蟠桃胚培苗的移栽技術(shù)及影響因子研究

杜紀(jì)紅 吳丹丹 蘇明申 周慧娟 李雄偉 張夏南 葉正文

摘要 為探索影響胚培苗移栽成活率的因子，對(duì)蟠桃胚培苗的移栽苗齡、移栽基質(zhì)、肥料、葉面噴施的藥劑種類等進(jìn)行研究。結(jié)果表明，苗齡10 d的幼苗移栽后成活率最高為86.7%，隨著移栽時(shí)間的推遲，移栽苗的長(zhǎng)勢(shì)和成活率降低。陽(yáng)光3號(hào)混合泥炭∶珍珠巖=2∶1、椰糠∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1、草炭∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1這3種基質(zhì)配比對(duì)胚培苗移栽后的株高、株粗和成活率影響不顯著，均可作為胚培苗的移栽基質(zhì)。移栽后澆灌花多多水溶肥能夠顯著提高株高、株粗及葉片葉綠素含量，壯苗效果明顯。葉面噴施200 mg/L GA3（赤霉素）處理的幼苗株高是對(duì)照的2倍，但會(huì)降低葉片葉綠素含量; 200 mg/L IAA、 200 mg/L 6-BA、多效唑、尿素處理對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響較小，因此葉面噴施GA3是促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)的有效藥劑。初步探索出一套高效實(shí)用的蟠桃挽救苗配套移栽技術(shù)。

關(guān)鍵詞 胚培苗;苗齡;基質(zhì);肥料;藥劑處理

中圖分類號(hào) S662.1? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）13-0048-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.13.013

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Study on Transplanting Techniques and Influencing Factors of Cuvette Plantlets of Flat Peach

DU Ji hong，WU Dan dan，SU Ming shen et al

（Forest and Fruit Tree Research Institute， Shanghai Academy of Agricultural Sciences， Shanghai 201403）

Abstract In order to explore the factors affecting the survival rate of in vitro seedlings， the seedling age， matrix， fertilizer and the kinds of medicines sprayed on the leaves of embryo rescued test tube seedlings of flat peach were discussed. The results showed that the highest survival rate was 86.7% after transplantation of seedlings aged 10 days. With the delay of transplanting time， the growth and survival rate of transplanted seedlings decreased.? Peat （containing vermiculite）： perlite = 2：1， coconut chaff： vermiculite： perlite = 1：1：1; peat： vermiculite： perlite=1∶1∶1，plant height， plant diameter and survival rate after transplantation of test tube seedlings had no significant difference， which could be used as the transplantation matrix of test tube seedlings. After transplanting， watering more water soluble fertilizer could significantly improve plant height， plant diameter and chlorophyll content of leaves， and the effect of strong seedlings was obvious.After spraying different reagents on the leaves， it was found that the plant height of the seedlings treated with GA3 （gibberellin） was twice as high as that of the control， but the chlorophyll content of the leaves decreased; IAA （auxin） inhibited the growth of the seedlings and even caused death; 6-BA （6 benzylaminopurine， cytokinin） treatment had no effect on the plant height， but could promote the germination of lateral branches of the seedlings;paclobutrazol treatment inhibited the growth of the seedlings;the content of chlorophyll in leaves was increased， but the effect on the growth of seedlings was slight. Therefore， spraying GA3 on the leaves was an effective drug to promote the growth of seedlings. Through the study， a set of efficient and practical transplanting techniques for rescuing flat peach seedlings were preliminarily explored.

Key words Plantlet;Seedling age;Stroma;Fertilizer;Medicament treatment

胚培苗的移栽和管理是胚挽救技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，能否為育種工作提供種質(zhì)資源和育種材料關(guān)鍵在于胚培苗能否在田間成活[1]。胚培苗由于長(zhǎng)期在營(yíng)養(yǎng)豐富、水分充足、弱光、恒溫的環(huán)境下生長(zhǎng)，其生理特性和組織結(jié)構(gòu)與大氣環(huán)境下生長(zhǎng)的植株有很大區(qū)別，胚培苗葉片偏薄，柵欄組織稀薄，氣孔發(fā)育不完善，根系活力低。在煉苗移栽過(guò)程中極易出現(xiàn)失水萎蔫的現(xiàn)象，導(dǎo)致移栽成活率低，只有提供適宜的外界條件，使其逐步適應(yīng)環(huán)境變化，才能提高移栽成活率[2-5]。

