試者的標(biāo)本均采用高通量分析儀器進(jìn)行SNPs的基因型檢測(cè)，并采用相關(guān)軟件進(jìn)行不同基因型的計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)（LightCycler 480 software release 1.5.1.62 SP1）。

圖1 CRP蛋白的基因區(qū)域結(jié)構(gòu)圖和5個(gè)SNP位點(diǎn)的位置

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS v15.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)以及Welch校準(zhǔn)。CRP基因多態(tài)性分布采用χ2檢驗(yàn)并進(jìn)行Bonferroni校準(zhǔn)。不同CRP SNPs組間的血清CRP水平比較采用單因素方差分析以及Tukey后檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組各項(xiàng)生化指標(biāo)的比較 fDEP組血清CRP水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），其它指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），見(jiàn)表 1。

表1 兩組間各項(xiàng)生化指標(biāo)的比較

2.2 兩組CRP SNPs的比較 rs1417938位點(diǎn)的A等位基因以及rs1205的C等位基因，其出現(xiàn)頻率在fDEP組中較對(duì)照組明顯增高。此外，rs1800947的GG/CC比例也在fDEP組中明顯增高。另外2個(gè)常見(jiàn)的SNPs分布在兩組中并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)表2。

2.3 不同CRP基因型受檢者血清CRP水平的比較rs1205的低頻等位基因型CC（fDEP組20例，健康對(duì)照組4例）和rs1417938的低頻等位基因型AA（fDEP組26例，對(duì)照組2例），均可以顯著上調(diào)血清CRP的表達(dá)水平（均P＜0.01）。此外，rs1800947位點(diǎn)的低頻等位基因型CC（fDEP組4例，健康對(duì)照組16例）顯著下調(diào)了血清CRP水平。詳見(jiàn)表3。

3 討論

本研究檢測(cè)了fDEP患者和健康對(duì)照的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo)以及多種生理生化和炎癥指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有血清CRP水平發(fā)生了明顯變化，即血清CRP水平在fDEP患者中顯著增高。此外，筆者還發(fā)現(xiàn)了3個(gè)CRP SNPs位點(diǎn)的亞型分布與fDEP發(fā)病有關(guān)，且并未受到受試者年齡以及生理狀況的影響。

表2 兩組CRP SNPs的比較[例（%）]

表3 不同CRP基因型受檢者血清CRP水平的比較

目前很多關(guān)于CRP和抑郁癥的研究結(jié)論仍有爭(zhēng)論。Luciano等[8]通過(guò)兩組排除年齡和性別的同期群分析研究中發(fā)現(xiàn)，抑郁癥伴隨的情緒癥狀與CRP SNPs分布在老年人中呈正相關(guān)；rs1800947的不同等位基因表型與抑郁癥有中等程度的關(guān)聯(lián)性。Almeida等[9]在3 700多例70歲以上男性中展開(kāi)的研究發(fā)現(xiàn)，rs1205的等位基因表型與抑郁癥發(fā)病相關(guān)。此外，還有一組研究表明CRP基因的特定單倍體多態(tài)性與血清CRP水平和抑郁癥發(fā)病呈正相關(guān)[10]。這些結(jié)果均提示，特定的CRP SNPs可能與抑郁癥發(fā)病相關(guān)。

考慮到患者高度的個(gè)體差異性可能導(dǎo)致了既有研究結(jié)論的不一致，目前學(xué)術(shù)界的共識(shí)停留在特定的CRP SNPs可以調(diào)節(jié)血清CRP水平[11-14]。比如，rs1205的CC等位基因被發(fā)現(xiàn)可以上調(diào)血清CRP水平[15]。在本研究中，筆者同樣發(fā)現(xiàn)rs1205的CC等位基因以及rs1417938的AA等位基因可以顯著上調(diào)血清CRP水平，這個(gè)結(jié)果與既有研究相一致。同時(shí)筆者還發(fā)現(xiàn)rs1800947的CC等位基因表現(xiàn)出了明顯下調(diào)CRP水平的趨勢(shì)。盡管詳細(xì)的機(jī)制仍然不明確，筆者推測(cè)這種調(diào)節(jié)可能與基因的表觀遺傳學(xué)條件相關(guān)，也就是說(shuō)，上述幾個(gè)SNPs位點(diǎn)有可能發(fā)生在CRP基因的表達(dá)調(diào)節(jié)區(qū)域。

基于上述結(jié)論，并考慮到抑郁癥和CRP SNPs均有40%的可遺傳性，本研究探討了可遺傳性CRP SNPs是否可能通過(guò)上調(diào)血清CRP水平從而影響了抑郁癥的發(fā)病。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs1417938的A等位基因亞型，rs1205的C等位基因亞型以及rs1800947的G等位基因亞型均與fDEP的發(fā)病有相關(guān)性。這一結(jié)果表明特定的CRP SNPs分布可能導(dǎo)致fDEP發(fā)病?？紤]到在多數(shù)可遺傳的疾病中，遺傳因素要比散發(fā)性的環(huán)境致病因素占據(jù)更大的比重，本研究結(jié)果高度提示CRP SNPs可能會(huì)導(dǎo)致fDEP的發(fā)病。

當(dāng)然，本研究的缺陷在于未能找出闡明CRP SNPs能夠調(diào)節(jié)血清CRP水平的機(jī)制直接證據(jù)，這就導(dǎo)致只能依靠現(xiàn)有文獻(xiàn)來(lái)推斷rs1417938和rs1205的低頻等位基因確實(shí)可以上調(diào)血清CRP水平，從而很難排除CRP SNPs可能通過(guò)其它原因?qū)е乱钟舭Y發(fā)病，并繼而誘導(dǎo)CRP水平增高的可能。但是，本研究發(fā)現(xiàn)特定的可遺傳CRP SNPs的分布頻率在fDEP患者中顯著高于健康對(duì)照組，而且這些CRP SNPs都伴隨了血清CRP水平增加。這個(gè)結(jié)果高度提示CRP SNPs與抑郁癥的發(fā)病有相關(guān)性。此外，本研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)fDEP患者血清CRP水平明顯高于健康對(duì)照組，這個(gè)結(jié)果提示血清CRP水平升高也可能與抑郁癥發(fā)病相關(guān)?？紤]到最新的研究提示[16]，血清CRP水平上升，可以通過(guò)特定基因通路導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)病，筆者推測(cè)特定的CRP SNPs很有可能導(dǎo)致了血清CRP水平增高并因而誘導(dǎo)了抑郁癥發(fā)病。總之，血清CRP水平增高很可能是fDEP的一個(gè)發(fā)病機(jī)制，并為抑郁癥的發(fā)病和診斷提供了新的思路。