氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定整顆魚油膠囊中7種鄰苯二甲酸酯的含量

◎ 姚少芳

（1.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品工業(yè)公共實驗室，廣東 廣州 511442）

鄰苯二甲酸酯類（PAEs）又稱增塑劑，一般指鄰苯二甲酸與4～15個碳的醇形成的酯，可降低塑料材料的硬度、脆化溫度和軟化溫度，提高柔韌性和曲撓性[1]，因此在塑料生產(chǎn)中被廣泛應用。PAEs與塑料基質(zhì)間沒有形成共價鍵，當接觸到油脂、水等物質(zhì)時極易溶出，從而擴散到環(huán)境或食物中[2]。研究表明，PAEs可能會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等產(chǎn)生毒性[3]。

魚油是一種較為特殊的脂肪性食品，大眾接受度極高。受原料、生產(chǎn)工藝、包裝工藝等因素的影響，PAEs的溶入風險較高，但是魚油中富含二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等多種n-3多不飽和脂肪酸，根據(jù)GB/T 5009.271—2016[4]的前處理方法并不能得到有效凈化。目前文獻報道的油脂中的PAEs檢測方法有氣相色譜法[5]、氣相色譜-質(zhì)譜法[6-8]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9]、高效液相色譜法[10-12]以及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[13-14]等，其中質(zhì)譜法具有靈敏度高、抗干擾能力強等優(yōu)點，在PAEs的檢測中應用廣泛。本研究結合GC-MS對易揮發(fā)化合物有優(yōu)良的定性定量檢測性能，通過優(yōu)化樣品前處理方法，建立魚油膠囊7種PAEs的氣相色譜－質(zhì)譜的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

魚油膠囊（市售）。

鄰苯二甲酸酯及其內(nèi)標標準品（純度均高于95%）：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二甲氧乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二甲酯-D4（DMP-D4）、鄰苯二甲酸二乙酯-D4（DEP-D4）、鄰苯二甲酸二異丁酯-D4（DIBP-D4）、鄰苯二甲酸二正丁酯-D4（DBP-D4）、鄰苯二甲酸二甲氧基乙酯-D4（DMEP-D4）、鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯-D4（DEEP-D4）以及鄰苯二甲酸二戊酯-D4（DPP-D4），均購于德國Dr.Ehrenstorfer公司。

氯化鈉（分析純，廣州化學試劑廠）；PSA粉（40～60 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司）；C18粉（40～63 μm，上海安譜儀器公司）；乙腈、正己烷（色譜純，美國Honeywell公司）。

Agilent 7890B-5977B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公 司，配EI離 子 源）、SIGMA 3K15臺式高速冷凍離心機（德國SIGMA公司）、IKA MS3 basic渦旋混合器（德國IKA公司）、HWS-26電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司）、ME204E萬分之一天平（廣州市東南科技創(chuàng)科技有限公司）。

1.2 測定方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱，DB-5MS石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進樣口溫度260 ℃；傳輸線溫度290 ℃；進樣量1 μL；載氣：氦氣（純度≥99.999%），流速1 mL·min-1，進樣方式：不分流進樣；升溫程序：60 ℃保持1 min，以20 ℃·min-1升至220 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1升至260 ℃，保持1 min，以20 ℃·min-1升至290 ℃，保持8 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源（EI）：電離能量70 eV，離子源溫度230 ℃，四級桿溫度150 ℃，溶劑延遲時間5 min；質(zhì)譜監(jiān)測方式：選擇離子掃描模式（SIM）。7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標的特征離子見表1。

表1 7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標的特征離子表

1.2.3 樣品前處理方法

取整顆魚油膠囊稱取質(zhì)量（精確至0.000 1 g）置于帶刻度玻璃比色管中，加水定容至20 mL，60 ℃水浴至完全溶解，取出渦旋混勻，放冷至室溫；取2 mL于玻璃離心管中，加5 mL正己烷飽和的乙腈，渦旋1 min，加2 mL乙腈飽和的正己烷和1 g氯化鈉，渦旋30 s，4 000 r·min-1離心10 min；取乙腈層于另一玻璃離心管，加2 mL乙腈飽和的正己烷，渦旋30 s，4 000 r·min-1離心5 min，棄去正己烷層，重復以上操作；乙腈層中加入500 mg C18粉、500 mg PSA粉，渦旋1 min，4 000 r·min-1離 心5 min，上 清 液 供GC-MS分析。

