兩地牛蒡根總黃酮的體外和體內(nèi)抗氧化活性研究

劉群群，王 燕，李飛艷，邱艷明，毛群芳

（1.湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，湖南株洲 412000；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，湖南長沙 410128）

牛蒡（Arctium lappa L.），又名惡實(shí)、大力子、東洋參等。主要分布在中國、歐洲等地區(qū)，我國牛蒡的種植產(chǎn)地主要分布于山東省和江蘇省，山東省的蒼山，江蘇省的徐州豐縣、沛縣，種植歷史悠久，面積規(guī)模較大[1]。牛蒡根營養(yǎng)豐富且含有許多活性成分，如小分子的揮發(fā)油、醛類、多酚類、黃酮類化合物[2]等。牛蒡根具有保護(hù)心腦血管[3-5]、保護(hù)肝腎胃腸損傷、治療糖尿病[6]、降脂、抗衰老、抗氧化[7]、抗疲勞、治療便秘[8]、抗菌及抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗突變等功效[9]。

牛蒡根的抗氧化研究目前集中在4 個(gè)方面，一是不同溶劑下總提取物的抗氧化性活性研究；二是牛蒡根中多糖的提取純化及其抗氧化活性研究，Jiang Yuanyuan 等人[10]研究發(fā)現(xiàn)，牛蒡根多糖（ALP60-1） 對(duì)DPPH 自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基具有很強(qiáng)的清除活性，是一種潛在的新型天然抗氧化劑；三是牛蒡根中多酚類化合物的提取純化及其抗氧化活性研究，蔡茜彤[11]對(duì)牛蒡根多酚和黃酮的提取方法進(jìn)行了研究，并對(duì)牛蒡根粗提液進(jìn)行了體外抗氧化研究，發(fā)現(xiàn)其多酚粗提液有很好的體外抗氧化作用；四是牛蒡根中黃酮類物質(zhì)的抗氧化活性研究，曹旭等人[12]從體外和細(xì)胞層面研究了牛蒡根總黃酮的抗氧化活性。目前，牛蒡根總黃酮的抗氧化活性多基于粗提液，純化較少，且其抗氧化性研究多是基于體外研究，體內(nèi)層面的抗氧化未見報(bào)道。試驗(yàn)從體內(nèi)體外2 個(gè)方面研究純化后的牛蒡根總黃酮的抗氧化活性，并比較2 個(gè)不同產(chǎn)地的牛蒡根總黃酮的抗氧化活性是否存在差異，為牛蒡在醫(yī)藥及食品工業(yè)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)與數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

1.1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)KM 小鼠40 只，雌雄各半，體重（20±2 g），湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（許可證號(hào) SCXK(湘)2016-0002）。

1.1.2 材料

牛蒡根A，徐州綠姿農(nóng)產(chǎn)品專業(yè)合作社提供，柳川理想品種；牛蒡根B，特色中國蒼山館官方店提供，柳川理想品種。

1.1.3 試劑

D101 型大孔吸附樹脂，東鵬化工有限公司提供；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、菲洛嗪，合肥巴斯夫生物科技有限公司提供；磷酸鹽緩沖液（pH 值7.4）、Tris-鹽酸緩沖液pH 值8.2，廈門海標(biāo)科技有限公司提供；總抗氧化能力（T-AOC） 檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶 （SOD） 測(cè)定試劑盒、丙二醛（MDA） 測(cè)定試劑盒、過氧化氫酶（CAT） 測(cè)定試劑盒、蛋白定量（TP） 測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供；抗壞血酸（維C）、無水乙醇、NaOH、四水合鉬酸銨、鐵氰化鉀、磷酸鈉、三氧化二鐵、四水合氯化亞鐵、七水合硫酸化亞鐵、1,10-菲咯啉（鄰二氮菲）、鄰苯三酚、聚酰胺樹脂、D-半乳糖，均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

