大黃牡丹湯對炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的治療作用及對TLR4/MyD88/NF-κB-p65信號通路的影響

張傳鳳 劉 博 葛雨竹 馬克龍 汪長中 顏貴明 （安徽中醫(yī)藥大學(xué)，合肥230012）

近年來，除受吸煙、缺乏運(yùn)動(dòng)、肥胖等因素影響，人們飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣改變以及人口老齡化加速，導(dǎo)致我國結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢［1］。與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展伴有慢性炎癥發(fā)展過程相似，結(jié)直腸癌中，結(jié)腸炎癥與炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌（colitis-associated colorectal cancer，CAC）發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2］。但與經(jīng)典結(jié)直腸癌演進(jìn)過程不同，潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）發(fā)展為結(jié)直腸癌是“炎癥-不典型增生-癌癥”而非“腺瘤-腺癌”的持續(xù)性漸變過程［3］。CAC 是UC 的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，雖然僅占所有結(jié)直腸癌發(fā)病率的1%~4%，但死亡率卻占UC 患者的10%~15%。慢性腸道炎癥病程遷延、易復(fù)發(fā)，抗生素、激素和免疫調(diào)節(jié)治療等僅能夠緩解癥狀，且長期使用有害無益，因此，尋找可抑制慢性腸道炎癥反應(yīng)、阻斷腫瘤發(fā)生的藥物對炎癥性腸病治療具有重要意義。

腸道慢性炎癥機(jī)制復(fù)雜，涉及眾多分子表達(dá)異常和信號通路異常激活。目前研究表明，Toll 樣受體（TLRs）介導(dǎo)的NF-κB 活化在結(jié)腸癌中扮演重要角色［4］。絕大部分惡性腫瘤細(xì)胞表達(dá)不同的TLRs，而TLR4 是TLR 家族中腫瘤表達(dá)譜最為廣泛的TLRs，主要識(shí)別內(nèi)毒素，即脂多糖（LPS）。MyD88是含有TLR 結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白，是TLR 信號通路中的下游信號因子，在TLR 信號通路中起關(guān)鍵作用［5］。在TLR4 主要信號傳導(dǎo)通路“依賴MyD88 途徑”中，NF-κB活化是中樞環(huán)節(jié)，啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β 等）釋放，而釋放的細(xì)胞因子又可反過來進(jìn)一步活化NF-κB，形成正反饋調(diào)節(jié)，導(dǎo)致炎癥加深，進(jìn)而發(fā)展為癌癥［6］。

中藥具有多靶點(diǎn)、復(fù)發(fā)率低、副作用小等特點(diǎn)，在慢性腸道炎癥治療中具有重要作用。既往研究表明，芍藥湯、痛瀉要方等在炎癥性腸病治療、CAC防治等方面具有重要作用。如采用芍藥湯合痛瀉要方治療慢性UC，可有效抑制炎癥因子，保護(hù)腸道黏膜，減輕炎癥反應(yīng)［7］。與西藥相比，中藥療效更好，安全性更高。大黃牡丹湯（Dahuang Mudan De?coction，DHMD）由大黃、牡丹皮、桃仁、冬瓜子、芒硝5 味中藥組成，具有瀉熱通腸、活血化瘀、散結(jié)消腫等作用［8］。目前 DHMD 治療 UC 的相關(guān)研究顯示，DHMD 可改善葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)的 UC 小鼠炎癥狀態(tài)。本研究深入探討DHMD在“炎癥-不典型增生-癌癥”過程中的作用及具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級雄性C57BL/6J 小鼠，6~8 周齡，體重（22±3）g，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，許可證號：SCXK（魯）2014-0007。小鼠自由飲食，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周（飼養(yǎng)溫度18~26℃，濕度50%~60%，12 h明/12 h暗）。

