亞慢性硝酸釔暴露對(duì)雌性大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

王佳敏，劉建新，孟慶賀，郝衛(wèi)東*

(北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院毒理學(xué)系，食品安全毒理學(xué)研究與評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100191)

稀土元素(rare earth elements，REEs)是指元素周期表中ⅢB族中的17種化學(xué)元素。稀土廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、醫(yī)藥業(yè)等行業(yè)，是我國(guó)重要的戰(zhàn)略資源。近幾年，稀土元素在茶葉中的暴露情況受到廣泛關(guān)注。稀土微肥通常作為葉面肥使用，農(nóng)用稀土肥料主要采用較易溶解于水的稀土元素硝酸鹽類(lèi)化合物，使得稀土元素進(jìn)入了各種茶葉中，農(nóng)用稀土通過(guò)茶樹(shù)的根莖等進(jìn)入葉片部分進(jìn)行富集并在葉片中殘留，致使普通人群日益頻繁地接觸到稀土元素。研究表明茶葉中稀土元素鈰(Ce)、鑭(La)、釔(Y)的平均含量相對(duì)較高。

釔在地殼中的質(zhì)量豐度約為33 mg/kg，是稀土元素中含量最豐富的元素之一。自然界40%的釔存在于中國(guó)，主要分布于中國(guó)東北、湖南、兩廣、滇川和西北。釔是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的稀土金屬元素，可用于制特種玻璃和合金。常見(jiàn)化合物是氧化釔和鹵化釔，與其他元素化合主要呈正二價(jià)或正三價(jià)態(tài)，所形成的化合物具有高熔點(diǎn)、熱穩(wěn)定性好以及良好的發(fā)光輻射性能等特點(diǎn)。

以往關(guān)于稀土元素的神經(jīng)毒性研究，關(guān)注鑭元素較多，釔及其化合物相對(duì)較少。已有的一些研究發(fā)現(xiàn)，釔及其化合物能夠破壞血腦屏障、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞過(guò)度凋亡、改變神經(jīng)遞質(zhì)含量、損傷學(xué)習(xí)記憶能力，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷。本研究通過(guò)觀察硝酸釔亞慢性(90 d)暴露對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，以谷氨酸(glutamate，Glu)及N-甲基-D-冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDA)蛋白表達(dá)為基礎(chǔ)探究其可能的作用機(jī)制，旨在為稀土元素釔的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

本研究的主要試劑有：硝酸釔(Ⅲ)四水合物[Yttrium(Ⅲ)nitrate tetrahydrate，Y(NO)·4HO，純 度99.99%，上海西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司]，NMDA R1抗 體 和NMDA R2A抗 體(英 國(guó)Abcam公司)，NMDA R2B抗體、大鼠谷氨酸比色法測(cè)試盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)，β-actin抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(美國(guó)Cell Signaling Technology公司)，BCA蛋白檢測(cè)試劑盒(中國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

本研究使用的實(shí)驗(yàn)儀器有：高速冷凍離心機(jī)(Sigma 3-18KS型，德國(guó)Sartorius公司)；多功能組織勻漿儀(FastPrep-24型，美國(guó)MP Biomedicals公司)；超聲細(xì)胞破碎儀(VIRSONIC 100型，美國(guó)VIRTIS公司)；垂直凝膠電泳系統(tǒng)(Mini-PROTEN Tetra cell型，美國(guó)Bio-Rad公司)；化學(xué)發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)(MINI HD9型，英國(guó)UVITEC公司)；微量分光光度計(jì)(NanoPhotometer N50 Touch型，德 國(guó)IMPLEN公 司)；正置熒光顯微鏡(BX43型，日本Olympus公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理

選用剛離乳(PND21)的無(wú)特定病原體(specific pathogen free，SPF)級(jí)SD大 鼠，質(zhì) 量45～55 g，雌性，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0010。動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，溫度20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%。光照條件為12 h/12 h明暗交替循環(huán)，動(dòng)物自由飲水及進(jìn)食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物福利和北京大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定并通過(guò)倫理委員會(huì)審查。