QE-5A 型高速中藥粉粹機(jī)，武義縣屹立工具有限公司產(chǎn)品；101A-4 型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱，上?？德穬x器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；KQ-100B 型超聲波清洗器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；L5S 型紫外可見分光光度計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司產(chǎn)品；HL-2B 型數(shù)顯恒流泵，馳唐精密儀器有限公司產(chǎn)品；RE-52AA 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；DZF-6020B 型電熱真空干燥箱，河北科爾美儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；CPA225D 型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京） 有限公司產(chǎn)品；TG 1850-WS 型臺(tái)式高速離心機(jī)，上海盧湘離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品；HH-S2 型二孔智能水浴鍋，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 牛蒡根總黃酮的制備

（1） 牛蒡根的預(yù)處理。將新鮮的牛蒡根清洗干凈、切片，并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.75%的維C 溶液浸泡30 min，瀝水后于40 ℃下鼓風(fēng)干燥至恒質(zhì)量，粉粹，過60 目篩后，低溫冷凍儲(chǔ)存，備用。

（2） 牛蒡根總黃酮的提取。按照料液比1∶23（g∶mL），乙醇體積分?jǐn)?shù)61%，超聲溫度 60 ℃，超聲功率100 W，超聲時(shí)間59 min，對(duì)牛蒡根總黃酮進(jìn)行提取，取上清液[13]，真空干燥，低溫儲(chǔ)存，備用。

（3） 牛蒡根總黃酮的純化。用D101 型大孔樹脂柱（內(nèi)徑30 mm，徑長比1∶7），在上樣液質(zhì)量濃度為10 mg/mL，上樣體積為400 mL，上樣流速為0.5 BV/h，洗脫液為30%的乙醇，洗脫流速為1.5 BV/h 的條件下進(jìn)行初次純化，再用聚酰胺樹脂柱（內(nèi)徑15 mm，60~90 目，徑長比1∶8） 在上樣液質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL，pH 值為2，上樣體積為20 mL，上樣流速為0.5 BV/h，洗脫液為70%的乙醇，洗脫流速為4 BV/h 的條件下進(jìn)行二次純化[14]，并將純化后牛蒡根總黃酮溶液進(jìn)行減壓蒸餾濃縮并真空干燥，低溫冷凍儲(chǔ)存，備用。

1.3.2 體外抗氧化活性研究

（1） DPPH 自由基的清除能力評(píng)價(jià)方法。參照蔡茜彤等人[15]的方法，略作修改。稱取3.94 mg DPPH，用無水乙醇溶解并定容至100 mL 作為DPPH 工作液。將純化后的牛蒡根總黃酮A 和B 分別用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇配制成系列質(zhì)量濃度的溶液（0.25，0.50，0.75，1.00 mg/mL）。取9 支潔凈的10 mL 比色管，編號(hào) （A1，A2，A3，A4，B1，B2，B3，B4，0） 分別加入200 μL 不同質(zhì)量濃度的牛蒡根總黃酮溶液，0 號(hào)管加入70%乙醇200 μL 代替牛蒡根總黃酮溶液作為空白對(duì)照，再加入DPPH 工作液2 mL，振蕩搖勻后于室溫下避光靜置30 min，于波長517 nm 處測(cè)定吸光度。維 C 溶液 （25，50，75，100 g/mL） 以同樣的方法測(cè)定。以樣品質(zhì)量濃度為自變量，DPPH 自由基清除率為因變量作圖并進(jìn)行線性擬合，計(jì)算IC50值（清除率為50%時(shí)所需樣品溶液的質(zhì)量濃度），所需質(zhì)量濃度越低，樣品的自由基清除能力越強(qiáng)。