1.1.2 主要試劑 美沙拉嗪緩釋顆粒（上海愛的發(fā)制藥有限公司）；DSS（M. W. 36000-50000，批號：S0948，美國MP 公司）；氧化偶氮甲烷（AOM，Sigma公司）；HE 染色液（批號：0912A19，北京Leagene 生物科技有限公司）；大便隱血檢測試劑盒（批號：皖20152400174，安徽深藍(lán)醫(yī)療科技股份有限公司）；IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α ELISA 試劑盒（批號：05/2019，上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；免疫組化通用型試劑盒（小鼠/兔聚合物法檢測系統(tǒng)，批號：1919D0919，中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；DAB 顯色試劑盒（×20，批號：K193328E，中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；TLR4、MyD88、NF-κB-p65 一抗、二抗（Affinity公司）。

1.1.3 主要儀器 TS-12A 生物組織自動(dòng)脫水機(jī)（湖北孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司）；YD-6L 生物組織冷凍包埋機(jī)、YD-AB 生物組織攤烤片機(jī)、YD-315 輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司）；OLYMPUSBX51 正置顯微鏡（上海富萊光學(xué)公司）；H1-16KR 型冷凍離心機(jī)（湖南可成儀器設(shè)備有限公司）；Thermo Labserv K3 型酶標(biāo)儀（上海沃元科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 CAC 模型構(gòu)建 小鼠隨機(jī)分為6 組，每組20 只。正常對照組小鼠全程自由飲食，其余5 組腹腔注射單次給予小劑量（12 mg/kg）化學(xué)誘變劑AOM（1 mg/ml），2 d 后口服給予 3% 致炎劑 DSS 1 周，給予普通無菌水恢復(fù)2 周，繼續(xù)DSS 致炎重復(fù)循環(huán)2 次，共3 個(gè)周期，各周期分為1 周致炎期和2周恢復(fù)期，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由進(jìn)食［9］。

新課標(biāo)指出：體育與健康學(xué)習(xí)評價(jià)是提升課堂教學(xué)效率，促進(jìn)學(xué)生達(dá)到學(xué)習(xí)目標(biāo)的主要手段之一。初中體育教學(xué)評價(jià)應(yīng)該以多元化評價(jià)為主，即需要從多個(gè)領(lǐng)域去找到學(xué)生身上的閃光點(diǎn)，從而幫助學(xué)生能夠在原來的基礎(chǔ)上獲得發(fā)展與進(jìn)步。逐步減少學(xué)生之間的橫向評價(jià)，使學(xué)生能夠在個(gè)體進(jìn)步中逐漸形成良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣，不斷突破自己。課堂評價(jià)內(nèi)容要涵蓋學(xué)生的體能、體育知識(shí)、體育技能、參與熱情、學(xué)習(xí)態(tài)度以及團(tuán)隊(duì)協(xié)作等等方面，同時(shí)要求學(xué)生善于對自身進(jìn)行評價(jià)，明確自身優(yōu)勢與不足，并通積極因素去克服，從而獲得更好的發(fā)展。

1.2.2 給藥治療分組 正常對照組不做任何處理，自由飲食，其余5 組在第2 周期致炎結(jié)束恢復(fù)期第1 天再次隨機(jī)分成5 組：模型組、美沙拉嗪組（600 mg/kg）、DHMD 高劑量組（20 g/kg）、DHMD 中劑量組（10 g/kg）、DHMD低劑量組（5 g/kg）。

1.2.3 DHMD 配制 DHMD 原方（大黃 12 g、牡丹皮 9 g、桃仁 12 g、冬瓜子 30 g、芒硝9 g）除芒硝外加600 ml 水過濾藥液，剩余藥渣加300 ml 水高溫煮沸后轉(zhuǎn)低溫煮30 min，過濾藥液，將2 次過濾所得藥液混合，加入芒硝，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮藥液至生藥含量為1 g/ml，4℃ 保存?zhèn)溆茫? d配1次）［10］。

