鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生理特征的影響*

樊 英，王曉璐，劉吉丹，劉洪軍**，王友紅，蓋春蕾，許 拉，葉海斌，吳海一，麻丹萍，張 濤

(1.山東省海洋科學(xué)研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/山東省海水健康養(yǎng)殖技術(shù)工程技術(shù)研究中心，山東青島 266104；2.中國(guó)海洋大學(xué)，山東青島 266100；3.山東省濱州市無(wú)棣縣海洋發(fā)展和漁業(yè)局，山東濱州 251900)

0 引言

非洲斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)，又稱金剛斑節(jié)對(duì)蝦、斑節(jié)王，分類學(xué)上隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)(Arthropoda)甲殼綱(Crustacea)十足目(Decapoda)對(duì)蝦科(Penaeidae)對(duì)蝦屬(Peneus)，是對(duì)蝦屬中的大型種。非洲斑節(jié)對(duì)蝦原產(chǎn)于非洲莫桑比克等地，相對(duì)于目前國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖的斑節(jié)對(duì)蝦而言，其體表特征表現(xiàn)為體色較深、頭胸甲較為厚實(shí)、體長(zhǎng)側(cè)扁、略呈梭形、體色鮮亮等。非洲斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖的適合水溫為25-32℃，適應(yīng)鹽度在30左右，適宜環(huán)境為沙底質(zhì)，對(duì)飼料蛋白含量要求相對(duì)較低，屬于雜食性動(dòng)物，抗病能力強(qiáng)，適宜工廠集約化、池塘等多種養(yǎng)殖模式[1]。

養(yǎng)殖環(huán)境因子中的鹽度是影響水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)最直接、最重要的生態(tài)因子之一[2]，自然環(huán)境(如雨天、旱天)的變化可直接或間接地影響?zhàn)B殖水體的鹽度，進(jìn)而對(duì)動(dòng)物機(jī)體生理狀態(tài)產(chǎn)生影響[3-8]。目前，關(guān)于鹽度對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響報(bào)道較多，且集中表現(xiàn)在凡納濱對(duì)蝦方面。李娜等[9]研究發(fā)現(xiàn)隨著鹽度升高，凡納濱對(duì)蝦的存活率、相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率、餌料轉(zhuǎn)化率等指標(biāo)皆表現(xiàn)出降低趨勢(shì)，而攝食率、血漿滲透壓及Na+-K+-ATPase活力逐漸升高。董甜甜等[10]從生長(zhǎng)、代謝和抗氧化酶活力方面研究高鹽脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦的影響，結(jié)果表明高鹽度不適宜對(duì)蝦的生長(zhǎng)和存活，但可以激活其抗氧化能力和脂類代謝。趙玉超等[11]研究發(fā)現(xiàn)，隨著鹽度增加，凡納濱對(duì)蝦仔蝦生長(zhǎng)日增率和存活率顯著降低，而酸性磷酸酶ACP、堿性磷酸酶AKP、超氧化物歧化酶SOD和過(guò)氧化氫酶CAT等部分非特異性免疫酶活性被激發(fā)，機(jī)體滲透調(diào)節(jié)能力增強(qiáng)。Gao等[12]研究表明，低鹽度環(huán)境下凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和存活率顯著降低，激活了對(duì)蝦鰓Na+-K+-ATPase α亞基、碳酸酐酶轉(zhuǎn)錄水平，但抑制了肝胰臟糜蛋白酶、胰蛋白酶的轉(zhuǎn)錄水平。李華等[13]研究顯示，低鹽可激活凡納濱對(duì)蝦血淋巴超氧化物歧化酶SOD活性。目前，關(guān)于鹽度脅迫(包括高鹽度和低鹽度)對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦的研究報(bào)道較少，因此，本實(shí)驗(yàn)以非洲斑節(jié)對(duì)蝦為研究對(duì)象，分析低、高鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)、代謝、抗氧化及消化指標(biāo)的影響，擬豐富對(duì)蝦生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，同時(shí)為非洲斑節(jié)對(duì)蝦健康養(yǎng)殖及抗環(huán)境脅迫預(yù)警提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其管理