式中：As——樣品管的吸光度；

A0——對(duì)照管的吸光度。

（2） 羥自由基清除能力評(píng)價(jià)方法。按照婁在祥等人[16]的方法，按下表加入相應(yīng)試劑后，避光靜置60 min，于波長536 nm 處測(cè)定吸光度，并以樣品質(zhì)量濃度為自變量，羥自由基清除率為因變量作圖并進(jìn)行線性擬合，計(jì)算IC50值。

羥自由基試驗(yàn)加樣見表1。

表1 羥自由基試驗(yàn)加樣 / mL

式中：A樣——樣品管的吸光度；

A樣參——樣品參比管的吸光度；

A損傷——損傷管的吸光度；

A空參——空白參比管的吸光度；

A未損——未損傷管的吸光度。

（3） 超氧陰離子自由基清除能力評(píng)價(jià)方法。取0.05 mol/L Tris-HCl 緩沖液 （pH 值 8.2） 4.5 mL 于試管中，于25 ℃下水浴20 min，再分別加入不同濃度的試樣溶液1 mL 和25 mmol/L 鄰苯三酚溶液0.4 mL，于25 ℃下反應(yīng)5 min，加入8 mol/L 鹽酸1 mL 終止反應(yīng)，于波長325 nm 處測(cè)定吸光度。以相同體積的蒸餾水代替樣品為空白對(duì)照。以樣品質(zhì)量濃度為自變量，超氧陰離子自由基清除率為因變量作圖并進(jìn)行線性擬合，計(jì)算IC50值[17]。

式中：As——樣品管的吸光度；

A0——對(duì)照管的吸光度。

（4） 總抗氧化能力的測(cè)定方法。鉬酸銨反應(yīng)體系的制備：將0.99 g 四水合鉬酸銨、2.13 g 磷酸鈉溶于200 mL 水中，再加入6.67 mL 濃硫酸，混勻。將0.3 mL 不同質(zhì)量濃度的試樣溶液和3 mL 的鉬酸銨反應(yīng)體系混勻后于95 ℃水浴加熱90 min，冷卻后，于波長695 nm 處測(cè)定吸光度。吸光度越大，說明其還原能力越強(qiáng)，總抗氧化能力越強(qiáng)?？瞻自囼?yàn)以相同體積的蒸餾水代替樣品。以樣品質(zhì)量濃度為自變量，總抗氧化能力為因變量作圖并進(jìn)行線性擬合[18]。

（5） 金屬離子螯合能力的測(cè)定方法。在不同濃度 （0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mg/mL） 的試樣溶液2.4 mL 中加入現(xiàn)配的 2 mmo1/L 的 FeCl2溶液 30 μL和5 mmol/L 的菲咯嗪溶液60 μL，混勻后，室溫靜置10 min，于波長562 nm 處測(cè)定吸光度，空白試驗(yàn)以相同體積的70%乙醇溶液代替樣品。以樣品濃度為自變量，金屬離子螯合能力為因變量作圖并進(jìn)行線性擬合，計(jì)算IC50值[19]。

式中：As——樣品管的吸光度；

A0——對(duì)照管的吸光度。

（6） 鐵離子還原能力的測(cè)定方法。在 10 mL 比色管中分別加入1 mL 不同質(zhì)量濃度的試樣溶液和1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)） 鐵氰化鉀溶液1 mL，混勻后于50 ℃水浴反應(yīng)20 min，急速冷卻后，加入蒸餾水1 mL 及0.2 mL 0.1%（質(zhì)量濃度） 的氧化鐵溶液（3.5%的鹽酸溶液）。混勻后，室溫下靜置10 min，于波長700 nm處測(cè)定吸光度，吸光度越高表示還原能力越強(qiáng)[18]。

