丙酸睪酮不同給藥方式對(duì)小鼠前列腺增生模型的影響研究

趙亞妮，張 妍，李 瑤，謝艷華，林嗣松，安軍明，王四旺

(1. 西安中醫(yī)腦病醫(yī)院，陜西 西安 710068；2. 西北大學(xué)生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)部，陜西 西安 710069；3. 西安頌天樂(lè)濟(jì)生物科技有限公司，陜西 西安 710032；4.西安市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710021)

前列腺增生又稱(chēng)良性前列腺增生，是老年男性最常見(jiàn)的疾病之一[1]。據(jù)報(bào)道，在51～60歲男性中約有50%患有前列腺增生，在80歲以上男性中這一比例上升到90%[2]。隨著老年化社會(huì)的到來(lái)，前列腺增生發(fā)病人群在不斷擴(kuò)大，現(xiàn)已成為嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)與社會(huì)問(wèn)題，因此建立一個(gè)成功的前列腺增生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型對(duì)研發(fā)治療前列腺增生的藥物至關(guān)重要。目前前列腺增生模型類(lèi)型多樣，許多涉及造模方法的細(xì)節(jié)得不到統(tǒng)一，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類(lèi)[3-4]、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日齡大小[5-6]、給藥前是否做去勢(shì)手術(shù)[7-9]、給藥時(shí)間長(zhǎng)短[10-11]、造模藥的選取[12]及給藥方法等。除給藥方法外，以上多個(gè)問(wèn)題前人已做過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探討，因此本實(shí)驗(yàn)在前人的基礎(chǔ)上就目前造模最常使用的腹腔注射與皮下注射給藥方法問(wèn)題做進(jìn)一步研究，探討造模的最佳給藥方式。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只4～5周齡ICR雄性小鼠，SPF級(jí)，購(gòu)于空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(軍)2012-0007]，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，室內(nèi)溫度21～25 ℃ ，相對(duì)濕度40%～60% ,自由飲水，人工控制光照晝夜12 h，墊料每周更換2次。

1.2實(shí)驗(yàn)用材 丙酸睪酮注射液(人用藥)，購(gòu)自天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1810231，規(guī)格：1 mL∶25 mg；雌二醇(E2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)：CZIUDXXVSC；睪酮(T)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)：ZC2X254L8C。日本島津SHIMADZU電子天平(島津企業(yè)管理有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為腹腔注射空白組、腹腔注射模型組、皮下注射空白組、皮下注射模型組，每組6只。腹腔注射模型組和皮下注射模型組按照相應(yīng)方法注射丙酸睪酮12.5 mg/(kg·d)，腹腔注射空白組和皮下注射空白組按照相應(yīng)方法注射等量生理鹽水，均連續(xù)注射31 d。

1.4檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1血清性激素檢測(cè) 末次給藥完畢禁食不禁水12 h后，稱(chēng)重，摘眼球法取血，將血液在室溫下靜置4 h，隨即在3 500 r/s，4 ℃的條件下離心10 min，分離取得血清，置于-20 ℃冰箱保存，用于檢測(cè)睪酮(T)和雌二醇(E2)水平。

1.4.2臟器指數(shù) 取血后脫頸椎處死小鼠，然后解剖分離前列腺、胸腺及脾臟，稱(chēng)重并計(jì)算各臟器指數(shù)。前列腺指數(shù)=前列腺濕重(mg)/小鼠體重(g)；胸腺指數(shù)=胸腺濕重(mg)/小鼠體重(g)；脾臟指數(shù)=脾臟濕重(mg)/小鼠體重(g)。

1.4.3組織病理學(xué)觀察 前列腺稱(chēng)重完畢后，將其于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組小鼠前列腺組織形態(tài)學(xué)。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠血清性激素水平比較 腹腔注射模型組小鼠E2水平顯著高于腹腔注射空白組(P<0.05)，T水平和T/E2與腹腔注射空白組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；皮下注射模型組小鼠T、E2水平及T/E2均顯著高于皮下注射空白組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 空白組和腹腔注射、皮下注射丙酸睪酮小鼠血清性激素水平比較

2.2各組小鼠體重、前列腺濕重與前列腺指數(shù)比較腹腔注射模型組小鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)均顯著高于腹腔注射空白組(P均<0.05)，皮下注射模型組均顯著高于皮下注射空白組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 空白組和腹腔注射、皮下注射丙酸睪酮小鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)比較