實(shí)驗(yàn)用非洲斑節(jié)對(duì)蝦初始體質(zhì)量為(1.5±0.2) g，暫養(yǎng)于玻璃鋼桶(500 L)中。暫養(yǎng)期間所用海水鹽度為30，pH值為8.0±0.5，溫度為(28±0.5)℃，24 h充氣泵充氧，溶氧量為(7.5±0.5) mg/L，水體總氨氮低于0.5 mg/L。每天飼料投喂量為體質(zhì)量的8%-10%，每天5次投喂(6:00、10:00、14:00、18:00、22:00)，根據(jù)當(dāng)日天氣、殘餌和飼養(yǎng)條件調(diào)整具體投喂量。養(yǎng)殖過(guò)程中每天上午10:00換水1次，換水量為總水體的30%。暫養(yǎng)7 d后，每天以5個(gè)鹽度的速度由鹽度30馴化至實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)鹽度梯度。海水鹽度由淡水、天然海水與鹵水(濱州友發(fā)有限公司)調(diào)配而成。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2020-04-17-2020-5-30，在山東省濱州市北海經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)友發(fā)水產(chǎn)有限公司工廠化車(chē)間進(jìn)行為期35 d的對(duì)蝦養(yǎng)殖試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置20，30，40，50 共4個(gè)鹽度梯度，其中30鹽度組作為對(duì)照。每個(gè)鹽度組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行放入大小均勻、健康的非洲斑節(jié)對(duì)蝦400尾。日常投喂、管理同暫養(yǎng)期。每隔7 d，從每個(gè)平行組隨機(jī)取30尾對(duì)蝦取血、鰓和肝胰腺組織樣品。

1.3 樣品收集

試驗(yàn)過(guò)程的第3，7，14，35天，采用1.0 mL一次性無(wú)菌注射器從對(duì)蝦心臟采集血液，與抗凝劑按照1∶1比例混合置于Eppendorf管中(每個(gè)平行取30尾蝦，混合成一個(gè)樣品)， 4℃過(guò)夜后于4 000 r/min離心10 min，取上清，-80℃保存,備測(cè)。

試驗(yàn)過(guò)程的第3，7，14，35天，采用無(wú)菌鑷子及剪刀獲取鰓絲樣品(每個(gè)平行取30尾蝦，混合成一個(gè)樣品)，經(jīng)剪刀剪碎，稱取一定質(zhì)量后置于勻漿管中，加入9倍體積的生理鹽水，勻漿后經(jīng)冷凍離心機(jī)4℃條件下3 000 r/min離心15 min，取上清液備測(cè)。

試驗(yàn)過(guò)程的第3，7，14，35天，在冰盤(pán)中獲取肝胰腺組織置于Eppendorf離心管中(每個(gè)平行取30尾蝦，混合成一個(gè)樣品)，混合后迅速投入液氮中，再轉(zhuǎn)移到-80℃保存?zhèn)溆?。稱取一定質(zhì)量肝胰腺組織置于勻漿管中，加入9倍體積的生理鹽水，勻漿后經(jīng)冷凍離心機(jī)4℃ 條件下3 000 r/min離心15 min，取上清液備測(cè)。

1.4 指標(biāo)的檢測(cè)

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)

35 d的投喂試驗(yàn)結(jié)束后，停食1 d，稱量每個(gè)平行組非洲斑節(jié)對(duì)蝦的體質(zhì)量，計(jì)算增重率(Weight Gain Rate，WGR)、特定生長(zhǎng)率(Specific Growth Rate，SGR)，統(tǒng)計(jì)成活率(Survival Rate，SR)。計(jì)算公式: WGR =(末均重-初均重) /初均重×100%，SGR=(ln末均重-ln初均重) /試驗(yàn)天數(shù)×100%，SR=(終末活對(duì)蝦尾數(shù)/初始活對(duì)蝦尾數(shù)) ×100%。

1.4.2 滲透調(diào)節(jié)指標(biāo)測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定非洲斑節(jié)對(duì)蝦鰓絲組織中總ATPase及Na+-K+-ATPase活力?？侫TPase酶活定義為每小時(shí)每毫克組織蛋白中的ATP酶分解ATP產(chǎn)生1 μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。Na+-K+-ATPase酶活定義為每小時(shí)每毫克組織蛋白的組織中ATP酶分解ATP產(chǎn)生1 μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。