1.3.3 體內(nèi)抗氧化活性研究

（1） 動(dòng)物分組和給藥方式。40 只KM 小鼠（雌雄各半），適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d 后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4 組（每組10 只，雌雄各半）：空白組、模型組、試驗(yàn)A 組、試驗(yàn)B 組。構(gòu)建衰老小鼠模型[20]：除空白組外，其余每組小鼠頸背部皮下注射D -半乳糖，每天200 mg/kg（以體重計(jì)，下同），注射量為0.02 mL/g?？瞻捉M注射等體積的生理鹽水，連續(xù)注射28 d。造模同時(shí)，試驗(yàn)A 組和試驗(yàn)B 組按每天400 mg/kg 的劑量分別灌胃牛蒡根總黃酮A 和牛蒡根總黃酮B，灌胃體積為20 mL/kg、空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃28 d。每7 d 稱體重1 次，觀察記錄各組小鼠的生長活動(dòng)狀況和體重變化情況，并按體重變化調(diào)整注射及灌胃劑量。試驗(yàn)期間，所有小鼠自由攝食和飲水，溫度為20±3 ℃，相對(duì)濕度為50%±10%[21]。

（2） 動(dòng)物血清和肝組織樣品的制備。第28 天，最后一次灌胃后，所有小鼠禁食不禁水過夜（12 h），稱重后摘眼球取血，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min 離心10 min，分離血清。取血后，頸椎脫臼處死小鼠，迅速解剖，取出小鼠肝臟，棉簽吸去浮血并稱重，隨后用預(yù)冷的生理鹽水清洗并用濾紙吸干，用預(yù)冷生理鹽水制備10%組織勻漿（組織質(zhì)量∶生理鹽水體積=1∶9），以轉(zhuǎn)速 4 000 r/min 離心 10 min 后取上清液[22]。將血清和組織勻漿上清液放于-20 ℃冰箱中保存，備用。

（3） 體內(nèi)抗氧化指標(biāo)測(cè)定。小鼠血清、肝臟的總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA） 含量、過氧化氫酶（CAT）活性的測(cè)定按照試劑盒說明操作。

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Excel 2007 和SPSS V 17.0 軟件，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，組間用單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，其中p<0.05 具有顯著性差異，p<0.01 具有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛蒡根總黃酮提取與純化結(jié)果

試驗(yàn)中，牛蒡根A 和牛蒡根B 的總黃酮粗提物得率分別為27.96±0.30 mg/g，25.74±0.23 mg/g。純化后的牛蒡根總黃酮含量為783.05±6.26 mg/g（A），765.22±5.06 mg/g（B）。

2.2 體外抗氧化結(jié)果

2.2.1 DPPH 自由基的清除能力

各試樣的DPPH 自由基清除能力見圖1。

圖1 各試樣的DPPH 自由基清除能力

由圖1（a） 可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度增加，其DPPH 自由基清除能力都呈線性關(guān)系增加，進(jìn)行線性擬合，得R2=0.987 6（A），R2=0.994 6（B），結(jié)果表明 2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，將Y=50%分別代入方程Y=0.919X-0.002（A），Y=0.775 8X+0.002 3（B），得到牛蒡根總黃酮清除 DPPH 自由基的IC50值分別為0.542±0.049 mg/mL（A），0.642±0.058 mg/mL（B），同樣由圖 1（b）可知，維 C 的 IC50值為 0.075±0.008 mg/mL?？梢妰傻嘏］蚋傸S酮的DPPH 自由基清除能力是維C 的1/8，說明其均具有較強(qiáng)的DPPH 自由基清除能力，且牛蒡根A 總黃酮略強(qiáng)于牛蒡根B 總黃酮。

2.2.2 自由基的清除能力

各試樣的羥自由基清除能力見圖2。

圖2 各試樣的羥自由基清除能力

由圖2（a） 可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度增加，其羥自由基清除能力都增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得R2=0.981 0（A），R2=0.990 3（B），結(jié)果表明2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，將Y=50%分別代入方程Y=0.619 6X+0.030 6（A），Y=0.503 6X-0.022 5（B），得到牛蒡根總黃酮清除羥自由基的IC50值分別為0.761±0.068 mg/mL（A），1.04±0.098 mg/mL（B），同樣由圖 2（b） 可知，維C 的IC50值為0.236±0.027 mg/mL。可見兩地牛蒡根總黃酮的羥自由基清除能力是維C 的1/4，說明其均具有較強(qiáng)的羥自由基清除能力，且牛蒡根A總黃酮略強(qiáng)于牛蒡根B 總黃酮。

