運(yùn)脾顆粒對功能性消化不良小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)和胃泌素、抑胃肽的影響

陳燕云，李初誼，李 競

1 中國人民解放軍96604部隊(duì)醫(yī)院,甘肅 蘭州730000;2 中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)940醫(yī)院；3 甘肅省中醫(yī)院

功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）是一種常見的慢性消化道疾病，生物化學(xué)和內(nèi)鏡檢查無器質(zhì)性病理改變，主要臨床癥狀為餐后飽脹感、早飽、上腹痛和上腹燒灼感等。目前主要認(rèn)為FD 是胃運(yùn)動(dòng)功能障礙、胃感覺過敏、精神社會因素和幽門螺旋桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染等一系列病理生理因素綜合作用的結(jié)果，其他病因及其作用機(jī)制尚未明確［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對FD的治療主要應(yīng)用促動(dòng)力藥、調(diào)整內(nèi)臟感覺藥、酸抑制劑、抗Hp 和抗抑郁劑［2］。根據(jù)FD 的臨床癥狀，中醫(yī)學(xué)將其歸于“痞滿”“胃脘痛”等范疇［3］?！端貑枴ぶ琳嬉笳撈吩唬骸疤幹畯?fù)，厥氣上行……心胃生寒，胸膈不利，心痛痞滿?！薄秱摗け嫣柌∶}證并治》曰：“但滿而不痛者，此為痞?！薄毒霸廊珪てM》曰：“凡有邪有滯而痞者，實(shí)痞也；無邪無滯而痞者，虛痞也?！爆F(xiàn)代醫(yī)家多認(rèn)為脾胃虛弱是該病發(fā)病的根本，并且與肝關(guān)系密切［4］。

運(yùn)脾顆粒是王自立主任醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)方。本研究采用饑飽失常和夾尾激怒法綜合造模，觀察運(yùn)脾顆粒對FD 模型小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響，并從分子水平探討運(yùn)脾顆粒的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物SPF 級KM 種雄性小鼠100 只，體質(zhì)量（22±2）g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級實(shí)驗(yàn)室提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號：SCXK（甘）2011-0001。

1.2 藥品及試劑運(yùn)脾顆粒（甘肅省中醫(yī)院，批號：20110906，規(guī)格：60 g/袋）。藥物組成：黨參10 g，茯苓8 g，白術(shù)10 g，石菖蒲6 g，佛手6 g，枳殼8 g，炒麥芽6 g，仙鶴草6 g。嗎丁啉（西安楊森制藥有限公司，批號：H1091000，規(guī)格：10 mg/片）；GAS 與GIP 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒（上海源葉生物科技有限公司，批號：S0000-48T）；活性碳半固體營養(yǎng)糊［69-70］：1O g 羧甲基纖維素鈉，溶于250 mL 蒸榴水中，分別加入奶粉16 g、糖8 g、淀粉8 g、活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成300 mL約300 g的黑色半固體糊狀物。

1.3 設(shè)備Benchmark Plus 型連續(xù)波長酶標(biāo)儀（美國）；RB-5A 型電熱恒溫水浴箱（上海）；800 型離心機(jī)（上海）；BA-200型電子天平（美國）；BILON-86-150W型超低溫冰箱（德國）。

1.4 方法

1.4.1 造模方法 根據(jù)文獻(xiàn)［5-7］方法，采用夾尾激怒法和饑飽失常綜合造模：將100 只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 天后隨機(jī)抽取25 只作為空白對照組，正常飼養(yǎng)，提供充足的水和飼料，其余75 只小鼠單日給予充足的水和飼料，雙日禁食不禁水，兩天秤體質(zhì)量1 次，同時(shí)每日用卵圓鉗夾小鼠尾部外端1/3處，使其煩躁后與周圍小鼠廝打，每次刺激1 h，每天4 次，造模過程中若小鼠廝打受傷則用碘伏涂抹傷口消毒。連續(xù)造模14 天后小鼠逐漸出現(xiàn)皮毛干枯發(fā)黃、進(jìn)食量減少、糞便質(zhì)稀臭穢、身體蜷縮少動(dòng)、拱背、反應(yīng)遲緩、體質(zhì)量下降并加重表示造模成功。

1.4.2 動(dòng)物分組及用藥 將造模成功小鼠隨機(jī)分為模型對照組、運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組各25只。依據(jù)文獻(xiàn)［8］，根據(jù)成人與小鼠體表面積比換算小鼠用藥劑量，空白對照組和模型對照組分別灌胃生理鹽水1 mL，運(yùn)脾顆粒組灌胃運(yùn)脾顆粒1 g/kg，嗎丁啉組灌胃嗎丁啉39 mg/kg，每日2次，各組連續(xù)灌胃14天。