1.4.3 抗氧化相關(guān)酶活性測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定非洲斑節(jié)對(duì)蝦血清樣品總抗氧化能力(T-AOC)、過(guò)氧化氫酶(CAT) 、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性。其中，T-AOC定義為在37℃時(shí)，每分鐘每毫升血清使反應(yīng)體系的吸光度(OD)值增加0.01為一個(gè)總抗氧化能力單位；CAT酶活定義為每毫升血清每秒鐘分解1 μmol H2O2的量為一個(gè)活力單位；SOD酶活定義為在本反應(yīng)體系中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酶量為一個(gè)活力單位(U)；MDA含量定義為每毫升血清在95℃及酸性環(huán)境中與硫代巴比妥酸(Thiobarbituric Acid，TBA)縮合，形成紅色MDA-TBA加合物的量；GSH-Px酶活定義為每0.1 mL血清在37℃反應(yīng)5 min，扣除非酶促反應(yīng)作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)酶活力單位。

1.4.4 消化酶活性測(cè)定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定非洲斑節(jié)對(duì)蝦肝胰腺組織樣品胃蛋白酶(Pepsin)、脂肪酶 (Lipase)和淀粉酶(Amylase) 活性。胃蛋白酶活力定義為在37℃條件下每毫克組織蛋白每分鐘分解蛋白生成1 μg氨基酸相當(dāng)于一個(gè)酶活力單位。脂肪酶活力定義為在37℃條件下每毫克組織蛋白每分鐘水解生成1 μmol脂肪酸為一個(gè)酶活力單位。淀粉酶活力定義為組織中每毫克蛋白在37℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉為一個(gè)酶活力單位。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(n=3)；對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS 19.0單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan比較分析，以P<0.05作為差異的顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)的影響

由表1可知，實(shí)驗(yàn)期間各鹽度組非洲斑節(jié)對(duì)蝦的成活率不同，其中20，30鹽度組成活率均為100%，40鹽度組成活率為97.67%，50鹽度組成活率僅為72.00%。投喂實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，鹽度脅迫組對(duì)蝦終末體質(zhì)量均低于對(duì)照組，50鹽度組差異最顯著(P<0.05)，增重率僅為30.23% (P<0.05)；其次是20鹽度組。特定生長(zhǎng)率所受影響同步于終末體質(zhì)量和增重率，鹽度脅迫組SGR均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表1 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)指標(biāo)的影響(n=3)

2.2 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)的影響

由圖1可知， 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦鰓絲ATPase和Na+-K+-ATPase活性影響顯著(P<0.05)。如圖1a所示，實(shí)驗(yàn)第3天，20鹽度組ATPase活性顯著下降，而40，50鹽度組相反，活性顯著升高；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各鹽度組ATPase活性均表現(xiàn)出適應(yīng)鹽度脅迫環(huán)境；第35天，與對(duì)照組比較，20，40，50鹽度組均無(wú)顯著差異(P>0.05)。圖1b顯示，實(shí)驗(yàn)第3，7天，20，40，50鹽度組Na+-K+-ATPase活性均比對(duì)照組升高，且差異顯著(P<0.05)，其中40鹽度組尤為突出；第35天，20鹽度組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，而40，50鹽度組較對(duì)照組高，差異顯著(P<0.05)。

圖中不同小寫(xiě)字母表示同一時(shí)間各組之間存在顯著性差異(P<0.05)

2.3 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦抗氧化酶活性的影響

由圖2可知，鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)產(chǎn)生明顯的影響。圖2a結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第3天，20，40，50鹽度組T-AOC活性均比對(duì)照組顯著提高(P<0.05)，但脅迫組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；第7，14，35天，20鹽度組T-AOC活性較對(duì)照組低，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；第7，14天，40，50鹽度組較對(duì)照組高(P>0.05)，而第35天，40，50鹽度組較對(duì)照組低(P>0.05)。圖2b結(jié)果顯示，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各鹽度組CAT活性均比對(duì)照組低，且第35天呈現(xiàn)適應(yīng)狀態(tài)，脅迫組與對(duì)照組間以及各脅迫組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，20鹽度組與50鹽度組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。圖2c結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第3天，50鹽度組SOD活性顯著低于對(duì)照組及其他鹽度組(P<0.05)；隨著時(shí)間延長(zhǎng)，50鹽度組SOD活性有所提升，且第14，35天與對(duì)照組之間差異顯著(P<0.05)。圖2d結(jié)果顯示，20鹽度組MDA含量較對(duì)照組稍低，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)第3天，40，50鹽度組MDA含量較對(duì)照組顯著提高(P<0.05)，第7天仍比對(duì)照組高但無(wú)顯著差異(P>0.05)；隨時(shí)間延長(zhǎng)，第35天MDA含量比對(duì)照組稍低(P>0.05)。圖2e結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第3天，20，40，50鹽度組GSH-Px活性均顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)；隨著時(shí)間延長(zhǎng)，20鹽度組GSH-Px活性有所降低，第14天與對(duì)照組之間存在顯著差異(P<0.05)；第7天，40鹽度組GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)，第14天，50鹽度組活性最高(P>0.05)；第35天，各脅迫組間以及脅迫組與對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