胚培苗的移栽成活率除與幼苗的生長(zhǎng)情況有關(guān)，還受到移栽時(shí)間、移栽基質(zhì)、煉苗處理、壯苗處理等因素的影響。胚挽救苗出苗時(shí)正是秋冬季節(jié)，因此不能直接移栽到露地，應(yīng)該先在基質(zhì)中進(jìn)行過(guò)渡，然后春天再在大田中定植。張滿讓等[6]研究表明，胚培苗在經(jīng)過(guò)煉苗后移栽，且用多菌靈灌根，可使幼苗的成活率達(dá)到最高。胚培苗長(zhǎng)勢(shì)弱，通過(guò)噴施營(yíng)養(yǎng)液，能夠促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)，增強(qiáng)抗病性。此外，要注意光、溫度、濕度的管理，在移栽后及時(shí)采用遮光措施，及時(shí)澆水等。

早熟桃胚挽救苗在移栽后與中晚熟桃種子萌發(fā)后的幼苗相比往往表現(xiàn)出生長(zhǎng)緩慢，植株細(xì)弱，立枯病發(fā)病嚴(yán)重的問(wèn)題。立枯病往往造成15%～50%的死亡率，是影響移栽成活率的主要因素，降低立枯病最有效方法是促使幼苗快速生長(zhǎng)，提高幼苗的健壯程度，促進(jìn)根莖部提早木質(zhì)化。筆者以胚培苗為材料，從移苗時(shí)間、基質(zhì)配比、葉面噴施不同藥劑、根部使用不同肥料等影響培育健壯胚培苗的主要因素進(jìn)行研究，旨在確定胚挽救的關(guān)鍵技術(shù)，提高早熟蟠桃的育種效率，為加快選育綜合品質(zhì)優(yōu)良的蟠桃新品種、滿足市場(chǎng)需求、豐富我國(guó)蟠桃品種資源作出積極貢獻(xiàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

胚培苗為早熟蟠桃“滬蟠1號(hào)”和“滬油018” 雜交后代種子經(jīng)過(guò)胚挽救技術(shù)獲得的。春季進(jìn)行常規(guī)性雜交授粉工作，果實(shí)七成熟采集果實(shí)在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒接種，接種后的試管放置在-4 ℃條件下70 d（約10月），打破休眠后移至培養(yǎng)室中（溫度20 ℃，白天/黑夜各12 h）進(jìn)行培養(yǎng)，7 d后子葉變綠，14 d后基本上成苗。將正常幼苗從培養(yǎng)基中取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，栽入基質(zhì)中，澆透水，進(jìn)行保濕，移栽后將幼苗放在玻璃溫室中培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按照單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共設(shè)4個(gè)影響因子。

（1）不同移栽苗齡。從冷庫(kù)取出的接種胚，在25? ℃條件下光照培養(yǎng)10 d（處理①）、15 d（處理②）、20 d（處理③）后分別進(jìn)行移苗。移栽標(biāo)準(zhǔn)是幼苗上部發(fā)育正常，莖部正常伸長(zhǎng)，根系多于5條，根系發(fā)育正常。調(diào)查移栽當(dāng)天幼苗的根量、根長(zhǎng)及葉片數(shù)量及株高。90 d后調(diào)查株高、株粗、移栽成活率及葉片葉綠素含量。

（2）不同基質(zhì)配比。將幼苗移栽到3種基質(zhì)中：A陽(yáng)光3號(hào)混合泥炭（含20% 蛭石）∶珍珠巖=2∶1（換算后的實(shí)際比為草炭∶蛭石∶珍珠巖=4∶1∶2.5）; B椰糠∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1;C草炭∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1。草炭為維特0-10型號(hào)，珍珠巖為大粒類型。移栽90 d后調(diào)查株高、葉片數(shù)、根長(zhǎng)及根量。

（3）不同肥料。處理①：使用花多多系列水溶肥（高氮），800倍稀釋后澆透基質(zhì)，直至滲出;處理②：使用荷格倫特營(yíng)養(yǎng)液（常規(guī)配方），澆透基質(zhì)，直至滲出;處理③：使用愛(ài)貝施（APEXR）控釋肥，按5%的體積施入基質(zhì)表面;緩苗移栽成活后30 d使用上述肥料，處理①和處理②每隔7 d左右施一次。

