B77 同源體6 在乳腺癌中的表達(dá)及對患者免疫治療療效和預(yù)后的評估價值

卜亞軍，馬思芬，羅桃艷

開遠(yuǎn)市人民醫(yī)院腫瘤血液科，云南 開遠(yuǎn) 661600

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，且有年輕化的傾向。目前，臨床主要采用手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌藥物治療、靶向藥物等治療乳腺癌，隨著診療技術(shù)的提高，程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）/程 序 性 死 亡 受 體 配 體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）等免疫藥物開始逐漸應(yīng)用于乳腺癌免疫治療并可明顯改善患者的生活質(zhì)量，延長生存期，但其相關(guān)作用機(jī)制、遠(yuǎn)期療效及對患者免疫功能的影響尚有待進(jìn)一步明確。

腫瘤免疫逃逸是引起腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一，其中T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答是重要環(huán)節(jié)，T淋巴細(xì)胞活化不僅需要抗原肽復(fù)合物提供刺激信號，還需要協(xié)同刺激分子提供輔助信號。B7是重要的協(xié)同刺激分子家族成員，可結(jié)合抗原提呈細(xì)胞配體和T 細(xì)胞受體，誘導(dǎo)T 細(xì)胞活化。B7同源體6（B7 homolog 6，B7-H6）是重要的B7 家族成員，相關(guān)研究提示，B7-H6 在卵巢癌患者中異常高表達(dá)，但目前關(guān)于B7-H6 在乳腺癌中的研究不多，因此，本研究探討B(tài)7-H6 在乳腺癌患者免疫治療及預(yù)后評估中的意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月至2019 年10 月開遠(yuǎn)市人民醫(yī)院收治的三陰性乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺癌，均為女性；②雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）均表達(dá)陰性；③均為復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移乳腺癌；④具有可測量的病灶；⑤臨床、隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①距上次治療時間﹤3 個月；②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入84 例三陰性乳腺癌患者，年齡41～72 歲，平均年齡（57.87±10.41）歲；美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）分期：Ⅲ期（TNM、TNM、TNM，TNM）60 例，Ⅳ期（TNM）24 例。同期選取50 例乳腺良性病變患者作為對照組，年齡38～70 歲，平均（56.68±9.54）歲；病理類型：乳腺脂肪瘤19 例，乳腺結(jié)節(jié)21 例，乳腺纖維瘤10 例。取84 例三陰性乳腺癌患者的乳腺癌組織和50 例乳腺良性病變患者的正常乳腺組織。

1.2 療效評價標(biāo)準(zhǔn)

PD-1 免疫治療3 個月后，參照實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)1.1 版（response evaluation criteria in solid tumor 1.1，RECΙST1.1）評價80 例乳腺癌患者的臨床療效：完全緩解（complete response，CR），腫瘤病灶完全消失，且至少維持4 周；部分緩解（partial response，PR），腫瘤病灶最大徑之和減少≥30%，且至少維持4 周；疾病穩(wěn)定（stable disease，SD），腫瘤病灶最大徑之和減少﹤30%或增加﹤20%，且至少維持4 周；疾病進(jìn)展（progressive disease，PD），腫瘤病灶最大徑之和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶。

1.3 實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reac--tion，qRT-PCR）檢測B77-H6 mRNA的相對表達(dá)量

取乳腺癌組織和正常乳腺組織石蠟包埋，4 μm 厚度連續(xù)切片，置于潔凈離心管內(nèi)，提取DNA，采用紫外分光光度儀測定樣本濃度和純度，進(jìn)行質(zhì)控。采用基因檢測試劑盒加樣上機(jī)進(jìn)行PCR反應(yīng)，待PCR完成后，按照試劑盒結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)記錄結(jié)果。PCR 反應(yīng)過程：95 ℃變性5 min，1 個循環(huán)；95 ℃變性25 s，64 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，15個循環(huán)；93 ℃變性25 s，60 ℃退火35 s，72 ℃延伸20 s，31 個循環(huán)。