參照經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)GD-424推薦的動(dòng)物神經(jīng)行為毒性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法。大鼠在5 d適應(yīng)期后，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組(ddHO)，Y(NO)低 劑 量 組(10 mg/kg)、中 劑 量 組(40 mg/kg)和高劑量組(160 mg/kg)，每組15只。

1.4 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

1.4.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

將體積為100 cm(長(zhǎng))×100 cm(寬)×50 cm(高)的曠場(chǎng)裝置放置在隔音的房間內(nèi)，嚴(yán)格控制室內(nèi)溫度和通風(fēng)，選用弱光照明。實(shí)驗(yàn)者與設(shè)備保持一定距離。將動(dòng)物放置于曠場(chǎng)中央，曠場(chǎng)地面被分成若干網(wǎng)格，記錄5 min內(nèi)動(dòng)物的活動(dòng)參數(shù)：水平運(yùn)動(dòng)距離、垂直運(yùn)動(dòng)距離、直立次數(shù)、梳理次數(shù)，以及動(dòng)物的典型行為(如舔、咬等)的次數(shù)。分別以曠場(chǎng)中央和周?chē)鷣?lái)計(jì)算以上指標(biāo)，動(dòng)物在中央的活動(dòng)次數(shù)反映了焦慮程度，即中央活動(dòng)次數(shù)越多焦慮越少。

1.4.2 高架十字迷宮

高架十字迷宮包括兩個(gè)開(kāi)放臂和兩個(gè)封閉臂，四者形成十字的形狀，每個(gè)臂長(zhǎng)47 cm，寬15 cm，兩個(gè)封閉臂有高40 cm的壁。動(dòng)物置于迷宮中央，面向其中一個(gè)開(kāi)放的臂。讓動(dòng)物自由探索四個(gè)臂5 min，記錄動(dòng)物第1次進(jìn)入任何臂的潛伏期，以動(dòng)物四肢都進(jìn)入一個(gè)臂算作進(jìn)入1次。每只動(dòng)物只檢測(cè)1次，如果在試驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物跌落，則淘汰該數(shù)據(jù)。計(jì)算動(dòng)物進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)和在開(kāi)臂滯留時(shí)間分別占總次數(shù)(進(jìn)入開(kāi)臂和閉臂次數(shù)之和)和總時(shí)間(在開(kāi)臂和閉臂滯留時(shí)間之和)的百分比，以此作為評(píng)價(jià)焦慮的指標(biāo)。

1.4.3 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)

轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)的裝置為無(wú)頂木箱，箱內(nèi)有可轉(zhuǎn)動(dòng)的防滑材質(zhì)的轉(zhuǎn)棒。試驗(yàn)前1 d，將大鼠置于轉(zhuǎn)棒上以4 r/min的速度適應(yīng)60 s，直到大鼠在轉(zhuǎn)棒上60 s不跌落。測(cè)試當(dāng)天，將大鼠置于轉(zhuǎn)棒上，300 s內(nèi)轉(zhuǎn)速?gòu)? r/min加速到40 r/min。記錄大鼠從竿上跌落的旋轉(zhuǎn)速度和潛伏期，并取3次試驗(yàn)的平均值。