（4）不同葉面藥劑處理。幼苗移栽成活30 d后分別噴施水（對(duì)照）、IAA（200 mg/L）、 6-BA（200 mg/L）、GA3（200 mg/L）、尿素（0.2%）、多效唑（200 mg/L）。多效唑噴施1次，其余處理各噴施2次，中間間隔10 d。每次噴施直至有溶液沿葉片滴落。移栽90 d后調(diào)查株高、株粗、移栽成活率及葉片葉綠素含量。

以上每個(gè)處理均為15棵，5棵作為一組，3次重復(fù)。移栽90 d后調(diào)查株高、株粗、移栽成活率及葉片葉綠素含量。

1.3 調(diào)查方法及分析 移栽的成活率=（成活苗數(shù)/移栽數(shù)）×100% （成活苗數(shù)是指移栽30 d后調(diào)查，正常生長(zhǎng)的苗數(shù)）;采用直尺測(cè)定根莖到植株頂部的距離即為株高，游標(biāo)卡尺測(cè)定根莖部的直徑粗度即為株粗。葉綠素的測(cè)定使用SPAD- 502 Plus-葉綠素測(cè)定儀，每棵樹(shù)測(cè)定頂部向下第3～6片葉子的葉綠素值，9次重復(fù)。數(shù)據(jù)整理和作圖使用Excel軟件，顯著性分析使用SPSS軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 移栽苗齡對(duì)移栽苗成活率與幼苗生長(zhǎng)的影響

從表1可以看出，幼苗移栽時(shí)，隨著苗齡的延長(zhǎng)，幼苗的各個(gè)指標(biāo)均呈上升趨勢(shì)，其中3個(gè)處理的株高、根量2個(gè)指標(biāo)差異均達(dá)顯著水平，處理②和處理③的株高是處理①的1.37倍和178倍，根量是1.40倍和1.88倍。葉片數(shù)處理①和③之間差異顯著，處理②與處理①和處理③之間差異均不顯著。處理③的根長(zhǎng)顯著長(zhǎng)于②與①，處理①和②的根長(zhǎng)差異不顯著。

由表2可知，移栽后90 d的株高、株粗、葉綠素和成活率隨著苗齡的上升呈下降趨勢(shì)，處理①、②、③的株高分別是33.67、31.53、31.44 cm，差異未達(dá)顯著水平。處理①、②、③的株粗分別是0.34、0.32、0.26 cm，處理③與處理①、②差異顯著。處理①、②、③的成活率分別是86.7%、73.3%、600%，處理③與處理①差異顯著，處理②與兩者差異均不顯著。葉綠素含量以處理①最高為47.60，與其余2個(gè)處理差異顯著。說(shuō)明移栽越早越好，10～15 d是比較合適的移栽時(shí)間。移栽越早，植株生長(zhǎng)越快，莖粗越粗。早期幼苗根雖然短，但活力較晚移栽幼苗強(qiáng)，適應(yīng)性強(qiáng)，成活率高，生長(zhǎng)速度快。

2.2 不同基質(zhì)對(duì)移栽苗成活率與幼苗生長(zhǎng)的影響 從表3可以看出，3種基質(zhì)對(duì)幼苗的株高、株粗和移栽成活率的影響差異均不顯著，但C處理的幼苗葉綠素含量顯著低于A、B處理。從省力的方面考慮，A處理使用2種基質(zhì)混合更方便，從省錢角度考慮，椰糠價(jià)格是草炭的1/2左右。

2.3 不同肥料對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響 從表4可以得出，花多多水溶肥對(duì)幼苗生長(zhǎng)的促進(jìn)效果最為明顯，株高和株粗均顯著高于緩釋肥和營(yíng)養(yǎng)液處理。3個(gè)處理對(duì)幼苗移栽成活率影響差異較小。葉綠素含量表現(xiàn)為緩釋肥>花多多水溶肥>常規(guī)營(yíng)養(yǎng)液>對(duì)照。說(shuō)明幼苗澆灌花多多水溶肥后幼苗根系吸收快，生長(zhǎng)快，有壯苗效果，是最佳的選擇。