圖中不同小寫(xiě)字母表示同一時(shí)間各組之間存在顯著性差異(P<0.05)

2.4 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦消化酶活性的影響

由圖3可知，鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦消化酶活性產(chǎn)生了不同程度的影響。如3a所示，實(shí)驗(yàn)期間各鹽度組胃蛋白酶活性均比對(duì)照組降低，20鹽度組第7天胃蛋白酶活性有所提升，仍比對(duì)照組低，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；而40，50鹽度組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間一直與對(duì)照組存在顯著差異 (P<0.05)。圖3b結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第3，14天，各鹽度組脂肪酶活性均顯著低于對(duì)照組顯著(P<0.05)，各鹽度脅迫組之間差異不顯著 (P>0.05)；第7天，20鹽度組脂肪酶活性升高，與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但40，50鹽度組仍顯著降低(P<0.05)；第35天，20，40鹽度組脂肪酶活性較前期有所提升，與對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但50鹽度組仍顯著低于對(duì)照組 (P<0.05)。圖3c結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第3天，20鹽度組淀粉酶活性顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)，40，50鹽度組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)；第7，35天，各鹽度組與對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異(P>0.05)；第14天，40，50鹽度組顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)，20鹽度組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3 討論

3.1 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)的影響

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低鹽度、高鹽度脅迫均對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)產(chǎn)生了抑制，增重率、特定生長(zhǎng)率和成活率均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，尤其是50鹽度組，說(shuō)明鹽度脅迫導(dǎo)致對(duì)蝦生長(zhǎng)環(huán)境遠(yuǎn)離其等滲點(diǎn)，從而在生長(zhǎng)過(guò)程中需要更多的能量來(lái)維持機(jī)體滲透平衡，這就導(dǎo)致其代謝加快，物質(zhì)積累不足，因此生長(zhǎng)緩慢，成活率甚至僅有72.0%。非洲斑節(jié)對(duì)蝦與凡納濱對(duì)蝦可能會(huì)因?yàn)槠贩N差異、個(gè)體差異、餌料種類、水中理化因子及其他生態(tài)環(huán)境等多種因素導(dǎo)致鹽度適應(yīng)性存在差異，但基本原理一致。如研究報(bào)道，凡納濱對(duì)蝦具有廣鹽性，其最適鹽度范圍是18-35[14，15]，然而對(duì)蝦的等滲點(diǎn)一般處于24-26。當(dāng)環(huán)境鹽度不適應(yīng)自身滲透壓時(shí)，凡納濱對(duì)蝦會(huì)自我調(diào)節(jié)滲透壓平衡，其同化率在適宜的鹽度環(huán)境下會(huì)隨鹽度降低而降低，從而抑制生長(zhǎng)代謝。Bary等[16]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)鹽度從25上升到35時(shí)，凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)特征趨于緩慢，當(dāng)鹽度再升高至49時(shí)，對(duì)蝦的生長(zhǎng)明顯受到抑制。李二超等[17]研究結(jié)果表明，鹽度從25到35時(shí)，凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢，且成活率降低。Panikkar[18]研究滲透調(diào)節(jié)和環(huán)境鹽度之間的適應(yīng)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，高鹽度環(huán)境中，對(duì)蝦需要將體內(nèi)多余鹽分排除，保持機(jī)體內(nèi)正常水分；而低鹽度環(huán)境中，對(duì)蝦即需要獲取更多鹽分，排除機(jī)體內(nèi)多余水分，在這調(diào)控過(guò)程中，機(jī)體需要消耗能量，因而降低了其他必需的能量代謝，降低了生長(zhǎng)效能。

圖中不同小寫(xiě)字母表示同一時(shí)間各組之間存在顯著性差異(P<0.05)