1.4.4

Morris

水迷宮實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)裝置放置在安靜寬敞的房間內(nèi)，在墻壁上懸掛一些圓形、三角形等物體作為動(dòng)物的視覺(jué)線索。在設(shè)備周?chē)虾谏珖熞宰韪魧?shí)驗(yàn)者和受試動(dòng)物。將實(shí)驗(yàn)裝置分為4個(gè)象限，內(nèi)注入自來(lái)水，水高23 cm，水溫保持在(25.0±1.0)℃；于其中西北(NW)象限中心置一圓形平臺(tái)，直徑10 cm，位于水面下1.5～2.0 cm。實(shí)驗(yàn)包括：①定位航向?qū)嶒?yàn)：平臺(tái)置于水面下1.5～2.0 cm，將大鼠隨機(jī)地頭朝池壁，按東北(NE)、西北(NW)、東南(SE)、西南(SW)4個(gè)入水點(diǎn)輕輕放入水池中。每次試驗(yàn)中每只大鼠最多游泳90 s，讓其找到水中隱藏的平臺(tái)，記錄大鼠自入水至找到平臺(tái)四肢爬上平臺(tái)所需的時(shí)間，作為逃避潛伏期。大鼠爬上平臺(tái)后，讓其停留30 s；若入水后給定時(shí)間內(nèi)未能找到平臺(tái)或未能爬上平臺(tái)，則將時(shí)間記錄為90 s，并且將其人為放置于平臺(tái)上30 s，然后從平臺(tái)上取下休息30 s，再進(jìn)行下一次訓(xùn)練。按此方法每只動(dòng)物每天訓(xùn)練4次，連續(xù)訓(xùn)練4 d。②空間探索實(shí)驗(yàn)：最后一次定位航行實(shí)驗(yàn)后24 h，撤除平臺(tái)。將動(dòng)物從任一隨機(jī)象限放入水中追蹤其運(yùn)動(dòng)軌跡60 s，連續(xù)測(cè)試兩次；記錄動(dòng)物目標(biāo)象限(原先放置平臺(tái)的象限)的游泳時(shí)間、游泳距離、進(jìn)入目標(biāo)象限的次數(shù)，以及穿過(guò)原平臺(tái)位置的次數(shù)。

1.5 谷氨酸含量檢測(cè)

行為學(xué)檢測(cè)后，采用股動(dòng)脈放血法處死動(dòng)物，迅速斷頭取腦，冰上快速分離出大腦皮質(zhì)和雙側(cè)海馬，-80℃冰箱凍存待用。使用大鼠谷氨酸比色法測(cè)試盒，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)雌鼠大腦皮質(zhì)和海馬中谷氨酸的含量。

1.6 N-甲基-D-天冬氨酸受體蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用Western blot法。取0.05 g海馬組織加入300 μL RIPA(臨用前按1∶100加入PMSF)，勻漿儀破碎組織，4℃14 000g離心5 min，取上清，PBS稀釋后，用BCA法測(cè)定總蛋白濃度，-80℃冰箱凍存。經(jīng)8% SDS-PAGE分離后，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉室溫下封閉2 h，TBST緩沖液洗滌后，一抗稀釋液孵育，4℃水平輕搖過(guò)夜。所用抗體滴度：β-actin、NMDA R2A、NMDA R2B均為1∶1 000，NMDA R1為1∶5 000。TBST洗滌后，抗兔二抗稀釋液(滴度1∶2 000)室溫下孵育2 h。ECL發(fā)光，運(yùn)用化學(xué)發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)采集圖片，ImageJ軟件測(cè)定條帶像素值，以β-actin為內(nèi)參蛋白，計(jì)算得到目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.7 大鼠腦組織病理組織學(xué)檢查

各暴露組取5只雌鼠，進(jìn)行原位灌注后斷頭取腦，4%多聚甲醛溶液中浸泡固定腦組織24 h。經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明處理后，對(duì)腦組織標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片后進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下對(duì)腦組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以

x

ˉ±

s

表示，采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用雙因素重復(fù)測(cè)量方差分析(two-way repeated measures ANOVA)比較定位航向?qū)嶒?yàn)的學(xué)習(xí)曲線(劑量組×訓(xùn)練天數(shù))。對(duì)于其他指標(biāo)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，各劑量組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間采用LSD-

t

檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，

P

＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

見(jiàn)表1。硝酸釔90 d暴露后，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各硝酸釔暴露組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)距離、直立次數(shù)、梳理次數(shù)、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

＞0.05)；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各硝酸釔暴露組大鼠的進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)[進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)/(進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)+進(jìn)入閉臂次數(shù))]、進(jìn)入開(kāi)臂時(shí)間(進(jìn)入開(kāi)臂時(shí)間/總時(shí)間)、開(kāi)臂中運(yùn)動(dòng)距離(開(kāi)臂中運(yùn)動(dòng)距離/總運(yùn)動(dòng)距離)的百分比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