1.2.4 給藥劑量 依據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)》中動(dòng)物的給藥量計(jì)算得出，小鼠給藥體積按0.2 m/l 10 g 算，對應(yīng) DHMD 0.5 g/ml，以此劑量作為給藥中劑量，高劑量為1.0 g/ml，低劑量為0.25 g/ml；同理，將美沙拉嗪緩釋顆粒碾磨成粉，配制為0.03 g/ml混懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.5 小鼠體征變化和疾病活動(dòng)度評估 小鼠在致炎期每天固定時(shí)間稱重1 次，各周期恢復(fù)期每隔1 d 固定時(shí)間稱重1 次并記錄。每天觀察各組小鼠飲食、精神狀況、毛發(fā)、活動(dòng)度、大便性狀變化，聯(lián)苯胺法（聯(lián)苯胺1 g，加冰醋酸至100 ml，置于棕色瓶中，加3%過氧化氫溶液，若糞便變藍(lán)則為陽性）檢測大便隱血情況并記錄。計(jì)算每只小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）=（體重下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù)）/3［9］。

1.2.6 結(jié)腸病變和脾臟指數(shù)測定 提前將小鼠禁食12 h，正常飲水，3%戊巴比妥鈉麻醉，摘取眼球取血，縱行剖開腹腔及胸腔，迅速取出小鼠結(jié)腸（從肛緣至回盲部），迅速測量長度、拍照并記錄一定范圍內(nèi)腫瘤數(shù)，生理鹽水中清洗干凈、去除脂肪組織，分為2份，一份用10%福爾馬林固定液固定，另一份置于?80℃保存；取小鼠脾臟去除脂肪組織，生理鹽水清洗干凈，稱重，計(jì)算臟器指數(shù)=臟器重量（mg）/小鼠體重（g）。

1.2.7 血清細(xì)胞因子檢測 小鼠眼球取血，靜置2 h，4℃、3 000/r min 離心 15 min，取上清，?20℃ 留存?zhèn)溆茫糜贗L-1β、IL-6、IL-10、TNF-α ELISA檢測。

1.2.8 結(jié)腸組織病理學(xué)觀察 取出福爾馬林固定的結(jié)腸組織，常規(guī)脫水，包埋，4℃保存?zhèn)溆茫衅?，HE染色，顯微鏡下觀察結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)變化。

1.2.9.1 Western blot 蛋白提取：取出?80℃凍存的結(jié)腸組織，每組稱量100 mg 組織剪碎，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行蛋白提取，BCA 試劑盒測定蛋白濃度，?20℃留存?zhèn)溆?。制備分離膠和積層膠，進(jìn)行SDS凝膠電泳（80 V 30 min→120 V，90 min），濕法轉(zhuǎn)膜（120 V，9 min），封閉（5%牛奶，2 h），加入一抗（β-actin 1∶5 000 稀釋，TLR4、MyD88 和 NF-κB-p65 1∶1 000 稀釋）4℃孵育過夜，加入二抗孵育2 h（1∶10 000），曝光顯影，分析β-actin、TLR4、MyD88和NF-κB-p65蛋白表達(dá)。

1.2.9.2 IHC 包埋好的組織切片后在梯度乙醇中脫蠟和水化，檸檬酸鈉緩沖液中進(jìn)行抗原熱修復(fù)，靜置冷卻至室溫，加入過氧化物酶室溫孵育10 min，PBS 沖洗 3 次，3 min/次，濾紙擦干，加入一抗4℃孵育過夜，PBS 沖洗，濾紙擦干，滴加二抗室溫孵育 20 min，PBS 沖洗，室溫 DAB 顯色，流水沖洗終止染色，梯度乙醇和二甲苯中脫水、透明，自然風(fēng)干，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察拍照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0 及GraphPad Prism6.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以表示。組間比較采用單因素方差分析中的Q檢驗(yàn)（LSD 法），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體征變化和疾病活動(dòng)度評估 造模 第1 周期結(jié)束，除正常組外，部分小鼠體重明顯減輕、毛色由黑亮有光澤逐漸變?yōu)榘档瓱o光、活動(dòng)減少、反應(yīng)遲緩、大便變軟；第2 周期致炎結(jié)束，除對照組外，多數(shù)小鼠精神萎靡、食欲不振、便血、大便稀、出現(xiàn)死亡；給藥2周后，小鼠體重部分恢復(fù)，食欲改善，便血減少。各組小鼠體重均有變化，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1A）。正常組小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)大都接近于0，與正常組相比，模型組小鼠出現(xiàn)體重明顯下降、大便糊狀、便血等癥狀，DAI 顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，各治療組小鼠DAI 顯著降低（P<0.01，P<0.05，圖1B）。