1.4.3 檢測指標(biāo)

1.4.3.1 一般狀況 觀察小鼠治療前后體質(zhì)量、飲食、皮毛、反應(yīng)、便質(zhì)等，每2天稱重1次，記錄飲食量和體質(zhì)量。

1.4.3.2 胃殘留率 小鼠灌胃14天后，禁食12 h，于第2日早8 點(diǎn)各組小鼠稱重后灌胃活性炭半固體營養(yǎng)糊，1 mL/20 g，0.5 h后依次斷頭取血，將胃摘取后結(jié)扎賁門和幽門并稱重，然后從胃大彎處剪開，清水中漂洗干凈，用吸水紙吸干水分，稱重。計(jì)算胃內(nèi)殘留率：

胃內(nèi)殘留率（%）=（全胃重量-胃凈重量）/灌服半固體糊重量×100%

1.4.3.3 小腸推進(jìn)率 處死小鼠后在胃幽門與十二指腸連接處剪斷，分別量取小腸長度，和墨汁在小腸中的長度，計(jì)算小腸推進(jìn)率：

小腸推進(jìn)率（%）=活性炭半固體營養(yǎng)糊在小腸中的長度（cm）/小腸全長（cm）×100%

1.4.3.4 GAS 和GIP 含量 小鼠斷頭取血編號后，以離心半徑13.5 cm，3000 r/min 離心10 min，取血清，-20℃保存，待測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 15.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況空白對照組小鼠皮毛色白光澤，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)較多，食欲好，大便為顆粒狀，體質(zhì)量逐漸增加；造模組小鼠毛色發(fā)黃干枯，食欲逐漸減退，體質(zhì)量下降，糞質(zhì)稀而臭穢，活動(dòng)較少，喜扎堆埋頭，輕微刺激易打斗；嗎丁啉組和運(yùn)脾顆粒組小鼠治療后食欲好轉(zhuǎn)，體質(zhì)量上升，毛色恢復(fù)光亮，活動(dòng)增加，精神好轉(zhuǎn)，糞質(zhì)成形呈顆粒狀。

2.2 體質(zhì)量造模結(jié)束后空白對照組小鼠體質(zhì)量大于造模小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組小鼠體質(zhì)量均上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型對照組小鼠無明顯變化；運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組小鼠體質(zhì)量相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組小鼠體質(zhì)量變化情況（±s） g

表1 各組小鼠體質(zhì)量變化情況（±s） g

注：★表示與空白對照組比較，P＜0.05；▲表示與模型組比較，P＜0.05；※表示與運(yùn)脾顆粒組比較，P＞0.05

組別空白對照組模型對照組運(yùn)脾顆粒組嗎丁啉組鼠數(shù)25 25 25 25治療前25.16±1.32 21.30±0.78★21.11±0.69▲20.87±0.61▲※治療后27.47±0.77 22.39±0.81★25.75±0.58▲25.13±0.77▲※

2.3 小鼠胃內(nèi)殘留率模型對照組小鼠胃內(nèi)殘留較高，排空率低于空白對照組小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型對照組相比，運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組小鼠胃內(nèi)殘留低，排空率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.4 小腸推進(jìn)率與空白對照組相比，模型對照組小鼠小腸推進(jìn)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型對照組比較，運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組小腸推進(jìn)率提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組小鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率（±s） %

表2 各組小鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率（±s） %

注：★表示與空白對照組比較，P＜0.05；▲表示與模型組比較，P＜0.05，※表示與運(yùn)脾顆粒組比較，P＞0.05

組別空白對照組模型對照組運(yùn)脾顆粒組嗎丁啉組鼠數(shù)25 25 25 25胃內(nèi)殘留率47.61±0.04 69.00±0.01★47.50±0.05▲46.79±0.07▲※小腸推進(jìn)率70.50±0.01 56.00±0.03★68.50±0.01▲67.20±0.01▲※

2.5 GAS 與GIP 含量與空白對照組比較，模型對照組GAS 含量降低，GIP 含量升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型對照組相比，運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組GAS 含量升高，GIP 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；運(yùn)脾顆粒組和嗎丁啉組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 各組小鼠GAS及GIP含量（±s） pg/mL

