葉酸受體1、間皮素蛋白在卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義

黃華民，康燕，崔英，李嫻

青海紅十字醫(yī)院婦二科，西寧 810000

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率較高，患者預(yù)后較差。由于其發(fā)病隱匿，70%以上的患者在就醫(yī)時(shí)伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，進(jìn)入腫瘤晚期。晚期卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法是手術(shù)和鉑類(lèi)化療，但2 年內(nèi)復(fù)發(fā)率較高，并且復(fù)發(fā)后缺乏有效的治療方法。因此，尋找高靈敏度和高特異度的實(shí)驗(yàn)室卵巢癌標(biāo)志物對(duì)早期診斷和準(zhǔn)確評(píng)估病情具有重要意義。葉酸受體1（folate receptor 1，F(xiàn)OLR1）是葉酸受體家族的特征成員，在婦科惡性腫瘤中，F(xiàn)OLR1 的表達(dá)異常升高，并且由于FOLR1 易于從腫瘤細(xì)胞表面脫落到血液中，因此血清檢測(cè)靈敏度高。但目前FOLR1 在卵巢癌中高表達(dá)的機(jī)制仍不清楚，其在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的作用尚有爭(zhēng)議。間皮素（mesothelin，MSLN）主要通過(guò)糖基磷脂酰肌醇附著在細(xì)胞膜上，在各種惡性實(shí)體瘤中均有較高水平。有研究認(rèn)為，MSLN 和糖類(lèi)抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）共同促進(jìn)卵巢癌的轉(zhuǎn)移。本研究主要通過(guò)回顧性分析觀察卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表達(dá)情況的變化，并分析其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年3 月至2020 年6 月在青海紅十字醫(yī)院接受治療的卵巢癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾??；③具有完整的臨床資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②有自身免疫性疾病、甲狀腺疾病等其他疾?。虎? 周內(nèi)應(yīng)用過(guò)抗生素。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入80 例卵巢癌患者，年齡18～80歲，平均（56.74±2.28）歲；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)ΙGO）分期：Ⅰ期32 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期13 例；分化程度：高分化35 例，中分化25 例，低分化20 例；化療≥6 個(gè)周期48 例，﹤6 個(gè)周期32 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47 例；伴腹腔積液45 例，無(wú)腹腔積液35 例。取80 例卵巢癌患者的卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織。

1.2 檢測(cè)及評(píng)價(jià)方法

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)FOLR1、MSLN 的表達(dá)，檢測(cè)儀器為美國(guó)西門(mén)子醫(yī)學(xué)診斷股份有限公司的ATELLΙCA 化學(xué)發(fā)光儀及配套套件。手術(shù)切除的標(biāo)本組織，經(jīng)10%甲醛固定24～48 h，石蠟包埋。石蠟標(biāo)本連續(xù)切片4 張，厚度約為4 mm，于60 ℃烘烤3 h，常規(guī)脫蠟，加入3%HO10 min，在室溫下孵育，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌3 次，每次3 min，檸檬酸溶液修復(fù)，PBS 洗滌3 次，每次3 min，加一抗孵育過(guò)夜，PBS 洗滌3 次，每次3 min，添加聚合物增強(qiáng)劑，在室溫下孵育20 min，PBS 洗滌3 次，每次3 min，室溫下添加酶標(biāo)記的抗小鼠聚合物（二抗），在室溫下孵育30 min，PBS 洗滌3 次，每次3 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后用水沖洗，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水封片。試劑盒購(gòu)自北京中山生物制品有限公司。

根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分。染色強(qiáng)度：無(wú)色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽(yáng)性細(xì)胞百分比：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0 分，1%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3分，76%～100%為4 分；染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分的乘積作為最終得分，0～4 分為蛋白質(zhì)表達(dá)陰性（-），﹥4 分為蛋白質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性（+）。

1.3 觀察指標(biāo)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)FOLR1、MSLN 在卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織中的表達(dá)，比較不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白的差異。

1..4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 FOLR1、MSLN 蛋白表達(dá)情況的比較

卵巢癌組織中的FOLR1、MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常卵巢組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹤0.01）。（表1）

表1 卵巢癌組織及癌旁正常卵巢組織中FOLR11、MSLN蛋白表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白表達(dá)情況的比較

低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中FOLR1 陽(yáng)性表達(dá)率分別高于高中分化、FΙGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=4.706、7.602、6.312，

P

﹤0.05）；低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者的卵巢癌組織中MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯高于高中分化、FΙGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=15.038、23.375、33.229，

P

﹤0.01）。不同年齡、化療周期卵巢癌患者的卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR11、MSLN蛋白表達(dá)情況

2.3 卵巢癌患者FOLR1、MSLN 蛋白表達(dá)情況影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為自變量（分化程度：高中分化=0，低分化=1；FΙGO分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ～Ⅳ期=1；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無(wú)=0，有=1），將卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 表達(dá)作為因變量，進(jìn)行多因素回歸分析。結(jié)果顯示，F(xiàn)ΙGO 分期是影響卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表達(dá)的因素（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 卵巢癌患者FOLR11、MSLN 蛋白表達(dá)情況影響因素的多因素分析

