不同產(chǎn)地的蘆根提取物中對香豆酸含量測定

◎ 陳炎歡，劉賢釗，江志鵬，黃照榮，邱富源

（無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529100）

蘆根提取物是以禾本科植物蘆葦（Phragmites communisTrin.）的新鮮或干燥根莖為原料，經(jīng)提取、過濾、濃縮、干燥等工序制成的提取物[1-6]。蘆根提取物對香豆酸具有清熱瀉火、生津止渴、除煩、止嘔及利尿的作用[7-10]。

目前在國內(nèi)外均未有蘆根提取物相關(guān)的質(zhì)量標準，本研究對9批不同產(chǎn)地的蘆根提取物對香豆酸含量進行測定，為鑒別蘆根提取物提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

HP1200型高效液相色譜儀（包括二極管陣列檢測器，美國Agilent公司），KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料與試劑

蘆根提取物由適量蘆根藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。9批蘆根提取物來源于2個廠家，編號1～9。

對香豆酸（CAS號501-98-4，中國食品藥品檢定研究院，純度99.3%）；甲醇為色譜純（德國Merck公司）；其他試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 試驗方法

1.3.1 對香豆酸的含量測定

（1）對照品溶液制備。精密稱取對香豆酸對照品約1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得對照品溶液。

（2）供試品溶液制備。精密稱取本品約1.0 g于50 mL小燒杯中，加水20 mL，加熱使溶解，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45 μm的針式過濾器過濾，濾液即為供試品溶液。

（3）色譜條件。色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相：以乙腈為流動相A，以0.2%甲酸溶液為流動相B，按18∶82比例（體積比）進行洗脫；波長310 nm；柱溫30 ℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量10 μL；理論塔板數(shù)按對香豆酸計不低于5 000。

1.3.2 方法學考察

（1）線性關(guān)系考察。精密稱取對香豆酸對照品1.411 mg置50 mL容量瓶中，按1.3.1項下（1）制備方法加甲醇溶解制成儲備液，再分別精密吸取該儲備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，按1.3.1項下（3）色譜條件分析，測定峰面積。

（2）精密度試驗。精密稱取1.3.1項下（1）制備的對香豆酸對照品溶液，重復(fù)進樣6次，分別計算峰面積及保留時間的RSD值。

（3）穩(wěn)定性試驗。精密稱取蘆根提取物按1.3.1項下（2）制備的供試品溶液，按1.3.1項下（3）色譜條件分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測定，記錄色譜圖。

（4）重復(fù)性試驗。精密稱取蘆根提取物同一天內(nèi)按1.3.1項下（2）制備的6份供試品溶液，按1.3.1項下（3）色譜條件測定對對香豆酸含量。

（5）回收率試驗。精密稱取蘆根提取物約0.5 g分別置于9個50 mL小燒杯中。另取對香豆酸對照品1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，分別吸取該對照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，分3組加入含樣品的9個50 mL小燒杯中，按1.3.1項下（2）制成供回收率測定用供試品溶液，按1.3.1項下（3）色譜條件測定，計算對香豆酸的回收率。

（6）樣品含量測定。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶各10 μL，注入液相色譜儀進行測定。根據(jù)所得對照品溶液和供試品溶液色譜圖中對香豆酸峰面積計算供試品中待測組分對香豆酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 對香豆酸的含量測定

9批蘆根提取物中對香豆酸含量（以干基計）在0.018%～0.026%，地域差異不明顯，結(jié)果見表1。

“忽聞教堂鐘聲、工廠汽笛聲，以及廠外歡呼聲與歌唱聲同時并作，余輩驚向何故？始知休戰(zhàn)條約已簽訂，戰(zhàn)爭從此可以終止矣！此何日也？記之永久不忘之，1918年11月11日也。是日，各種工作各地戰(zhàn)事自11點起一律停止……”

表1 蘆根提取物對香豆酸含量測定結(jié)果表

2.2 方法學考察

2.2.1 線性關(guān)系考察

以對香豆酸對照品的濃度（μg·mL-1）為橫坐標，峰面積為縱坐標，求得回歸方程為y=1.327 9x-0.093 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，如圖1所示。結(jié)果表明對香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖1 標準曲線及回歸方程圖

2.2.2 精密度試驗

精密度試驗結(jié)果見表2，可以看到保留時間和峰面積的RSD值分別為0.04%和0.06%，不對稱度（以對香豆酸計）不高于1.2，理論塔板數(shù)（以對香豆酸計）約12 000，實驗結(jié)果表明儀器精密度良好。

表2 精密度試驗結(jié)果表（n=6）

2.2.3 穩(wěn)定性試驗如表3所示，供試品中對香豆酸峰面積的RSD為

表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果表（n=6）

0.43%（n=6），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 重復(fù)性試驗

重復(fù)性試驗結(jié)果見表4，對香豆酸平均含量為0.018%，RSD為1.88%，分離度大于1.5，實驗結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性試驗結(jié)果表

2.2.5 回收率試驗

從表5可知，對香豆酸平均回收率為98.09%，RSD值為0.72%，表明該方法準確度良好。

表5 對香豆酸回收率結(jié)果表（n=9）

3 結(jié)論

研究表明，蘆根提取物中對香豆酸含量的高效液相色譜法其系統(tǒng)適應(yīng)性、精密度、線性關(guān)系、準確度等均符合要求，該方法可以作為蘆根提取物中對香豆酸的含量測定方法；不同產(chǎn)地的蘆根提取物中對香豆酸含量差異不明顯，蘆根提取物中對香豆酸含量不低于0.01%，為評價蘆根提取物的質(zhì)量提供參考。