＞0.05)；轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠的在棒時(shí)間、在棒圈數(shù)、掉落速度均明顯升高(

P

＜0.05)。

表1 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(n=10)

2.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠定位航向?qū)嶒?yàn)結(jié)果的影響如圖1所示，隨著訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)，與第1天相比，對(duì)照組及各硝酸釔暴露組大鼠的逃避潛伏期與總航行距離均明顯降低(

P

＜0.05)。與對(duì)照組相比，訓(xùn)練第4天時(shí)，40、160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠逃避潛伏期明顯縮短(

P

＜0.05)。

圖1 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠定位航向?qū)嶒?yàn)結(jié)果的影響(n=10)

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響如表2所示，與對(duì)照組相比，40 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限游泳時(shí)間、目標(biāo)象限游泳時(shí)間百分比(目標(biāo)象限游泳時(shí)間/總時(shí)間)時(shí)間明顯升高(

P

＜0.05)；160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)、進(jìn)入目標(biāo)象限次數(shù)、目標(biāo)象限游泳時(shí)間明顯升高(

P

＜0.05)；各硝酸釔暴露組大鼠的目標(biāo)象限游泳時(shí)間、目標(biāo)象限游泳距離、目標(biāo)象限游泳距離百分比(目標(biāo)象限游泳距離/總游泳距離)、總游泳距離、游泳平均速度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P＞

0.05)。

表2 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(n=10)

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠空間探索實(shí)驗(yàn)各個(gè)象限結(jié)果的影響如圖2所示，與目標(biāo)象限NW象限的逃避潛伏期相比，對(duì)照組大鼠NE、SE象限的逃避潛伏期明顯高于NW象限的逃避潛伏期(

P

＜0.05)；40 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠SW象限的逃避潛伏期明顯低于NW象限的逃避潛伏期(

P

＜0.05)；160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠NE、SW、SE象限的逃避潛伏期明顯低于NW象限的逃避潛伏期(

P

＜0.05)。

圖2 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠空間探索實(shí)驗(yàn)各個(gè)象限中結(jié)果的影響(n=10)

2.3 大鼠腦谷氨酸含量檢測(cè)結(jié)果

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠大腦皮質(zhì)及海馬中Glu含量的影響如圖3所示，與對(duì)照組相比，各硝酸釔暴露組大鼠大腦皮質(zhì)中Glu含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P＞

0.05)；而160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠海馬中Glu含量顯著降低(

P

＜0.05)。

圖3 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠大腦皮質(zhì)及海馬中Glu含量的影響(n=10)

2.4 離子型谷氨酸受體蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠海馬中NMDA受體R1、R2A、R2B蛋白表達(dá)的影響如圖4所示，與對(duì)照組相比，40 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠海馬中NMDA受體R2A含量和160 mg/(kg·d)硝酸釔暴露組大鼠海馬中NMDA受體R1、R2A含量均顯著降低(

P

＜0.05)。

圖4 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠海馬中NMDA受體蛋白表達(dá)的影響(n=10)

2.5 大鼠海馬組織HE染色結(jié)果

硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響如圖5所示。在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，與對(duì)照組相比，各硝酸釔暴露組海馬組織均未見(jiàn)形態(tài)學(xué)異?，F(xiàn)象，海馬各區(qū)神經(jīng)元呈圓形、橢圓形或錐形，細(xì)胞核為原型或橢圓形，著色均勻?yàn)闇\藍(lán)紫色，核仁明顯，神經(jīng)元數(shù)量正常；其中錐體細(xì)胞、齒狀回顆粒細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞輪廓于周?chē)M織分界清晰。海馬神經(jīng)元形態(tài)基本完整，分布規(guī)則，數(shù)量無(wú)明顯變化，細(xì)胞核未見(jiàn)明顯異常。此結(jié)果提示硝酸釔90 d暴露不會(huì)對(duì)雌鼠海馬組織造成病理學(xué)改變。