3.2 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)的影響

鹽度通過(guò)調(diào)節(jié)滲透壓來(lái)影響對(duì)蝦的生理功能。為適應(yīng)不同生長(zhǎng)環(huán)境，對(duì)蝦在滲透調(diào)節(jié)和離子調(diào)節(jié)時(shí)又伴隨著能量代謝，ATPase、Na+-K+-ATPase活性可反映機(jī)體滲透調(diào)節(jié)甚至生長(zhǎng)代謝等狀況[11,19-22]。眾多研究已探討鹽度和ATPase、Na+-K+-ATPase之間的調(diào)節(jié)或維持效應(yīng)。Liu等[23]對(duì)中華絨螯蟹進(jìn)行鹽度適應(yīng)性研究，結(jié)果顯示隨著鹽度的升高，中華絨螯蟹血漿滲透壓升高，Na+-K+-ATPase活力也逐漸升高。Wilder等[24]在對(duì)羅氏沼蝦的研究中也發(fā)現(xiàn)，鹽度的提高刺激了蝦鰓中Na+-K+-ATPase酶活力。潘魯青等[25]研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖環(huán)境中鹽度變化時(shí),凡納濱對(duì)蝦鰓絲中Na+-K+-ATPase活力逐漸升高，且鹽度越低酶活力越大。然而，甲殼動(dòng)物對(duì)蝦主要依靠鰓上皮細(xì)胞膜上的Na+-K+-ATPase參與主動(dòng)運(yùn)輸Na+和K+，維持機(jī)體的Na+、K+離子平衡和調(diào)節(jié)血淋巴滲透壓[26]，高鹽脅迫條件下，鰓絲Na+-K+-ATPase活力有所增強(qiáng)[11]。本研究也呈現(xiàn)相似結(jié)果，急性鹽度脅迫時(shí)Na+-K+-ATPase活力升高，40鹽度組尤為顯著，且隨時(shí)間延長(zhǎng)，與對(duì)照組仍呈現(xiàn)顯著差異。這可能是因?yàn)樵诟啕}度環(huán)境下，非洲斑節(jié)對(duì)蝦體內(nèi)滲透壓增高，細(xì)胞內(nèi)外極性也增加，為提供轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收動(dòng)力導(dǎo)致鰓上皮細(xì)胞活躍，機(jī)體為維持滲透平衡需消耗大量能量；但Na+-K+-ATPase轉(zhuǎn)運(yùn)Na+的能力有限，需要在適宜鹽度下才達(dá)到最大轉(zhuǎn)運(yùn)能力。也有研究認(rèn)為，由于滲透壓的長(zhǎng)期調(diào)節(jié)，基因表達(dá)量隨刺激情況發(fā)生變化，進(jìn)而調(diào)節(jié)Na+-K+-ATPase位點(diǎn)數(shù)量，從而影響酶活力，表現(xiàn)為升高現(xiàn)象[27]。本研究中，ATPase活力在急性鹽度脅迫第3天表現(xiàn)出顯著差異，50鹽度組差異最顯著；隨時(shí)間延長(zhǎng)，各鹽度脅迫組活力有所回復(fù)，第35天與對(duì)照組無(wú)顯著差異，趨于穩(wěn)定，推測(cè)認(rèn)為ATPase酶活力變化可能與Ca2+、Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)，具體原因還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

3.3 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦抗氧化酶活性的影響

在鹽度脅迫環(huán)境中，對(duì)蝦體內(nèi)自由基會(huì)不斷積累，若未能及時(shí)清除，積累到一定程度會(huì)對(duì)對(duì)蝦機(jī)體產(chǎn)生脅迫，引起機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，相關(guān)抗氧化酶活力隨之發(fā)生變化[28]。不同指標(biāo)其功能不同，對(duì)鹽度脅迫的敏感度也不同[28，29]。T-AOC是反映機(jī)體總抗氧化水平的重要指標(biāo)之一；SOD是最重要的活性氧消除酶，在平衡氧化和抗氧化過(guò)程中通過(guò)2O2-+2H+→H2O2+O2反應(yīng)清除體內(nèi)過(guò)量氧自由基；CAT與SOD協(xié)同作用，在活性氧消除系統(tǒng)中將過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)變?yōu)樗?，保護(hù)機(jī)體免受氧自由基損傷而發(fā)生正常代謝；GSH-Px是一種重要的過(guò)氧化物分解酶，保護(hù)機(jī)體細(xì)胞膜不受過(guò)氧化物的損害；當(dāng)機(jī)體內(nèi)氧自由基過(guò)量發(fā)生損傷時(shí)會(huì)促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛MDA含量通過(guò)過(guò)氧化程度間接反映機(jī)體抗氧化能力[30-33]。本研究中，高鹽脅迫下T-AOC活力升高，CAT活力發(fā)生不同程度的降低，SOD活力變化與對(duì)照組差異不顯著，而MDA含量明顯增加，GSH-Px活力顯著提高。低鹽脅迫影響效應(yīng)則不同：急性脅迫第3天T-AOC活性顯著提升，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，酶活力比對(duì)照組稍低，且GSH-Px活力變化相同；SOD活力和MDA含量與對(duì)照組無(wú)顯著差異；CAT活力較對(duì)照組顯著降低，隨時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)適應(yīng)狀態(tài)。推測(cè)產(chǎn)生這些結(jié)果的原因可能是，急性鹽度脅迫使非洲斑節(jié)對(duì)蝦體內(nèi)氧自由基變化未發(fā)生急劇積累，抗氧化酶協(xié)同作用維持了機(jī)體的正常水平，但脂質(zhì)過(guò)氧化物的增加對(duì)機(jī)體產(chǎn)生了一定的損傷，為保護(hù)體內(nèi)細(xì)胞不受?chē)?yán)重傷害而誘導(dǎo)了GSH-Px活力，分解過(guò)量的過(guò)氧化物質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境改變的適應(yīng)性。