1.4 隨訪方法

采用來院進(jìn)行影像學(xué)評估的方式進(jìn)行隨訪，每3 個月1 次，隨訪截止時間為2021 年1 月，記錄無進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 B77-H6 相對表達(dá)量的比較

乳腺癌組織中

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量為（5.41±1.24），明顯高于正常乳腺組織的（1.35±0.38），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（

t

=28.691，

P

=0.000）。依據(jù)RECΙST1.1，84 例三陰性乳腺癌患者中CR+PR共8 例，SD+PD 共76 例，CR+PR 患者

B7

-

H6

mRNA的相對表達(dá)量為（5.01±0.62），明顯低于SD+PD 患者的（5.52±0.50），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（

t

=2.683，

P

=0.009）。

2.2 B7-H6 mRNA 相對表達(dá)量對三陰性乳腺癌患者近期療效的預(yù)測價值

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量預(yù)測三陰性乳腺癌患 者 近 期 療 效 的AUC 為0.844（95%CΙ：0.782～0.901，

P

﹤0.05），最佳截斷值為5.30 時，靈敏度和特異度分別為86.00%和87.00%。（圖1）

圖1 B7-H66 mRNA相對表達(dá)量預(yù)測三陰性乳腺癌患者近期療效的ROC曲線

2.3 不同臨床特征三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織中B7-H6 mRNA 相對表達(dá)量的比較

不同年齡、腫瘤直徑、分化程度、病理類型、Ki-67表達(dá)情況、

P53

突變情況及手術(shù)情況三陰性乳癌腺癌患者乳腺癌組織中

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（

P

﹥0.05）。AJCC 分期為Ⅳ期的三陰性乳癌腺癌患者乳腺癌組織中

B7

-

H6

mRNA 的相對表達(dá)量明顯高于AJCC 分期為Ⅲ期的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（

P

﹤0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織中B7-H6 mRNA 相對表達(dá)量的比較（n=84）

2.4 不同B7-H6 mRNA 相對表達(dá)量三陰性乳腺癌患者預(yù)后情況的比較

以

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量5.30 為臨界值，將84 例三陰性乳腺癌患者分為高表達(dá)組（

n

=51，

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量≥5.30）和低表達(dá)組（

n

=33，

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量﹤5.30），高表達(dá)組患者的中位PFS 為11 個月（95%CΙ：10.19～11.81），明顯短于低表達(dá)組患者的18 個月（95%CΙ：14.54～21.46），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（

χ

=6.887，

P

=0.009）。（圖2）

圖2 B7-H6 mRNA高表達(dá)組（n=51）和低表達(dá)組（n=33）三陰性乳腺癌患者的PFS曲線

3 討論

相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，三陰性乳腺癌約占所有乳腺癌類型的15%，與其他類型的乳腺癌相比極具侵襲性，三陰性乳腺癌對常見的內(nèi)分泌療法或HER2 靶向療法均不敏感。研究顯示，三陰性乳腺癌患者腫瘤突變負(fù)荷大、PD-L1 陽性比例高、腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞比例高，因此，免疫治療可能對其有效，但遠(yuǎn)期預(yù)后評估還有待進(jìn)一步明確。

B7-H6 是自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞活化的重要配體，能夠通過分泌細(xì)胞因子產(chǎn)生抗腫瘤免疫作用。研究發(fā)現(xiàn)，B7-H6 在白血病、淋巴瘤、黑色素瘤及其他原發(fā)腫瘤細(xì)胞中均高表達(dá)，而在正常細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。本研究通過實(shí)時熒光qRT-PCR 法檢測三陰性乳腺癌組織及正常乳腺組織中

B7

-

H6

mRNA 的相對表達(dá)量，并分析其對PD-1 免疫治療的預(yù)測價值及對患者預(yù)后的影響，旨在為臨床乳腺癌的免疫治療提供參考。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中