圖1 各組小鼠體重、DAI變化Fig 1 Weight and DAI changes of mice in each group

2.2 結(jié)腸病變和脾臟指數(shù) 與正常組相比，模型組小鼠由于炎癥、水腫等病變，結(jié)腸顯著縮短（P<0.01），與模型組相比，各治療組小鼠結(jié)腸縮短現(xiàn)象改善（P<0.01，P<0.05，圖2）。模型組小鼠結(jié)腸組織腫瘤生長密集，數(shù)量較多，腫瘤間距??；與模型組相比，DHMD治療組小鼠結(jié)腸組織腫瘤數(shù)、間距、大小均有一定改善（P<0.05），中劑量組變化最為顯著（圖3）。

圖2 小鼠結(jié)腸長度變化Fig.2 Changes of colon length in mice

圖3 小鼠結(jié)腸腫瘤生長情況Fig.3 Tumor growth in colon of each group

2.3 脾臟指數(shù)測定 與正常組相比，模型組小鼠脾臟明顯腫大（P<0.01）；與模型組相比，各用藥組小鼠脾臟腫大得到改善，其中美沙拉嗪和DHMD 中劑量組治療效果最好（P<0.01，圖4）。

圖4 各組小鼠脾臟指數(shù)Fig.4 Spleen index of each group

2.4 血清 IL-1β、IL-6、IL-10 和 TNF-α 水平 與正常組相比，模型組小鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α 含量明顯升高，IL-10 含量顯著降低（P<0.01）；與模型組相比，DHMD 各劑量組和美沙拉嗪可有效降低IL-1β、IL-6及TNF-α含量，提高IL-10含量，DHMD 中劑量組和美沙拉嗪組效果最好（P<0.05，P<0.01，圖5）。

圖5 小鼠血清細(xì)胞因子水平Fig.5 Serum cytokines levels of mice

2.5 結(jié)腸組織病理學(xué)情況 正常組小鼠結(jié)腸形態(tài)基本正常，黏膜及腺體未見明顯損傷，存在大量杯狀細(xì)胞；與正常組相比，模型組結(jié)腸黏膜嚴(yán)重?fù)p傷，腺體結(jié)構(gòu)幾乎消失，杯狀細(xì)胞接近于消失，類似腺瘤組織表現(xiàn)；美沙拉嗪組和DHMD 高、低劑量組腫瘤形成少許減緩，與模型組相比，均呈現(xiàn)不同程度組織增生，黏膜不同程度破壞，組織腺體結(jié)構(gòu)尚存但有不同程度損傷，排列紊亂，杯狀細(xì)胞減少；DH?MD 中劑量組死亡率顯著降低，相比于模型組各種病變得到改善，結(jié)腸組織呈嚴(yán)重炎癥狀態(tài)，黏膜腺體結(jié)構(gòu)輕微損傷但排列整齊，未見明顯增生現(xiàn)象，存在明顯炎癥浸潤（圖6）。

圖6 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)特征（HE，×200）Fig.6 Histopathological features of mouse colon（HE，×200）