2.4 不同藥劑噴施處理對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響 從表5可以看出，葉面噴施不同藥劑后發(fā)現(xiàn)， 200 mg/L GA3（赤霉素）處理的幼苗株高是對(duì)照的2倍，但葉片葉綠素含量降低; 200 mg/L IAA（生長(zhǎng)素）抑制幼苗的生長(zhǎng)甚至造成死亡; 200 mg/L 6-BA處理對(duì)株高無(wú)影響，但能促進(jìn)幼苗側(cè)枝的萌發(fā);多效唑處理抑制幼苗的生長(zhǎng);尿素可提高葉片的葉綠素含量，但對(duì)幼苗的生長(zhǎng)影響較小，因此葉面噴施GA3是促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)的有效藥劑。

3 討論

3.1 移栽苗齡對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響

在移栽過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，移栽苗齡對(duì)移栽成活率、移栽苗的生長(zhǎng)有重要影響。在對(duì)梨胚培苗移栽時(shí)發(fā)現(xiàn)，移栽苗齡對(duì)胚培苗的移栽成活有顯著影響[7]。7月移栽的成活率顯著高于4月和11月。樹(shù)莓組培苗苗齡在 14 d 左右，若再延長(zhǎng)苗齡，移栽成活率下降，該研究也發(fā)現(xiàn)移栽越晚，成活率下降[8]。胚培苗根系早期短，活力高，移栽后很快生出毛細(xì)根，苗齡過(guò)大的胚培苗根系長(zhǎng)，數(shù)量多，全部盤曲在試管底部，移栽過(guò)程中清洗根系周圍的瓊脂時(shí)容易受到傷害，且移栽到基質(zhì)中根系不夠舒展，與基質(zhì)的接觸不夠充分，造成緩苗期延長(zhǎng)，成活率降低。因此，只要種胚已經(jīng)萌發(fā)成苗，應(yīng)盡早將苗移栽，減少移栽過(guò)程對(duì)根系的傷害，使得幼苗盡早適應(yīng)外界環(huán)境，不僅能夠提高移栽成活率，還能夠增強(qiáng)移栽后幼苗長(zhǎng)勢(shì)。

3.2 不同基質(zhì)對(duì)移栽苗成活與生長(zhǎng)的影響

移栽是保證胚培苗成活的關(guān)鍵，適宜的基質(zhì)對(duì)幼苗至關(guān)重要。路鳳珍等[9]對(duì)葡萄挽救苗進(jìn)行移栽和馴化時(shí)，珍珠巖∶蛭石∶河沙=1∶1∶1 作為基質(zhì)的移栽成活率最高。關(guān)海春等[10]在對(duì)早熟黃桃胚培苗移栽時(shí)，園土+珍珠巖+蛭石的成活率最高，達(dá)95.7%，植株的長(zhǎng)勢(shì)也最好。桃樹(shù)怕澇，基質(zhì)必須通透性好，珍珠巖透水性好，但容易上浮，蛭石保濕效果好，利于幼苗根系生長(zhǎng)。該試驗(yàn)中，不同的移栽基質(zhì)對(duì)移栽苗成活率與幼苗生長(zhǎng)情況的影響不明顯，3種基質(zhì)均可以作為移苗基質(zhì)來(lái)使用。移栽初期應(yīng)選擇透水性好的基質(zhì)組合，幼苗較大移栽換盆時(shí)，由于氣溫升高，需水量高，可以換成保濕性更好的基質(zhì)組合，減少珍珠巖比例，增加蛭石和草炭比例。

3.3 不同肥料對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響

早熟桃雜交胚子葉本來(lái)就營(yíng)養(yǎng)不良，移栽后與晚熟桃雜交苗相比會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)勢(shì)弱，生長(zhǎng)慢，更容易受到白粉病、莖枯病等的侵染，所以移栽后需要對(duì)幼苗進(jìn)行施肥，促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)，增強(qiáng)苗的抗病性。李敏等[11]通過(guò)對(duì)迭迭香葉面噴施花多多、尿素、磷酸二氫鉀，發(fā)現(xiàn)花多多對(duì)迭迭香莖粗和鮮重的促進(jìn)效果均最好。蔣曉梅等[12]對(duì)桃苗施用緩釋性肥，可以提高葉片中葉綠素含量和凈光合速率，促進(jìn)桃苗生長(zhǎng)，為桃樹(shù)的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程提供比較穩(wěn)定的養(yǎng)分供應(yīng)。在春石斛組培苗和朱頂紅幼苗的研究中均發(fā)現(xiàn)花多多具有促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)的作用[13-14]。