2.3各組小鼠胸腺與脾臟指數(shù)比較 腹腔注射模型組小鼠胸腺與脾臟指數(shù)與腹腔注射空白組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；皮下注射模型組小鼠胸腺指數(shù)顯著低于皮下注射空白組(P<0.05)，脾臟指數(shù)與皮下注射空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 空白組和腹腔注射、皮下注射丙酸睪酮小鼠胸腺及脾臟指數(shù)比較

2.4各組小鼠前列腺組織病理學(xué)表現(xiàn) 腹腔注射空白組和皮下注射空白組小鼠前列腺腺體排列疏松有序，腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)未見(jiàn)增生，無(wú)血管充血現(xiàn)象，見(jiàn)圖1及圖2。腹腔注射模型組小鼠前列腺腺體排列密集，個(gè)別腺腔擴(kuò)張，間質(zhì)中有少量纖維結(jié)締組織及平滑肌增生，偶見(jiàn)血管充血，見(jiàn)圖3；皮下注射模型組小鼠前列腺腺體排列緊密，腺腔明顯擴(kuò)張，前列腺柱狀上皮細(xì)胞增生且變高，部分腺泡內(nèi)褶皺增多，呈乳頭狀向腔內(nèi)擴(kuò)張，間質(zhì)內(nèi)纖維結(jié)締組織及平滑肌明顯增生，成寬的條帶狀，血管充血明顯，見(jiàn)圖4。

圖1 腹腔注射空白組小鼠前列腺病理組織學(xué)表現(xiàn)(HE，×200)

圖2 皮下注射空白組小鼠前列腺病理組織學(xué)表現(xiàn)(HE，×200)

圖3 腹腔注射模型組小鼠前列腺病理組織學(xué)表現(xiàn)(HE，×200)

圖4 皮下注射模型組小鼠前列腺病理組織學(xué)表現(xiàn)(HE，×200)

3 討 論

前列腺不僅是雄激素的靶組織，也是雌激素的重要靶組織[13]。雄激素與前列腺細(xì)胞上的相應(yīng)受體結(jié)合，通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡及促進(jìn)細(xì)胞增殖作用引起前列腺細(xì)胞的增殖凋亡失調(diào)，繼而導(dǎo)致前列腺增生；雌激素是前列腺纖維基質(zhì)刺激因子，其通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合誘導(dǎo)前列腺基質(zhì)細(xì)胞分化和上皮細(xì)胞增殖[14]。而雌雄激素比例的失衡更是前列腺增生發(fā)生發(fā)展的重要原因之一[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與腹腔注射空白組相比，腹腔注射模型組僅血清E2水平顯著升高，血清T水平與T/E2均無(wú)明顯變化；皮下注射模型組血清T、E2水平及T/E2均顯著高于皮下注射空白組。提示皮下注射丙酸睪酮注射液對(duì)小鼠性激素影響更明顯。

前列腺指數(shù)及前列腺濕重是前列腺增生改變的最直接依據(jù)，前列腺組織的病理改變可直接反映出前列腺增生與否以及增生的程度[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腹腔注射模型組和皮下注射模型組小鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)均顯著高于各自空白組，且皮下注射模型組升高更為顯著；組織病理學(xué)觀察顯示，皮下注射模型組小鼠前列腺組織病理學(xué)改變更為明顯。

胸腺及脾臟指數(shù)可反映用藥對(duì)免疫器官的影響。有研究表明，給去勢(shì)大鼠皮下注射丙酸睪酮，可抑制胸腺組織中Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Bax的表達(dá)，從而誘導(dǎo)大鼠胸腺細(xì)胞凋亡，降低大鼠胸腺指數(shù)，胸腺指數(shù)可以反映前列腺增生與免疫器官的相關(guān)性，也可從側(cè)面反映前列腺增生的程度[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腹腔注射模型組小鼠胸腺與脾臟指數(shù)與腹腔注射空白組比較差異均不明顯；皮下注射模型組小鼠胸腺指數(shù)顯著低于皮下注射空白組。提示皮下注射丙酸睪酮注射液對(duì)小鼠免疫器官有影響。

綜上所述，在不去勢(shì)及保證其他造模條件不變的情況下，腹腔注射與皮下注射丙酸睪酮注射液均可建立小鼠前列腺增生模型，但皮下注射建立的前列腺增生模型病理改變更為顯著?？紤]可能是因腹腔注射分散性較大，腸系膜供血豐富，故吸收快，但代謝也快；而皮下注射藥物吸收緩慢，作用時(shí)間長(zhǎng)，藥效持久，故建立的前列腺增生模型特征更為顯著。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。