2.6 免疫組化檢測結(jié)果 如圖7所示，正常組小鼠結(jié)腸組織僅有少量棕黃色顆粒，TLR4 表達(dá)極少；與正常組相比，模型組存在大量棕黃色和褐色顆粒，TLR4 表達(dá)提高；與模型組相比，各用藥組棕黃色和褐色顆粒明顯減少，提示美沙拉嗪和DHMD 對TLR4表達(dá)具有抑制作用，DHMD中劑量組降低最為明顯（P<0.05，P<0.01）。正常組小鼠結(jié)腸組織上MyD88表達(dá)極少；與正常組相比，模型組IHC圖片上存在棕、褐色顆粒較多，表明MyD88 表達(dá)水平較高；與模型組相比，各用藥組棕、褐色顆粒明顯變少，證明用藥后結(jié)腸MyD88 表達(dá)不同程度降低，DHMD 中劑量組和美沙拉嗪組棕、褐色顆粒減少最為明顯，降低MyD88 表達(dá)效果最好（P<0.05，P<0.01，圖7）。NF-κB-p65 在正常組小鼠結(jié)腸組上僅有少量表達(dá)，即NF-κB-p65 表達(dá)極少；與正常組相比，模型組IHC圖片上棕黃色和褐色顆粒驟然劇增，即NF-κB-p65表達(dá)水平較高；與模型組相比，用藥治療后，各組棕黃色和褐色顆粒有一定減少，表明各用藥組NF-κB-p65 表達(dá)不同程度降低，而DHMD 中劑量組降低作用最為明顯（P<0.05，P<0.01，圖7）。

圖7 結(jié)腸組織中 TLR4、MyD88、NF-κB-p65 表達(dá)（IHC，×400）Fig.7 Expressions of TLR4，MyD88，NF-κB-p65 in each group（IHC，×400）

2.7 蛋白水平檢測結(jié)果 與正常組相比，模型組小鼠結(jié)腸組織內(nèi)TLR4、MyD88、NF-κB-p65 3 種蛋白表達(dá)顯著升高；與模型組相比，美沙拉嗪與DHMD各用藥組3 種蛋白表達(dá)均有不同程度降低，其中DHMD中劑量組降低最為顯著（圖8）。

圖8 小鼠結(jié)腸組織中相關(guān)蛋白表達(dá)Fig.8 Expressions of related proteins in colon tissues of mice

3 討論

UC 與CAC 密切相關(guān)，且UC 患者普遍年齡較小，部分發(fā)生癌性病變。一般患者被診斷為UC 后8~10年演變?yōu)镃AC的風(fēng)險(xiǎn)開始增加，可能原因?yàn)樵\斷時(shí)年齡偏低，持續(xù)時(shí)間較長，結(jié)腸受損范圍變大，炎癥程度加重，但具體機(jī)制尚不清楚。PARANG等［9］采用 AOM/DSS 法構(gòu)建 CAC 模型，內(nèi)窺鏡檢查發(fā)現(xiàn)AOM/DSS 誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸上有明顯腫瘤生成。另有研究采用同樣造模方法，病理學(xué)觀測發(fā)現(xiàn)AOM/DSS 組小鼠腺體排列紊亂，隱窩變形，固有層、黏膜糜蝕，并伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤［11］。本研究采用AOM/DSS 誘導(dǎo)CAC 模型，結(jié)果顯示，小鼠結(jié)腸充血且長度縮短，病理學(xué)觀察顯示小鼠結(jié)腸組織黏膜破損，隱窩形成，有大量炎癥細(xì)胞浸潤，且有腫瘤生成，病理學(xué)檢測為結(jié)腸腺瘤，表明本研究造模方法與既往文獻(xiàn)一致，結(jié)腸炎癌轉(zhuǎn)化模型復(fù)制成功。