B7

-

H6

mRNA的相對表達(dá)量明顯高于正常乳腺組織。NK 細(xì)胞可廣泛參與炎性反應(yīng)與適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)，通過釋放趨化因子和細(xì)胞因子在抗腫瘤、抗病毒感染及干細(xì)胞移植等方面發(fā)揮重要作用，是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，而NK 細(xì)胞的活化受其細(xì)胞表面抑制信號及活化信號的共同調(diào)控。相關(guān)研究提示，B7-H6 在細(xì)胞從良性逐漸向惡性轉(zhuǎn)化時表達(dá)上調(diào)，與NKp30 受體結(jié)合并激活NK 細(xì)胞，進(jìn)而介導(dǎo)機(jī)體固有免疫反應(yīng)機(jī)制。B7-H6 表達(dá)與乳腺癌臨床病理研究結(jié)果顯示，國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)ΙGO）分期為Ⅳ期的乳腺癌患者乳腺癌組織中

B7

-

H6

mRNA 的相對表達(dá)量明顯高于Ⅲ期患者。上述結(jié)果表明，隨著乳腺癌的進(jìn)展，B7-H6 的表達(dá)逐漸升高。B7-H6/NKp30 途徑主要通過促進(jìn)其分泌ΙL-2 和ΙFN-γ等細(xì)胞因子分泌和誘導(dǎo)NK 細(xì)胞活化，進(jìn)而提升NK 細(xì)胞殺傷能力，發(fā)揮抗腫瘤免疫作用。國外研究發(fā)現(xiàn)，整合素金屬蛋白酶10（a disintegrin and metalloprotease 10，ADAM10）可以抑制NK 細(xì)胞通過NKp30 受體途徑識別腫瘤細(xì)胞，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞外B7-H6分子的脫落，因此，通過抑制ADAM10活性，可上調(diào)腫瘤細(xì)胞B7-H6的表達(dá)，進(jìn)而提高NKp30介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化能力，這也為B7-H6 的機(jī)制研究提供了基礎(chǔ)。因此，B7-H6/NKp30 途徑具有抑制腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視的作用，這也可能是B7-H6 介導(dǎo)乳腺癌進(jìn)展的重要基礎(chǔ)。B7-H6 主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，免疫組化法可在胃癌及非小細(xì)胞肺癌等腫瘤組織中檢測到B7-H6 蛋白的表達(dá)，但關(guān)于其表達(dá)情況與治療預(yù)后的研究還不夠深入。本研究以

B7

-

H6

mRNA 相對表達(dá)量5.30 最佳截斷值，將84 例三陰性乳腺癌患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，結(jié)果顯示，高表達(dá)組患者的中位PFS為11個月，明顯短于低表達(dá)組患者的18 個月。表明通過分析三陰乳腺癌患者B7-H6的表達(dá)情況，可有效評估對免疫治療療效及患者的預(yù)后。B7-H6 不僅能夠在NK 細(xì)胞的生物學(xué)功能及活化進(jìn)程發(fā)揮重要作用，亦可通過基因修飾途徑參與T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答。相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過特異性地識別表達(dá)B7-H6 的腫瘤細(xì)胞而促進(jìn)淋巴瘤小鼠模型

B7

-

H6

基因的表達(dá)，分泌γ干擾素（interferon-γ，ΙFN-γ）并殺傷腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而抑制小鼠腫瘤細(xì)胞的生長，進(jìn)而為乳腺癌的免疫治療提供新思路。

既往關(guān)于B7-H6 與乳腺癌的治療研究較少，本研究針對性地對乳腺癌免疫治療的靶向因子進(jìn)行了相關(guān)機(jī)制分析，為臨床乳腺癌的治療提供參考，亦可為臨床藥物的進(jìn)一步研究提供新的思路，具有一定的臨床價值和創(chuàng)新性。

綜上所述，B7-H6 在三陰乳腺癌中表達(dá)上調(diào)，AJCC 分期越高，B7-H6 表達(dá)越高，可有效預(yù)測免疫治療療效及患者的預(yù)后。