中國文化經(jīng)歷了自大、危機、自卑、自覺和自信的曲折過程,讓人清楚地看到,科學文化始終充當著中國文化發(fā)展的增量,還源源不斷地修正作為存量的中國傳統(tǒng)文化,為中國文化現(xiàn)代轉(zhuǎn)型保駕護航,理應是當下中國特色社會主義先進文化的不可或缺的組成部分。

1.2.4 混合標準溶液配制

分別稱取PAEs及其內(nèi)標標準品10 mg（精確至0.1 mg），用正己烷定容至10 mL容量瓶，配制成1 000 μg·mL-1的標準儲備液，于-18 ℃避光保存。使用前稀釋得到0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.1 μg·mL-1以及0.2 μg·mL-1且內(nèi)標濃度為0.1 μg·mL-1混合標準工作溶液。

2 結果與分析

2.1 魚油膠囊溶解溫度的選擇

魚油膠囊殼的基質(zhì)大多數(shù)為明膠，并添加著色劑、遮光劑、甘油等輔料制成。明膠具有親水性，用溫水溶解以完全釋放出樣品中的目標物質(zhì)，如果水溫過低，膠囊殼無法充分溶解，如果水溫過高，容易損失目標物質(zhì)[15]。比較了30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃4種溫度水浴溶解魚油膠囊后提取凈化的結果，7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標損失均不明顯，故采用60 ℃溶解魚油膠囊。

2.2 試劑的選擇

2.2.1 提取試劑的選擇

鄰苯二甲酸酯水溶性低，易溶于大多有機溶劑。比較了實驗室常用的二氯甲烷、乙腈、丙酮、正己烷作為提取試劑的效果，結果表明，由于魚油內(nèi)容物雜質(zhì)過多，丙酮、二氯甲烷提取效果差，采用乙腈提取，正己烷脫脂除雜效果最好。

2.2.2 正己烷脫脂除雜次數(shù)的選擇

用正己烷進行3次脫脂除雜，比較正己烷脫脂除雜第1次、第2次、第3次后的結果可知，7種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標損失均不明顯，

DMP、DMP-D4、DEP、DEP-D4、DIBP、DIBP-D4、DMEP、DMEP-D4、DEEP及DEEP-D4分離效果差異不大，但DBP、DBP-D4、DPP及DPP-D4由于魚油的干擾，隨著正己烷除雜次數(shù)的增加，其分離效果越好，如圖1和圖2所示。故采用3次正己烷除雜方式。

圖1 DBP和DBP-D4除雜的次數(shù)及分離效果圖

圖2 DPP和DPP-D4除雜的次數(shù)及分離效果圖

2.2.3 試劑提取使用量的選擇

分別使用5 mL、8 mL、10 mL乙腈對陽性樣品進行提取，對比其回收率發(fā)現(xiàn)提取量影響不大，見表2。

表2 不同用量乙腈對陽性樣品進行提取的回收率表

2.3 方法的線性范圍和檢出限

本方法采用內(nèi)標法進行定量，建立以各目標化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標，響應值為縱坐標的標準曲線，線性范圍、檢出限、回歸方程和相關系數(shù)見表3。

表3 7種PAEs的線性范圍、檢出限、回歸方程和相關系數(shù)表

由表3可知，線性相關系數(shù)均高于0.999。在優(yōu)化的色譜條件下，對基體進行添加回收試驗，按照信噪比（S/N）為3計算7種鄰苯二甲酸酯類化合物的方法的檢出限（LOD）為0.002 5～0.25 mg·kg-1。

2.4 方法的精密度和準確度測定

按照1.2.3的步驟，選取陰性樣品進行加標回收試驗，驗證方法的精密度和準確度。加標水平分別為0.075 μg、0.15 μg和0.75 μg，每個加標水平重復3次，扣除本底值后計算加標回收率，如表4所示。

表4 不同加標濃度的加標回收率和相對標準偏差表（n=6）

結果顯示，7種鄰苯二甲酸酯類化合物平均加標回收率為86.4%～108.7%，相對標準偏差（RSD）為0.8%～4.8%（n=6），其精密度和準確度能夠滿足分析需求。

3 結論

本文采用乙腈提取，3次正己烷脫脂除雜，PSA和C18凈化，GC-MS的檢測方法同時測定魚油膠囊中7種鄰苯二甲酸酯類化合物，該方法中7種鄰苯二甲酸酯類化合物含量在0.01～0.20 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好，平均加標回收率為86.4%～108.7%，相對標準偏差（RSD）均不大于4.8%（n=6），方法檢出限為0.002 5～0.25 mg·kg-1。