3.4 鹽度脅迫對(duì)非洲斑節(jié)對(duì)蝦消化酶活性的影響

當(dāng)環(huán)境鹽度發(fā)生變化時(shí)，機(jī)體為克服負(fù)面影響改變其生理功能，調(diào)控能量代謝，滲透壓平衡所需能量多，消化代謝能量便被消耗，因此抑制生長(zhǎng)[34，35]。本研究中，高鹽、低鹽脅迫均降低了肝胰腺消化酶活性，50鹽度組尤為顯著；20鹽度組淀粉酶在第3天急劇提升，隨后與對(duì)照組無(wú)顯著差異，推測(cè)可能是因?yàn)椴煌}度環(huán)境中不同消化酶底物的含量不同，因此誘導(dǎo)酶活性產(chǎn)生了差異，具體原因需要更深層次的研究。胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性變化趨勢(shì)不同，推測(cè)可能是非洲斑節(jié)對(duì)蝦應(yīng)對(duì)鹽度脅迫時(shí)，糖類代謝不是主要的功能調(diào)節(jié)來(lái)源，故淀粉酶活性隨時(shí)間延長(zhǎng)未發(fā)生顯著改變，而蛋白質(zhì)和脂類代謝在生長(zhǎng)過(guò)程中參與較多，因此鹽度改變時(shí)嚴(yán)重抑制了肝胰腺中胃蛋白酶及脂肪酶活性，從而降低了對(duì)蛋白質(zhì)及脂類的消化能力。Babkin等[36]研究發(fā)現(xiàn)，消化酶具有一定的整體效應(yīng)，即其中一種酶活性提高時(shí)，其他消化酶的活性也同時(shí)提高；而當(dāng)其中一種酶活性減弱時(shí)，其他消化酶的活性也隨之減弱，本研究中胃蛋白酶和脂肪酶活性變化也呈現(xiàn)出這一現(xiàn)象。另外，消化酶活性與生長(zhǎng)具有一定的相關(guān)性，鹽度脅迫下非洲斑節(jié)對(duì)蝦生理狀況不佳，代謝水平降低，呈現(xiàn)較低消化酶活力，吸收轉(zhuǎn)化遲鈍，從而抑制機(jī)體生長(zhǎng)，陳曉瑛等[37]、荊冰妍等[38]的研究也體現(xiàn)了這一相關(guān)性。

4 結(jié)論

綜上所述，鹽度脅迫(高鹽、低鹽)會(huì)影響非洲斑節(jié)對(duì)蝦的生長(zhǎng)指標(biāo)，鹽度越高，對(duì)蝦的滲透調(diào)節(jié)酶活性被激發(fā)，同時(shí)調(diào)節(jié)其抗氧化能力，降低消化酶活性，其生長(zhǎng)越緩慢，存活率越低。鹽度脅迫時(shí)，滲透壓調(diào)節(jié)需要更多能量，非洲斑節(jié)對(duì)蝦會(huì)釋放消化及代謝能量以維持自身生理需求。本研究為后續(xù)研發(fā)鹽度調(diào)控技術(shù)提供數(shù)據(jù)支撐，為進(jìn)一步探討非洲斑節(jié)對(duì)蝦生理機(jī)制提供基礎(chǔ)。