該試驗(yàn)中對(duì)照不用肥料后幼苗葉片發(fā)黃，生長(zhǎng)緩慢，使用普通營(yíng)養(yǎng)液后幼苗葉色變綠，但生長(zhǎng)仍較慢，常規(guī)營(yíng)養(yǎng)配方也不適合桃幼苗，緩釋性肥料作用甚微，其因?yàn)橛酌缫圃陨L(zhǎng)的時(shí)間為冬季，環(huán)境氣溫低，肥料分解慢，根系吸收見(jiàn)效慢，第二年3月氣溫升高時(shí)觀察發(fā)現(xiàn)緩釋型肥料對(duì)育苗具有明顯的促進(jìn)作用;花多多水溶肥對(duì)幼苗的促進(jìn)效果最明顯，株高顯著高于其他處理。因此蟠桃胚培苗移栽后使用水溶性肥料花多多是見(jiàn)效快、促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)比較好的肥料。

3.4 不同藥劑噴施處理對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響

蟠桃胚培苗移栽時(shí)間一般是10—11月，在溫室中培養(yǎng)至翌年4月移栽到大田，在移栽后（11—2月）隨著冬季溫度降低，日照時(shí)間的減少，幼苗出現(xiàn)頂端生長(zhǎng)點(diǎn)死亡植株生長(zhǎng)停滯的現(xiàn)象，這是二次休眠的現(xiàn)象。設(shè)施桃研究中發(fā)現(xiàn)GA3、6-BA對(duì)打破休眠均有一定作用[15-16]。張桂芬等[17]對(duì)香椿噴施GA3，能夠顯著提高幼苗株高，對(duì)根生長(zhǎng)有抑制作用。劉一靈等[18]對(duì)煙草幼苗生長(zhǎng)的研究中，發(fā)現(xiàn) 6-BA能夠促進(jìn)幼苗葉綠素的積累，對(duì)胚根生長(zhǎng)有抑制作用，對(duì)幼苗下胚軸生長(zhǎng)有促進(jìn)效應(yīng)。6-BA 主要的生理功能是促進(jìn)細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)組織分化;而IAA 影響細(xì)胞分裂、細(xì)胞伸長(zhǎng)和細(xì)胞分化。張福平等[19]研究 20 mg/L IAA對(duì)種子幼根伸長(zhǎng)、紫羅勒種子及幼苗鮮重增加等早期萌發(fā)有明顯影響。郭延平等[20]發(fā)現(xiàn)，在獼猴桃胚培苗的接種培養(yǎng)基中添加多效唑能達(dá)到矮化效果。不同濃度多效唑處理能夠增加紫穗槐幼苗葉綠素含量[21]。

該試驗(yàn)對(duì)移栽30 d的幼苗進(jìn)行不同激素處理，60 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn)，GA3能夠顯著增加幼苗的株高和株粗，具有打破休眠、促進(jìn)頂端繼續(xù)生長(zhǎng)的作用;IAA的促進(jìn)作用不明顯，導(dǎo)致

部分幼苗死亡，可能濃度過(guò)高導(dǎo)致;多效唑能夠控制幼苗長(zhǎng)勢(shì)，增加葉片中葉綠素含量，有矮化效果;尿素和6-BA 對(duì)幼苗株高、株粗和葉綠素含量都有一定的促進(jìn)作用;6-BA促進(jìn)側(cè)枝的形成，驗(yàn)證了高濃度細(xì)胞分裂素能夠促進(jìn)根系生長(zhǎng)的理論[22]。抑制幼苗生長(zhǎng)的主要原因是幼苗進(jìn)入休眠期。胚培苗移栽后通過(guò)噴施GA3打破休眠，促進(jìn)幼苗的生長(zhǎng)，促進(jìn)根莖部位及早木質(zhì)化，提高抗性和移栽時(shí)的株高。綜合考慮，GA3對(duì)幼苗生長(zhǎng)的促進(jìn)效果最佳。

經(jīng)過(guò)試驗(yàn)研究確定移苗及壯苗技術(shù)：移苗最佳苗齡是10 d;基質(zhì)選擇椰糠∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1較好;苗期使用800倍稀釋花多多高氮水溶肥，7～14 d使用一次，當(dāng)幼苗進(jìn)入二次休眠時(shí)，使用GA3（200 mg/L） 連續(xù)噴2次，間隔7～10 d，可以有效打破休眠促進(jìn)生長(zhǎng)。

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