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，由于卵巢位于骨盆腔的深處，卵巢癌缺乏特異的癥狀和體征，發(fā)病隱匿，發(fā)現(xiàn)時(shí)患者大多處于晚期，并且失去了最佳治療機(jī)會(huì)。晚期卵巢癌患者預(yù)后較差，如果在疾病的早期可以診斷卵巢癌，可能會(huì)提高治愈率和生存率。提高卵巢癌的早期診斷準(zhǔn)確率對(duì)于改善患者的預(yù)后具有重要意義。血清腫瘤標(biāo)志物是由腫瘤細(xì)胞異常表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)和生物抗原，有助于惡性腫瘤的診斷和病情評(píng)估。由

FOLR1

基因編碼的葉酸受體α通過(guò)糖基磷脂酰肌醇與細(xì)胞膜表面偶聯(lián)的單鏈糖蛋白結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)葉酸進(jìn)入細(xì)胞。FOLR1 在許多惡性腫瘤細(xì)胞（例如宮頸癌、肝癌、子宮內(nèi)膜癌等）的基底膜和側(cè)膜上顯著表達(dá)。腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)上調(diào)FORL1 增加葉酸的攝取，并促進(jìn)DNA 合成以確保腫瘤細(xì)胞的快速增殖。研究認(rèn)為，F(xiàn)OLR1 有利于腫瘤細(xì)胞的增殖和修復(fù)，與腫瘤細(xì)胞的惡性行為密切相關(guān)，并且與患者的臨床特征有一定關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中的FOLR1 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常卵巢組織，并且低分化、FΙGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1 陽(yáng)性表達(dá)率較高，該結(jié)果表明，F(xiàn)OLR1 的表達(dá)對(duì)卵巢癌具有一定的診斷價(jià)值，這是因?yàn)镕OLR1 有利于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和其他惡性行為。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中的FOLR1、MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常卵巢組織，這表明FOLR1 和MSLN 可能共表達(dá)發(fā)揮作用。低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者卵巢癌組織中MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率較高，可見(jiàn)，卵巢癌患者M(jìn)SLN 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高，與臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這表明MSLN 可能是卵巢癌重要的不良預(yù)后因素。因此，抑制MSLN 的表達(dá)可能是減緩卵巢癌侵襲和耐藥性的重要方向。

MSLN

基因位于16p13.3 號(hào)染色體上，含有17 個(gè)外顯子，編碼628 個(gè)氨基酸，在細(xì)胞內(nèi)被蛋白酶水解并剪接成兩部分，羧基端的疏水序列被糖基磷脂酰肌醇取代并偶聯(lián)到細(xì)胞膜上，稱(chēng)為MSLN。MSLN 屬于一種可以被單克隆抗體K1特異性識(shí)別的抗原，其基因編碼產(chǎn)生的膜結(jié)合蛋白在常見(jiàn)的惡性腫瘤組織如卵巢癌、肺癌和宮頸癌中高表達(dá)。MSLN 是一種腫瘤分化抗原，主要影響惡性腫瘤細(xì)胞的分化程度及其生物學(xué)特性。在體外卵巢癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，已發(fā)現(xiàn)該蛋白的異常升高可能與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖有關(guān)。研究表明，上皮性卵巢癌患者的臨床分期越高、分化程度越低且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的MSLN 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高，這與本項(xiàng)研究結(jié)果一致，本研究中低分化、FΙGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率均較高，不同年齡、化療周期卵巢癌患者卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別。FOLR1、MSLN 表達(dá)水平可用于評(píng)估臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可預(yù)測(cè)疾病發(fā)展和預(yù)后。將卵巢癌患者的FOLR1、MSLN 水平作為因變量，將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為自變量，進(jìn)行多因素回歸分析。結(jié)果顯示，F(xiàn)ΙGO 分期是影響卵巢癌患者FOLR1、MSLN 表達(dá)的因素。該結(jié)果表明，卵巢癌患者中FOLR1和MSLN的水平與FΙGO分期密切相關(guān)，三者的水平升高可反映卵巢癌的發(fā)展和惡化，可作為卵巢癌診斷和病情評(píng)估的指標(biāo)。

目前臨床對(duì)于卵巢癌的臨床診斷指標(biāo)尚不統(tǒng)一，本研究通過(guò)對(duì)卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行研究，以期及時(shí)對(duì)卵巢癌患者進(jìn)行早期診斷及改善預(yù)后。但本研究樣本量很小，結(jié)果可能會(huì)存在偏差，因此下一步研究中需要擴(kuò)大樣本量以獲得更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。

綜上所述，卵巢癌組織中FOLR1、MSLN 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均較高，且受FΙGO 分期的影響，可以用于卵巢癌的早期診斷。