圖5 硝酸釔90 d暴露對(duì)雌鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響(×400)

3 討論

Morris水迷宮由英國(guó)生理學(xué)家Morris于1984年發(fā)明，目的是用于評(píng)估嚙齒動(dòng)物的腦學(xué)習(xí)記憶，目前被廣泛應(yīng)用于評(píng)價(jià)動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)與記憶能力。本研究結(jié)果顯示，定位航行實(shí)驗(yàn)的第4天訓(xùn)練中，與對(duì)照組相比，40、160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠的逃避潛伏期均顯著降低(

P

＜0.05)?？臻g探索實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，40、160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠的穿越原平臺(tái)所在位置次數(shù)、目標(biāo)象限中游泳時(shí)間均顯著升高(

P

＜0.05)，說(shuō)明中、高劑量組雌鼠對(duì)原平臺(tái)所在位置的記憶更加深刻。對(duì)于空間探索實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期，各劑量組雌鼠在不同象限中的停留時(shí)間有所差異。對(duì)照組雌鼠在目標(biāo)象限中停留時(shí)間顯著低于另外兩個(gè)象限，而160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠在目標(biāo)象限中停留時(shí)間顯著高于剩余3個(gè)象限，由此可見(jiàn)對(duì)照組雌鼠對(duì)原平臺(tái)位置的記憶能力低于160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠。本研究結(jié)果提示40、160 mg/(kg·d)劑量的硝酸釔亞慢性暴露可引起雌性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的增強(qiáng)，且隨著暴露劑量的增高，大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力也隨之增高。學(xué)習(xí)和記憶是機(jī)體大腦的復(fù)雜神經(jīng)生理活動(dòng)，而海馬對(duì)于空間記憶的產(chǎn)生與維持具有重要意義。海馬中谷氨酸(Glu)是重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，可以激活突觸后膜上NMDA受體(NMDARs)，此過(guò)程與神經(jīng)元突觸可塑性、學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。一般認(rèn)為，NMDA受體表達(dá)減少可能導(dǎo)致大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的減弱，但本研究結(jié)果顯示，硝酸釔的亞慢性(90 d)暴露促進(jìn)了雌性大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，與對(duì)照組相比，160 mg/(kg·d)劑量組海馬中Glu含量顯著降低，40 mg/(kg·d)劑量組海馬中R2A含量顯著降低(

P

＜0.05)；160 mg/(kg·d)劑量組海馬中R1、R2A含量顯著降低(

P

＜0.05)，因此關(guān)于硝酸釔影響雌性大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制仍需要進(jìn)一步深入研究。另外，近年來(lái)由于NMDA受體過(guò)度活化與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病存在密切關(guān)系，對(duì)開(kāi)發(fā)靶向NMDA受體的藥物一直備受重視。多項(xiàng)研究表明，NMDAR拮抗劑在動(dòng)物已經(jīng)獲得學(xué)習(xí)記憶后給藥，在大鼠進(jìn)行Morris水迷宮訓(xùn)練后，將NMDAR拮抗劑注入大鼠海馬，可以提高大鼠在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中的空間記憶能力。因此，抑制NMDA受體表達(dá)也有可能保護(hù)大鼠對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶能力的維持，但是這與硝酸釔影響雌性大鼠神經(jīng)行為功能的機(jī)制是否有關(guān)，仍需要進(jìn)一步的探索。

本研究根據(jù)OECD424準(zhǔn)則，評(píng)價(jià)硝酸釔對(duì)雌性大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，發(fā)現(xiàn)40、160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力提高，160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠海馬組織中Glu含量與NMDA R1受體蛋白表達(dá)均顯著降低；40、160 mg/(kg·d)劑量組雌鼠海馬組織中NMDA R2A受體蛋白表達(dá)顯著降低，提示硝酸釔亞慢性暴露引起雌性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)的機(jī)制，可能與海馬組織中Glu含量降低、NMDA受體表達(dá)減少有關(guān)。