表3 各組小鼠GAS及GIP含量（±s） pg/mL

注：★表示與空白對照組比較，P＜0.05；▲表示與模型組比較，P＜0.05，※表示與運(yùn)脾顆粒組比較，P＞0.05

組別空白對照組模型對照組運(yùn)脾顆粒組嗎丁啉組鼠數(shù)25 25 25 25 GAS含量0.38±0.29 0.08±0.02★0.31±0.24▲0.33±0.19▲※GIP含量0.07±0.12 0.34±0.28★0.06±0.15▲0.06±0.22▲※

3 討論

FD 病機(jī)主要是“本虛標(biāo)實(shí)”，以脾胃虧虛為本，以氣郁，痰濁、血瘀、食積和濕邪為標(biāo)。飲食和情志是FD 最重要的致病因素。長期飲食饑飽失常、飲食無規(guī)律、嗜食辛辣之品是導(dǎo)致脾胃虧虛的主要因素；而易怒、抑郁則會引起肝氣郁滯，肝氣橫逆犯胃，肝胃不和，出現(xiàn)噯氣、吞酸、胃脘脹滿等癥?，F(xiàn)代病理生理學(xué)指出胃腸道運(yùn)動(dòng)主要受神經(jīng)和胃腸激素兩者共同調(diào)節(jié)，腦-腸肽進(jìn)入血液，影響胃和小腸等平滑肌的收縮，在腸神經(jīng)系統(tǒng)中興奮性肽類（如胃泌素、縮膽囊素等）和抑制性肽類（如抑胃肽、腦啡肽等）相互抗衡，調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對FD 的研究主要包括對胃腸動(dòng)力減弱和胃腸激素分泌失常等因素的研究。其治療主要是促進(jìn)胃腸動(dòng)力、抑酸和清除Hp［9］。中醫(yī)對FD 的治療，標(biāo)本兼顧，辨證論治，主要以健補(bǔ)脾胃固后天之本為主，同時(shí)或疏肝行氣，或蕩滌痰濁，或化瘀，或消積化滯，或祛除濕邪等。

王自立教授治療脾胃病主張“以運(yùn)為健、以運(yùn)為補(bǔ)”，治療原則為“健脾先運(yùn)脾，運(yùn)脾必調(diào)氣”，“運(yùn)脾”思想體現(xiàn)了脾胃的生理特點(diǎn)。脾胃是人體飲食物消化吸收的主要臟腑，其中受納腐熟水谷，以及運(yùn)化水谷精微是脾胃的主要生理功能。而脾胃功能也主要通過脾胃氣機(jī)升降來實(shí)現(xiàn)，脾氣以升為本，胃氣以降為基，脾升胃降構(gòu)成全身氣機(jī)升降的樞紐，程杏軒言；“食物入胃……得脾氣一吸，則胃氣有助，食物之精，得以盡留”，指出胃的受納腐熟水谷功能又賴脾氣的健運(yùn)正常，正如《素問·禁刺論》所說：“脾為之使，胃為之市”，所以脾氣升清的功能又有助于胃的受納和降濁。脾氣虛則運(yùn)化無力，胃的受納和降濁功能受影響，疾病容易由虛致實(shí)?！端貑枴り庩枒?yīng)象大論》曰：“清氣在下，則生飧泄，濁氣在上，則生膹脹”，又有《諸病源侯論·脾胃病諸侯》曰：“胃受谷而脾磨之，二氣平調(diào)，則谷化而能食，若虛實(shí)不等，水谷不消，故令腹內(nèi)虛脹而泄，不能飲食”，王孟英謂：“胃氣壅滯，脾運(yùn)艱難”，指出脾胃氣機(jī)不利，則病由中生，同時(shí)脾胃在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中亦相互影響；《素問·太陰陽明論篇》曰：“實(shí)則陽明，虛則太陰。”在治療中，不論何種病因引起的脾胃功能失常，均主要以脾胃氣機(jī)失調(diào)為主，若一味補(bǔ)益脾胃，則會滋膩礙胃，使壅滯脹滿更甚。運(yùn)脾思想即強(qiáng)調(diào)恢復(fù)和加強(qiáng)脾胃氣的運(yùn)動(dòng)，只有脾胃氣機(jī)升降正常，升降有力，氣機(jī)調(diào)暢，則其生理功能才能正常運(yùn)行，因此王自立教授強(qiáng)調(diào)“以運(yùn)為健，以運(yùn)為補(bǔ)”，運(yùn)脾即是通過恢復(fù)脾胃升降之力，從而達(dá)到治本除標(biāo)之功［10-11］。