2.2.3 超氧陰離子自由基的清除能力

各試樣的超氧陰離子自由基清除能力見圖3。

由圖3（a） 可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度增加，其超氧陰離子自由基清除能力都增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得R2=0.983 9（A），R2=0.980 2（B），結(jié)果表明 2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，將Y=50%分別代入方程Y=0.597 7X+0.026 3（A），Y=0.479 9X-0.006 5（B），得到牛蒡根總黃酮清除超氧陰離子自由基的IC50值分別為0.793±0.084 mg/mL（A），1.06±0.12 mg/mL（B），同樣由圖 3（b） 可知，維 C 的 IC50值為 0.319±0.037 mg/mL?？梢妰傻嘏］蚋傸S酮的超氧陰離子自由基清除能力是維C 的1/3，說明其均具有很強(qiáng)的超氧陰離子自由基清除能力，且牛蒡根A 總黃酮的超氧陰離子自由基清除能力強(qiáng)于牛蒡根B總黃酮。

圖3 各試樣的超氧陰離子自由基清除能力

2.2.4 總抗氧化能力

各試樣的總抗氧化能力見圖4。

圖4 各試樣的總抗氧化能力

由圖4（a） 可知，在質(zhì)量濃度小于0.5 mg/mL時(shí)，總抗氧化能力隨牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得R2=0.973 8（A），R2=0.980 3（B），結(jié)果表明2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，且相同質(zhì)量濃度下的牛蒡根A 和牛蒡根B 的總黃酮的總抗氧化能力比維C 弱。當(dāng)質(zhì)量濃度為原來的10 倍時(shí)，由圖4（b） 可知，總抗氧化能力與牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度仍然呈線性關(guān)系增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得 R2=0.984 8（A），R2=0.994 1（B），表明線性關(guān)系仍然較好。由此可以推斷，在所測(cè)質(zhì)量濃度氛圍內(nèi)（5 mg/mL），牛蒡根總黃酮的總抗氧化能力與其質(zhì)量濃度呈線性正相關(guān)，由圖4 還可知，B 的斜率比徐州A 的斜率小，也就是說相同質(zhì)量濃度下的A 的吸光度大于B 的吸光度，由此說明徐州的總抗氧化能力略強(qiáng)于蒼山的。

2.2.5 金屬離子螯合能力

各試樣的金屬離子螯合能力見圖5。

圖5 各試樣的金屬離子螯合能力

由圖5（a） 可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度增加，其金屬離子螯合能力都增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得R2=0.964 3（A），R2=0.967 8（B），結(jié)果表明2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，將Y=50%分別代入方程Y=0.015 7X+0.068 6（A），Y=0.014 9X+0.062（B），得到牛蒡根總黃酮金屬離子螯合能力的IC50值分別為27.48±0.24 μg/mL（A），29.40±0.32 μg/mL（B），同樣由圖 5（b） 可知，維 C 的 IC50值為 4.83±0.054 μg/mL，可見兩地牛蒡根總黃酮的金屬離子螯合能力是維C 的1/6，說明其均具有較強(qiáng)的金屬離子螯合能力，且牛蒡根A總黃酮的金屬離子螯合能力強(qiáng)于牛蒡根B 總黃酮。