DHMD 出自《金匱要略》，具有行氣活血、清熱解毒，散結(jié)消腫作用。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其可治療急性闌尾炎、胰腺炎和慢性腸道炎癥。沈麗娟等［12］研究DHMD 對膿毒癥大鼠急性腸功能障礙的治療作用與調(diào)控腸道髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1（TREM-1）表達(dá)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，DHMD 治療后血清 TREM-1、TNF-α 濃度顯著下降。另有研究發(fā)現(xiàn)DHMD 可通過調(diào)節(jié)TLR/MyD88/NF-κB-p65 信號通路治療急危重癥患者急性腸功能障礙［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，DHMD 可降低IL-1β、IL-6、TNF-α 細(xì)胞因子水平，改善慢性腸道炎癥癥狀，減少腸道腫瘤生成數(shù)和大小，說明DHMD 可能具有抑制CAC 作用。此外，美沙拉嗪是已經(jīng)用于臨床的消炎藥，可抑制引發(fā)炎癥的PG和LT形成，對UC 與CD 療效較好。本研究CAC 模型不同于經(jīng)典CRC，是由結(jié)腸炎不斷加深放大轉(zhuǎn)變形成，而美沙拉嗪可治療UC，因此，本文采用其作為陽性對照藥物探究DHMD對炎癌轉(zhuǎn)化的抑制作用。

炎-癌轉(zhuǎn)換涉及機(jī)制較為復(fù)雜，本研究中涉及的“依賴MyD88途徑”的TLR4信號傳導(dǎo)通路中，NF-κB活化是中樞環(huán)節(jié)，NF-κB活化可促進(jìn)炎癥因子釋放，而釋放的炎癥因子又可反過來促進(jìn)NF-κB 活化，形成正反饋過程，導(dǎo)致炎癥不斷放大加深，進(jìn)而惡化為腫瘤；另外，NF-κB 活化可促進(jìn)細(xì)胞增殖，提高癌變細(xì)胞存活率和生長率，表明NF-κB持續(xù)活化與炎-癌轉(zhuǎn)換密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，香菇多糖可通過降低促炎癥細(xì)胞因子IL-13 和CD30L 釋放，抑制TLR4/NF-κB 信號傳導(dǎo)導(dǎo)致腫瘤數(shù)和非典型增生減少，炎癥細(xì)胞浸潤減輕［14］。RAFA 等［15］發(fā)現(xiàn)可通過調(diào)控LPS/TLR4/NF-κB 信號通路調(diào)節(jié) NOS2 和 TNF-α 表達(dá)起一定CAC 防治作用。研究發(fā)現(xiàn)，托洛司瓊治療可通過降低IL-1β、TNF-α、TLR4 和MyD88 水平減弱結(jié)腸炎中的炎癥反應(yīng)抑制 CAC 發(fā)展［16］。DHMD 具有一定抗炎作用，其對腫瘤發(fā)生的作用鮮有報(bào)道。但其單體或單味藥的抗腫瘤作用未見報(bào)道。ZHANG等［17］研究發(fā)現(xiàn)，丹皮酚在體外和體內(nèi)均能抑制人膀胱癌，可能通過抑制PI3K/AKT 信號通路發(fā)揮作用。研究發(fā)現(xiàn)，大黃素可與5-氟尿嘧啶聯(lián)合用藥加強(qiáng)抗癌作用，通過下調(diào)PI3K/Akt信號通路降低CRC 對 5-氟尿嘧啶的耐藥性［18］。本研究發(fā)現(xiàn)，DH?MD 降低組織中TLR4、MyD88和NF-κB-p65表達(dá)，說明其抑制炎癌轉(zhuǎn)化可能與其抑制TLR/MyD88/NF-κB-p65 通路有關(guān)。目前國內(nèi)外有關(guān)DHMD 對腫瘤作用的研究鮮有報(bào)道，因DHMD 對腸道炎癥療效較好，另一方面CAC 發(fā)展進(jìn)程為“正常-炎癥-增生-癌癥”，炎癥發(fā)展對CAC 形成具有重要作用，因此，治療炎癥阻斷炎癌轉(zhuǎn)化鏈?zhǔn)潜狙芯窟x擇DHMD 的重要原因。此外，本研究因時(shí)間因素影響，尚未完成體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，故實(shí)驗(yàn)結(jié)論具有一定局限性，后續(xù)將深入驗(yàn)證DHMD對CAC和相關(guān)信號通路的影響。