2.2.6 鐵離子還原能力

各試樣的鐵離子還原能力見圖6。

圖6 各試樣的鐵離子還原能力

由圖6（a） 和（b） 可知，在所測(cè)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著牛蒡根總黃酮的質(zhì)量濃度增加，其鐵離子還原能力都增加，對(duì)其進(jìn)行線性擬合，得R2=0.995 3（A），R2=0.990 2（B），結(jié)果表明2 個(gè)的線性關(guān)系都較好，又由圖中數(shù)據(jù)可以看出，相同質(zhì)量濃度下的牛蒡根A 和牛蒡根B 的總黃酮的吸光度相差較小，由于吸光度值與還原力強(qiáng)度成正比，吸光度越大，表明其還原能力越強(qiáng)，由此說明兩地牛蒡根總黃酮的鐵離子還原能力幾乎沒有差別。與維C 比較，相同吸光度下的牛蒡根A 和牛蒡根B 的總黃酮質(zhì)量濃度約為維C 質(zhì)量濃度的3 倍，可見牛蒡根總黃酮有較強(qiáng)的鐵離子還原能力。

2.3 體內(nèi)抗氧化結(jié)果

2.3.1 不同給藥方式對(duì)小鼠體重的影響

不同給藥方式下的小鼠體重變化見表2。

表2 不同給藥方式下的小鼠體重變化 / g

由表2 可知，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d 后，隨機(jī)分組，各組的體重?zé)o顯著差異。從第2 周末開始，模型組與空白組呈現(xiàn)極顯著差異（p<0.01），說明空白組增重幅度比模型組大很多，呈現(xiàn)極顯著差異。隨著給藥天數(shù)的增加，模型組小鼠逐漸呈現(xiàn)衰老狀態(tài)，主要表現(xiàn)為食量減小、進(jìn)食不積極、毛色暗淡無光澤、眼球暗紅無神、體力差、容易抓取，說明注射D -半乳糖致小鼠衰老模型造模成功。第2 周末，試驗(yàn)A 組和B 組均與模型組呈現(xiàn)顯著差異（p<0.05）；第3 周末，試驗(yàn)A 組與模型組呈現(xiàn)極顯著差異（p<0.01），試驗(yàn)B 組與模型組呈現(xiàn)顯著差異（p<0.05）；第4 周末，試驗(yàn)A 組和B 組均與模型組呈現(xiàn)極顯著差異（p<0.01）。說明牛蒡根總黃酮有延緩衰老的作用，隨著時(shí)間的增加作用越明顯。試驗(yàn)A 組和B 組無顯著差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3.2 牛蒡根總黃酮對(duì)小鼠血清、肝臟的T-AOC、SOD、MDA 和 CAT 的影響

小鼠血清、肝臟的T-AOC、SOD、MDA 和CAT見表3。

由表3 可知，模型組小鼠的血清和肝臟中的T-AOC、SOD、和CAT 與空白組相比，都極顯著（p<0.01） 地降低，MDA 極顯著增加，表明模型構(gòu)建是成功的。試驗(yàn)A 組能極顯著（p<0.01） 地提升小鼠血清和肝臟的T-AOC、CAT 活性，顯著（p<0.05）提升小鼠血清和肝臟的SOD 活性，同時(shí)極顯著（p<0.01） 地降低小鼠血清和肝臟的MDA 含量、試驗(yàn)B 組能極顯著（p<0.01） 地提升小鼠血清與肝臟的T-AOC 和小鼠肝臟中的CAT 活性，顯著（p<0.05） 提升小鼠血清中的CAT 活性和小鼠血清與肝臟的SOD 活性，同時(shí)極顯著（p<0.01） 地降低小鼠血清和肝臟的MDA 含量。也就是說，牛蒡根A 總黃酮和牛蒡根B 總黃酮都能較好地提升D -半乳糖致衰老模型小鼠的總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD） 活性、過氧化氫酶（CAT） 活性和降低其丙二醛（MDA） 含量，說明兩地牛蒡根總黃酮都具有很好的體內(nèi)抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑加以開發(fā)利用，為其后續(xù)的研究開發(fā)提供基礎(chǔ)。

表3 小鼠血清、肝臟的T-AOC、SOD、MDA 和CAT

3 結(jié)論

自由基是客觀存在的，其能對(duì)機(jī)體造成損傷，引起多種疾病，如肝硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎、老年性癡呆、提前衰老等[23]，且與自由基有關(guān)的疾病發(fā)病率逐年上升。在抗氧化劑的作用下，自由基能不斷地被清除。清除自由基能力越強(qiáng)，則抗氧化性越強(qiáng)。生物體內(nèi)存在某些過渡金屬離子如鐵、銅等，他們能夠通過催化某些物質(zhì)（如過氧化氫） 產(chǎn)生自由基，對(duì)機(jī)體造成危害，當(dāng)具有抗氧化活性的物質(zhì)存在時(shí)，其能夠鏊合金屬離子、阻止自由基的形成。物質(zhì)的還原能力反映出其提供電子和氫自由基的能力，還原能力與抗氧化活性之間有顯著的相關(guān)性，還原能力越強(qiáng)，抗氧化能力越強(qiáng)。試驗(yàn)從DPPH 自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力、金屬離子螯合能力、總抗氧化能力和鐵離子還原能力6 個(gè)方面考查了純化后牛蒡根A和牛蒡根B 總黃酮的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，徐州和蒼山兩地的牛蒡根多酚總黃酮都具有很強(qiáng)的總抗氧化能力和鐵離子還原力、DPPH 自由基清除能力 （IC50：0.542±0.049 mg/mL（A），0.642±0.058 mg/mL（B））、羥自由基清除能力（IC50：0.761±0.068 mg/mL（A），1.04±0.098 mg/mL（B））、超氧陰離子自由基清除能力（IC50：0.793±0.084 mg/mL（A），1.06±0.12 mg/mL（B））、金屬離子螯合能力（IC50：27.48±0.24 μg/mL （A），29.40±0.32 μg/mL（B）），且沒有明顯差異，也就是說牛蒡根總黃酮可以很好地清除自由基并螯合金屬離子以阻止自由基的產(chǎn)生，體現(xiàn)其具有良好的體外抗氧化活性，因此牛蒡根可以作為天然抗氧化劑加以開發(fā)利用。

機(jī)體的防御體系抗氧化能力與健康存在著密切的聯(lián)系，當(dāng)機(jī)體的總抗氧化能力降低時(shí)，則易引起各種疾病。SOD 幾乎存在于所有生物細(xì)胞中，是生物體內(nèi)中藥的抗氧化酶，SOD 能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷[24-25]。SOD 活力的高低間接地反映了機(jī)體清除自由基的能力。MDA 含量的高低反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映了細(xì)胞的受損程度[26]。MDA 的測(cè)定常常與SOD 的測(cè)定互相配合。CAT 普遍存在于生物機(jī)體內(nèi)，它可以催化過氧化氫分解為水和氧氣，使得過氧化氫不至于與氧在鐵螯合物作用下反應(yīng)生成非常有害的羥自由基，從而保護(hù)機(jī)體免受有害物質(zhì)損傷。從小鼠血清和肝臟的 T-AOC、SOD 活性、MDA 含量、CAT 活性 4 個(gè)方面考查了2 個(gè)不同地方（徐州和蒼山） 牛蒡根總黃酮對(duì)D - 半乳糖致衰老小鼠的體內(nèi)抗氧化活性。結(jié)果表明，兩地牛蒡根總黃酮都能顯著地提升小鼠血清和肝臟的T-AOC、CAT 活性、SOD 活性，同時(shí)能顯著降低小鼠血清和肝臟的MDA 含量，且兩地牛蒡根總黃酮體內(nèi)抗氧化活性沒有顯著差異。由此可見，兩地牛蒡根總黃酮都具有較好的體內(nèi)抗氧化活性，進(jìn)一步說明，牛蒡根在抗氧化性方面極具開發(fā)價(jià)值。